【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及免疫学领域、化学发光分析、新冠抗体检测和多组分免疫分析等领域，具体涉及了一种基于三金属cocufe-mof纳米酶的无标记型多元化学发光成像免疫阵列传感器。
技术介绍
1、化学发光免疫分析法结合了化学发光的高灵敏度和免疫分析的高特异性，是一种新型免疫测定技术。现在的分析检测大多只针对于单一的标志物。染而，单一标志物的特异性有限，结果容易出现误差，所以用于分析血清样品中一组标志物的多重免疫测定法引起了广泛关注。其中，将化学发光阵列和电荷耦合器件(ccd)结合起来作为检测器，可以同时检测同一底物上不同免疫反应区域中的靶标，分析结果更加准确可靠，进而实现多组分的有效检测。多元标志物的分析可以采取标记型和无标记型两种方法，相比于标记型，无标记型，不仅无需预先标记、流程简单，还可以节约时间、减少试剂的消耗量。
2、传统化学发光检测分析运用到的天然酶因其成本高、稳定性低，发展不可避免地受到了限制。为此，将纳米酶应用于免疫分析已成为新的研究趋势。由有机配体和金属离子构成的金属有机骨架是酶模拟物的理想候选者，各种有机连接基团的可用性，使得mof纳米酶能够根据需要对结构进行调控。鉴于其永久的孔隙率，大的比表面积，可调的孔径和可定制的孔功能，开发具有过氧化物酶活性的mof纳米酶用于生物传感成为了研究热潮。与单金属、双金属配位结构相比，三金属mof纳米酶由于其催化中心数量增加，具有更好的催化性能和稳定性。
3、因此本专利技术的目的是提供一种基于三金属cocufe-mof纳米酶的无标记型多元化学发光成像免疫阵列传感器
技术实现思路
1、本专利技术提供了一种基于三金属cocufe-mof纳米酶的无标记型多元化学发光成像免疫阵列传感器。将cocufe-mof纳米酶和壳聚糖溶液均匀混合后包埋于环氧基活化载体片的免疫微孔阵列，接着利用链霉亲和素-生物素的信号放大作用固定多种抗体，用牛血清蛋白bsa封闭非特异性位点后，温育相应的抗原，即制得无标记型化学发光成像免疫阵列传感器，实现高灵敏、低成本、简单快速的多组分检测。
2、进一步地，本专利技术提供了一种基于三金属cocufe-mof纳米酶的无标记型多元化学发光成像免疫阵列传感器地制备方法，包括以下步骤：
3、(1)在水虎鱼酸中放入可抛式载玻片浸泡12小时使其表面暴露羟基，用去离子水重复冲洗直至去除多余的水虎鱼酸，自然晾干。而后将其放入含有1％ gptms的甲苯溶液中静置12小时，按照甲苯、乙醇的顺序依次冲洗，去除表面多余的硅烷化试剂，可用氮气吹干表面负载的液体；
4、(2)利用丝网印刷技术并借助模板在可抛式的环氧硅烷化载玻片上印刷形成4排12列共48个微孔的免疫阵列；
5、(3)制备cocufe-mof纳米酶；
6、(4)将(3)得到的cocufe-mof溶于去离子水中形成混合溶液，而后与壳聚糖溶液等体积混合并震荡均匀，将壳聚糖-cocufe-mof混合液依次滴入阵列微孔，在室温下自然晾干即可得到传感薄膜；
7、(5)作为纳米酶和抗体的连接体，滴入链酶亲和素，室温下温育半小时后，置于4℃冰箱晾干；
8、(6)取生物素化抗体滴入阵列中的任意两排，于4℃环境下保鲜密封3h，接着用磷酸盐缓冲溶液冲掉未结合的抗体，在氮气氛围中吹干；
9、(7)将牛血清蛋白bsa封闭缓冲液滴入各微孔中，保鲜密封12h，从而避免非特异性吸附。用磷酸缓冲溶液缓慢冲洗并在氮气氛围下吹干后，即制得该无标记型多元化学发光成像免疫阵列传感器。
10、进一步地，步骤(1)中水虎鱼酸溶液是由体积比为7：3的浓硫酸和过氧化氢溶液混合均匀配置而成。
11、进一步地，步骤(2)中借助模版印刷，将具有疏水作用的绝缘油漆均匀地刷在载玻片表面，形成疏水性无光活性膜，膜内微孔直径2mm，边缘间距4mm。
12、进一步地，步骤(3)中cocufe-mof纳米酶通过如下方法制备：
13、(a)称量0.1933g cu(no3)2·3h2o、0.3492g co(no3)2·6h2o、0.2424g fe(no3)3·9h2o和0.015g ctab，将四种原料共同加到20ml的超纯水中，在确保剧烈的情况下搅拌1小时。
14、(b)在140ml的去离子水中加入9.08g的2-甲基咪唑，混合均匀后滴入上述溶液，搅拌10min。
15、(c)离心收集，用乙醇清洗三次后，放在室温下进行干燥，即制得三金属cocufe-mof纳米酶。
16、进一步地，步骤(4)中三金属cocufe-mof纳米酶的浓度为2mg/ml，壳聚糖浓度为1.0wt％。
