【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及医疗检测，具体而言，涉及一种偶联crt的超顺磁性氧化铁纳米颗粒及其应用。
技术介绍
1、近年心血管疾病的患病率仍处于持续上升阶段，我国心血管病现患人数3.3亿，其中冠心病1139万。目前，对于该病的治疗仍以及时恢复血流灌注来抢救缺血性心肌为主。心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemia/reperfusion,mi/r)是指缺血或闭塞的冠状动脉经治疗恢复血流灌注后，出现心肌顿抑、心律失常，甚则呈现不可逆性心肌损伤等进行性加重的病理现象。迄今，mi/r的产生机理尚不明确，多数学者认为与氧自由基大量产生、铁死亡、炎性反应、钙离子超载、线粒体功能障碍、细胞凋亡、微血管反应等众多途径及表达相关。随着老龄化加剧，将带来愈发严重的健康和社会问题。
2、目前，mi/r评估的方法大多为间接评估心脏血管灌注及微循环情况，主要分为有创和无创两大类。其中，有创评估方法因导丝价格昂贵、技术要求高而未能大规模开展，无创定量评估技术也存在检测费用昂贵、设备要求过高、对操作者经验要求过高、适用人群有限、对比剂存在肾毒性等各类问题。影像学检查是心肌缺血再灌注诊断有效的手段之一，目前尚缺乏可用于活体的定量、动态、无创、无辐射的连续观察方法。
3、磁粒子成像技术(magnetic particle imaging,mpi)作为一种新型的分子影像技术迅速发展起来，已达到亚毫米空间分辨率、微克量级灵敏度。mpi利用超顺磁氧化铁纳米粒子(superparamagnetic iron oxide nanoparticl
技术实现思路
1、细胞对铁的吸收是由铁结合转铁蛋白(transferrin,tf)及其受体1(transferrinreceptor,tfr1)的结合介导的，它可以诱导网状蛋白依赖性复合物的内吞。专利技术人前期研究表明tfr1可能是特异性和靶向mi/r成像的一个有前途的生物标记物，并发现tfr1与心肌缺血/再灌注损伤相关。
2、基于上述研究，本专利技术提供了一种偶联crt的超顺磁性氧化铁纳米颗粒，所述偶联crt的超顺磁性氧化铁纳米颗粒的制备方法包括如下步骤：
3、(1)油酸修饰的fe3o4纳米粒子的制备；
4、(2)将步骤(1)获得的油酸修饰的fe3o4纳米粒子做聚乙二醇化处理；
5、(3)制备tfr1靶向环形多肽溶液，所述tfr1靶向环形多肽的氨基酸序列如seq idno.1所示；
6、(4)将步骤(2)获得的聚乙二醇化的fe3o4纳米粒子与步骤(3)获得的tfr1靶向环形多肽溶液混合反应，获得所述偶联crt的超顺磁性氧化铁纳米颗粒。
7、具体的，所述步骤(1)中，油酸修饰的fe3o4纳米粒子的制备，包括如下步骤：乙酰丙酮铁、油胺、油酸和二苄基醚在氮气流下搅拌混合，加热至220℃反应1小时；然后升温至300℃并保持10小时；去除残留的油胺、油酸和二苄基醚；然后将其分散在氯仿中，得到油酸修饰的fe3o4纳米粒子溶液。更具体的，所述步骤(1)中，油酸修饰的fe3o4纳米粒子的制备，包括如下步骤：每0.7克乙酰丙酮铁与1.7毫升油胺、2.3毫升油酸和20毫升二苄基醚在氮气流下搅拌混合，并以3.3℃/min的加热速率加热至220℃反应1小时；然后升温至300℃并保持10小时；使用10倍量去离子水超声提取3次，每次1h，滤过，合并滤液，旋蒸浓缩，在-20℃下放置12h后冷冻干燥48h，以去除残留的油胺、油酸和二苄基醚，然后将其分散在10ml氯仿中，得到油酸修饰的fe3o4纳米粒子溶液。
