【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种odorrana livida青蛙改造肽livisin-arg及其在慢性伤口愈合药物中的应用，还涉及了多肽livisin-arg在制备mmp-9抑制剂上的应用，属于生物医学。
技术介绍
1、伤口是对解剖结构和功能造成的任何破坏或伤害，由皮肤等器官的严重破损引起。皮肤在受伤后会发生自我修复，并且是一系列重叠的过程：1)止血；2)炎症；3)迁移和增殖以及4)重塑。在伤口的迁移和增殖阶段，表皮细胞分泌基质金属蛋白酶(mmp)，这是一类细胞外基质(ecm)降解蛋白酶，在角质形成细胞迁移中起关键作用。组织重塑过程与基质金属蛋白酶的组织成熟和胶原降解有关。当正常的修复反应出现异常时，会导致慢性伤口的形成，例如糖尿病足溃疡。糖尿病相关慢性伤口的共同特征是反复感染、血管生成减少、组织上皮受损和ros过多。角质细胞分泌的各种mmp会导致有缺陷的再上皮化。基质金属蛋白酶(mmps)是一类依赖锌的内肽酶家族，可降解细胞外基质(ecm)中的各种蛋白质。在伤口愈合过程中，mmps由不同类型的细胞分泌，如角质形成细胞、成纤维细胞和不同阶段和位置的炎症细胞，从而以非常协调的方式调节这一过程。糖尿病与伤口愈合受损有关，糖尿病皮肤的伤口愈合性能不足，其特点是在未愈合伤口部位的胶原代谢紊乱，并且mmp-9过度表达。因此抑制mmp-9产生或活性成为促进慢性皮肤伤口愈合的重要策略，但目前现有的mmp-9抑制剂不能针对特定的细胞类型抑制mmp-9的表达，存在明显副作用。因此，针对慢性皮肤伤口愈合中高表达的mmp-9，开发特异性地抑制伤口mmp-9活性的
2、宿主防御肽(hdps，host defense peptides)广泛存在于昆虫、植物、动物中，最普遍的是从两栖动物的皮肤中分离出来的，比如青蛙。两栖动物因皮肤没有毛发、麟角的保护，并且生存环境复杂，皮肤极易受损，以特殊的伤口愈合能力而闻名。研究表明，几种多肽在糖尿病慢性伤口中发挥主要功能，例如sr-0379、cw49、hbd-3等。由此，筛选出一种mmp-9抑制剂并且促进慢性伤口愈合的多肽，为应用于皮肤创伤修复和新药开发提供实验依据和理论依据。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种多肽livisin-arg及其作为mmp-9抑制剂的应用，解决皮肤慢性伤口中mmp-9过度表达导致伤口难以愈合的问题。本专利技术制备得到的多肽livisin-arg可起到促进慢性伤口愈合的功能，能够有效抑制mmp-9的活性，促进皮肤角质形成细胞的迁移。
2、为实现上述目的，本专利技术提供了如下技术方案：通过分析odorrana livida宿主防御肽livisin的氨基酸序列，利用氨基酸替换、序列重复等分子改造方法设计获得改造肽livisin-arg的氨基酸序列，利用多肽自动合成仪进行合成，通过hplc反向c18柱层析脱盐纯化，而后采用高效液相色谱法鉴定其纯度、质谱法测定其分子量、自动氨基酸测序仪测定氨基酸序列。所获得改造肽livisin-agr含有17个氨基酸残基，具有6-16位形成一个分子内二硫键的结构特征，显示出典型的环肽结构，分子量为1963.34道尔顿。所述改造肽livisin-arg的氨基酸序列如下所示：
3、gly phe leu arg gly cys trp thr arg ser phe pro pro lys pro cys leu。
4、本专利技术获得的改造肽livisin-agr经过实验研究确定可用于制备促进慢性伤口愈合药物，包括在制备mmp-9抑制剂上的应用。
5、本专利技术具有以下有益效果：提供一种新的具有促进皮肤伤口愈合的宿主防御肽livisin-arg，本专利技术的多肽对慢性皮肤伤口愈合有明显的促进愈合作用，且合成的livisin-agr多肽，具有能够抑制mmp-9的活性的特性，可用于制备mmp-9抑制剂，从而达到促进慢性皮肤伤口愈合的目的，且该改造肽没有细胞毒性，能直接涂覆在伤口处或注射至体内，具有促进促进表皮伤口愈合活性，其效果明显，伤口修复快，且不留疤痕，具有开发作为新靶点新机制的治疗创伤修复药物的潜质。
6、说明书附图
7、图1是本实施例的鉴定odorrana livida青蛙改造肽livisin-arg的质谱图。
8、图2是本实施例的改造肽livisin-arg促进慢性伤口皮肤角质形成细胞迁移结果。
9、图3是本实施例的改造肽livisin-arg抑制mmp-9活性结果。
10、图4是本实施例的改造肽livisin-arg体内促进皮肤伤口愈合结果。
11、图5是本实施例的改造肽livisin-arg体内抑制mmp-9活性结果。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种Odorrana livida青蛙改造肽livisin-Arg，其特征在于：所述改造肽livisin-Agr含有17个氨基酸残基，具有6-16位形成一个分子内二硫键的结构特征，显示出典型的环肽结构，分子量为1963.34道尔顿，所述改造肽的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO：1所示。
2.一种Odorranalivida青蛙改造肽livisin-Arg的制备方法,其特征在于：将Odorranalivida青蛙宿主防御肽livisin序列上的9位Lys突变为Arg，而后通过重复序列的方式对新序列进行一个repeat获得改造肽livisin-Arg的氨基酸序列，并利用多肽固相合成的方法对其进行了化学合成。
3.如权利要求1或2所述的Odorrana livida青蛙改造肽livisin-Arg在制备MMP-9抑制剂药物上的应用，其特征在于，所述MMP-9抑制剂用于抑制MMP-9活性，包括权利要求1～2任一项所述的多肽livisin-Arg。
4.一种包括权利要求1～2任一项所述多肽livisin-Arg或权利要求3所述MMP-9抑制剂，在
...【技术特征摘要】
1.一种odorrana livida青蛙改造肽livisin-arg，其特征在于：所述改造肽livisin-agr含有17个氨基酸残基，具有6-16位形成一个分子内二硫键的结构特征，显示出典型的环肽结构，分子量为1963.34道尔顿，所述改造肽的氨基酸序列如序列表seq id no：1所示。
2.一种odorranalivida青蛙改造肽livisin-arg的制备方法,其特征在于：将odorranalivida青蛙宿主防御肽livisin序列上的9位lys突变为arg，而后通过重复序列的方式...
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。