17、进一步地，步骤(5)中链霉亲和素溶液浓度为200μg/ml。
18、进一步地，步骤(6)中生物素化抗体的浓度为4μg/ml。
19、进一步地，步骤(7)中牛血清蛋白bsa封闭溶液的浓度为0.01g/ml。
20、上述cocufe-mof纳米酶，尺寸大小约为500nm，呈现球形。该材料的合成方法简单且不易受环境影响，其比表面积大、类酶活性好，能大大改善天然酶纯化成本高，易受环境影响等固有的缺陷。相比于单金属co-mof、单金属cu-mof和双金属cocu-mof，该三金属cocufe-mof纳米酶构建的化学发光免疫传感器，其发光强度高并且灵敏度和稳定性大大提升。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种基于三金属CoCuFe-MOF纳米酶的无标记型多元化学发光成像免疫阵列传感器，其特征在于，以双金属CoCu-MOF为原始合成模板，通过掺杂另一种金属元素Fe制备三金属CoCuFe-MOF纳米酶；将CoCuFe-MOF纳米酶引入化学发光阵列，逐级修饰抗体，用牛血清蛋白BSA封闭非特异性位点后，温育相应的抗原，制得基于三金属CoCuFe-MOF纳米酶的无标记型多元化学发光成像免疫阵列传感器。
2.根据权利要求1所述的基于三金属CoCuFe-MOF纳米酶的无标记型多元化学发光成像免疫阵列传感器，其特征在于，环氧基活化载体片的免疫微孔阵列是利用丝网印刷技术并借助模板在可抛式的环氧硅烷化载玻片上印刷形成4排12列共48个微孔的免疫阵列。
3.根据权利要求1所述的基于三金属CoCuFe-MOF纳米酶的无标记型多元化学发光成像免疫阵列传感器，其特征在于，所述三金属CoCuFe-MOF纳米酶的制备方法，包括以下步骤：
4.一种制备如权利要求1～3任一所述基于三金属CoCuFe-MOF纳米酶的无标记型多元化学发光成像免疫阵列传感器，其特征在于，其通过以下
5.根据权利要求4所述基于三金属CoCuFe-MOF纳米酶的无标记型多元化学发光成像免疫阵列传感器，其特征在于，步骤(1)中，丝网印刷环氧硅烷化载玻片的制备方法：
6.根据权利要求4所述基于三金属CoCuFe-MOF纳米酶的无标记型多元化学发光成像免疫阵列传感器，其特征在于，步骤(2)中，三金属CoCuFe-MOF纳米材料的浓度为2mg/mL，壳聚糖浓度为1.0wt％。
7.根据权利要求4所述基于三金属CoCuFe-MOF纳米酶的无标记型多元化学发光成像免疫阵列传感器，其特征在于，步骤(3)中，链霉亲和素溶液浓度为200μg/mL。
8.根据权利要求4所述基于三金属CoCuFe-MOF纳米酶的无标记型多元化学发光成像免疫阵列传感器，其特征在于，步骤(4)中，生物素化抗体的浓度为4μg/mL。
9.根据权利要求4所述基于三金属CoCuFe-MOF纳米酶的无标记型多元化学发光成像免疫阵列传感器，其特征在于，步骤(5)中，牛血清蛋白BSA封闭溶液的浓度为0.01g/mL。
...【技术特征摘要】
1.一种基于三金属cocufe-mof纳米酶的无标记型多元化学发光成像免疫阵列传感器，其特征在于，以双金属cocu-mof为原始合成模板，通过掺杂另一种金属元素fe制备三金属cocufe-mof纳米酶；将cocufe-mof纳米酶引入化学发光阵列，逐级修饰抗体，用牛血清蛋白bsa封闭非特异性位点后，温育相应的抗原，制得基于三金属cocufe-mof纳米酶的无标记型多元化学发光成像免疫阵列传感器。
2.根据权利要求1所述的基于三金属cocufe-mof纳米酶的无标记型多元化学发光成像免疫阵列传感器，其特征在于，环氧基活化载体片的免疫微孔阵列是利用丝网印刷技术并借助模板在可抛式的环氧硅烷化载玻片上印刷形成4排12列共48个微孔的免疫阵列。
3.根据权利要求1所述的基于三金属cocufe-mof纳米酶的无标记型多元化学发光成像免疫阵列传感器，其特征在于，所述三金属cocufe-mof纳米酶的制备方法，包括以下步骤：
4.一种制备如权利要求1～3任一所述基于三金属cocufe-mof纳米酶的无标记型多元化学发光成像免疫阵列传感器，...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨占军，彭茂盈，石凤，夏艳平，李娟，
申请(专利权)人：无锡艾瑞康得生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。