8、所述步骤(2)中，用柠檬酸对油酸修饰的fe3o4纳米粒子做包覆处理，然后加入磷脂聚乙二醇氨基反应；反应结束后，将反应体系加热至80℃保持2小时；对反应产物进行纯化处理。更具体的，所述步骤(2)中，将油酸修饰的fe3o4纳米粒子溶液加入等体积柠檬酸旋蒸浓缩至铁含量为1mg/ml，并用1vol％稀氨溶液将ph调节至11；加入磷脂聚乙二醇氨基振荡反应24小时；将反应体系加热至80℃保持2小时；反应产物使用高速离心机6000rpm离心20min纯化以去除残留柠檬酸、氨溶液和磷脂聚乙二醇氨基。
9、所述步骤(3)中，将tfr1靶向环形多肽溶解于pbs缓冲液中得到所述tfr1靶向环形多肽溶液。更具体的，所述pbs缓冲液ph＝7.4，浓度为0.1ml/l；每1mg所述tfr1靶向环形多肽溶解于100μl dmso中，并添加到900μ1ml所述pbs缓冲液中得到所述tfr1靶向环形多肽溶液。
10、所述步骤(4)中，聚乙二醇化的fe3o4纳米粒子与tfr1靶向环形多肽溶液搅拌反应后，加入超滤管中离心去除未偶联的tfr1靶向环形多肽，纯化后得到偶联crt的超顺磁性氧化铁纳米颗粒。更具体的，所述步骤(4)中，将tfr1靶向环形多肽溶液与聚乙二醇化的fe3o4纳米粒子溶液混匀，并在室温下搅拌3小时；将混合物加入30kd超滤管中6000rpm离心30分钟去除未偶联的crt，纯化后得到偶联crt的超顺磁性氧化铁纳米颗粒。
11、本专利技术还提供一种前述的偶联crt的超顺磁性氧化铁纳米颗粒在制备心脏损伤磁纳米粒子/核磁共振双模态成像对比剂中的应用。
12、本专利技术的有益效果包括：
13、本专利技术提供了一种偶联crt的超顺磁性氧化铁纳米颗粒，其中的tfr1靶向环形多肽(crt)可以通过非经典配体导向机制与tf和tfr1相互作用，并能在mi/r组织中高水平积累。该偶联crt的超顺磁性氧化铁纳米颗粒可用于制备心脏损伤磁纳米粒子/核磁共振双模态成像对比剂，其生物安全性高、借助新型分子影像技术，可建立适用于活体的定量、动态、无创、无辐射的磁纳米粒子成像技术平台及方法学体系，客观实现对mi/r损伤的实时、定量评估。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种偶联CRT的超顺磁性氧化铁纳米颗粒，其特征在于，所述偶联CRT的超顺磁性氧化铁纳米颗粒的制备方法包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的偶联CRT的超顺磁性氧化铁纳米颗粒，其特征在于，所述步骤(1)中，油酸修饰的Fe3O4纳米粒子的制备，包括如下步骤：乙酰丙酮铁、油胺、油酸和二苄基醚在氮气流下搅拌混合，加热至220℃反应1小时；然后升温至300℃并保持10小时；去除残留的油胺、油酸和二苄基醚；然后将其分散在氯仿中，得到油酸修饰的Fe3O4纳米粒子溶液。
3.根据权利要求2所述的偶联CRT的超顺磁性氧化铁纳米颗粒，其特征在于，所述步骤(1)中，油酸修饰的Fe3O4纳米粒子的制备，包括如下步骤：每0.7克乙酰丙酮铁与1.7毫升油胺、2.3毫升油酸和20毫升二苄基醚在氮气流下搅拌混合，并以3.3℃/min的加热速率加热至220℃反应1小时；然后升温至300℃并保持10小时；使用10倍量去离子水超声提取3次，每次1h，滤过，合并滤液，旋蒸浓缩，在-20℃下放置12h后冷冻干燥48h，以去除残留的油胺、油酸和二苄基醚，然后将其分散在10mL氯仿中，得到油酸修
4.根据权利要求1所述的偶联CRT的超顺磁性氧化铁纳米颗粒，其特征在于，所述步骤(2)中，用柠檬酸对油酸修饰的Fe3O4纳米粒子做包覆处理，然后加入磷脂聚乙二醇氨基反应；反应结束后，将反应体系加热至80℃保持2小时；对反应产物进行纯化处理。
5.根据权利要求4所述的偶联CRT的超顺磁性氧化铁纳米颗粒，其特征在于，所述步骤(2)中，将油酸修饰的Fe3O4纳米粒子溶液加入等体积柠檬酸旋蒸浓缩至铁含量为1mg/mL，并用1vol％稀氨溶液将pH调节至11；加入磷脂聚乙二醇氨基振荡反应24小时；将反应体系加热至80℃保持2小时；反应产物使用高速离心机6000rpm离心20min纯化以去除残留柠檬酸、氨溶液和磷脂聚乙二醇氨基。
6.根据权利要求1所述的偶联CRT的超顺磁性氧化铁纳米颗粒，其特征在于，所述步骤(3)中，将TfR1靶向环形多肽溶解于PBS缓冲液中得到所述TfR1靶向环形多肽溶液。
7.根据权利要求6所述的偶联CRT的超顺磁性氧化铁纳米颗粒，其特征在于，所述PBS缓冲液pH＝7.4，浓度为0.1ml/L；每1mg所述TfR1靶向环形多肽溶解于100μLDMSO中，并添加到900μL所述PBS缓冲液中得到所述TfR1靶向环形多肽溶液。
8.根据权利要求7所述的偶联CRT的超顺磁性氧化铁纳米颗粒，其特征在于，所述步骤(4)中，聚乙二醇化的Fe3O4纳米粒子与TfR1靶向环形多肽溶液搅拌反应后，加入超滤管中离心去除未偶联的TfR1靶向环形多肽，纯化后得到偶联CRT的超顺磁性氧化铁纳米颗粒。
9.根据权利要求8所述的偶联CRT的超顺磁性氧化铁纳米颗粒，其特征在于，所述步骤(4)中，将TfR1靶向环形多肽溶液与聚乙二醇化的Fe3O4纳米粒子溶液混匀，并在室温下搅拌3小时；将混合物加入30kD超滤管中6000rpm离心30分钟去除未偶联的CRT，纯化后得到偶联CRT的超顺磁性氧化铁纳米颗粒。
10.权利要求1-9所述的偶联CRT的超顺磁性氧化铁纳米颗粒在制备心脏损伤磁纳米粒子/核磁共振双模态成像对比剂中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种偶联crt的超顺磁性氧化铁纳米颗粒，其特征在于，所述偶联crt的超顺磁性氧化铁纳米颗粒的制备方法包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的偶联crt的超顺磁性氧化铁纳米颗粒，其特征在于，所述步骤(1)中，油酸修饰的fe3o4纳米粒子的制备，包括如下步骤：乙酰丙酮铁、油胺、油酸和二苄基醚在氮气流下搅拌混合，加热至220℃反应1小时；然后升温至300℃并保持10小时；去除残留的油胺、油酸和二苄基醚；然后将其分散在氯仿中，得到油酸修饰的fe3o4纳米粒子溶液。
3.根据权利要求2所述的偶联crt的超顺磁性氧化铁纳米颗粒，其特征在于，所述步骤(1)中，油酸修饰的fe3o4纳米粒子的制备，包括如下步骤：每0.7克乙酰丙酮铁与1.7毫升油胺、2.3毫升油酸和20毫升二苄基醚在氮气流下搅拌混合，并以3.3℃/min的加热速率加热至220℃反应1小时；然后升温至300℃并保持10小时；使用10倍量去离子水超声提取3次，每次1h，滤过，合并滤液，旋蒸浓缩，在-20℃下放置12h后冷冻干燥48h，以去除残留的油胺、油酸和二苄基醚，然后将其分散在10ml氯仿中，得到油酸修饰的fe3o4纳米粒子溶液。
4.根据权利要求1所述的偶联crt的超顺磁性氧化铁纳米颗粒，其特征在于，所述步骤(2)中，用柠檬酸对油酸修饰的fe3o4纳米粒子做包覆处理，然后加入磷脂聚乙二醇氨基反应；反应结束后，将反应体系加热至80℃保持2小时；对反应产物进行纯化处理。
5.根据权利要求4所述的偶联crt的超顺磁性氧化铁纳米颗粒，其特征在于，所述步骤(2)中，将油酸修饰的fe3o4纳米粒子溶液加入...
【专利技术属性】
技术研发人员：龙霖梓，付长庚，杨文文，王玥琦，曲华，李洪峥，汪晶晶，
申请(专利权)人：中国中医科学院西苑医院，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。