一种藜麦miRNAs提取物及其制备方法和应用技术

技术编号：40904033 阅读：2 留言：0更新日期：2024-04-18 14:35

本发明专利技术提供一种藜麦miRNAs提取物的制备方法及其在抗肿瘤相关医药产品中的应用，属于生物医药领域。藜麦miRNAs提取物的制备方法为：将纯天然藜麦研磨成粉末，加入超纯水，沸水浴一段时间后，获得藜麦浓缩液；将该浓缩液按照植物miRNA试剂盒的提取方法进行制备，获得藜麦miRNAs提取物，命名为：cqu‑miRNAs。通过体外肿瘤细胞模型，发现：藜麦源cqu‑miRNAs能够显著抑制结肠癌细胞增殖，诱导结肠癌细胞凋亡；采用裸鼠异体移植瘤模型，进一步证实cqu‑miRNAs在动物体内也能显著抑制结肠癌肿瘤的生长。本发明专利技术为藜麦cqu‑miRNAs能够跨界发挥抗肿瘤活性提供实验依据，同时也为植物miRNAs在核酸药物方面的研发应用奠定理论基础。

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【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种藜麦mirnas提取物的制备方法及其在抗肿瘤相关医药产品中的应用。

技术介绍

1、结直肠癌(colorectal cancer，crc)是消化道常见的恶性肿瘤，通常发生于结肠和直肠。根据2022年中国癌症的最新统计显示，结肠癌在中国癌症中发病率排名第二、死亡率排名第四，严重威胁人类健康。目前治疗结肠癌的传统手段早期主要以手术治疗为主，后期辅助以化疗、放疗等，但副作用大且容易复发，因此研发高效、低毒的新型抗结肠癌药物迫在眉睫。核酸药物是利用核酸小分子与靶向的mrna结合，特异性沉默疾病基因的表达，以治疗特定疾病的药物，包括小干扰rna(small interfering rna；sirna)、反义寡核苷酸药物(antisense oligonucleotides，asos)和靶向微小rna(microrna，mirna)等。与传统的小分子药物和抗体药物相比，核酸药物具有设计简便、研发周期短、靶向特异性强、治疗领域广泛和长效性等优点，具有广阔的临床应用前景。目前，全球在研的小核酸药物近500种，并且已有一些应用于临床，如：含18个核苷酸的nusinersen用于治疗脊髓性肌萎缩症，于2016年在美国fda获批上市；inclisiran是化学修饰合成的双链小核酸(sirna)，已成为治疗严重高胆固醇血症的新药物，于2020年获ema批准上市。因此，小核酸药物未来有望成为继小分子药物和抗体药物之后的第三大类药物。

2、micrornas(mirnas)是一类在动物、植物和病毒之间进化相

3、藜麦(学名：chenopodium quinoa willd.)是藜科藜属植物。藜麦资源品质佳、规模化种植面积广，富含多种植物活性物质，如：蛋白、萜类、黄酮类、甾醇类等，在调节机体免疫、抗癌和抗炎等方面都表现出较强的生物学效应，是联合国粮农组织唯一认定的完美营养食品，具有很好的健康功效。但是目前关于藜麦中mirnas在抗肿瘤方面的研究尚未见报道。本专利技术首次从藜麦中制备了具有显著抗肿瘤功效的mirnas提取物(cqu-mirnas)，为其能够跨界调控发挥抗肿瘤的生物学功效提供实验依据，同时也为藜麦mirnas在核酸药物方面的研发应用奠定理论基础。

技术实现思路

1、本专利技术的目的在于提供一种藜麦mirnas提取物(cqu-mirnas)的制备方法，及该提取物在抗肿瘤相关医药产品中的应用。

2、本专利技术的上述目的是通过以下技术方案实现的：

3、第一步：将纯天然藜麦研磨成粉末，按一定的比例加入适量的超纯水，沸水浴孵育30-50min，浓缩到一定体积，获得藜麦浓缩液。

4、所述的藜麦mirnas的制备方法，其特征在于，所述的藜麦和超纯水重量体积比为1︰5-7，且藜麦浓缩液浓缩的体积为50-70ml；

5、第二步：将上述藜麦浓缩液按照m5 plant microrna extraction kit试剂盒的提取方法，制备得到藜麦mirnas提取物，命名为：cqu-mirnas。具体如下：

6、取上述藜麦浓缩液，按比例加入一定量的clb裂解液至离心管中，吹打混匀，置于65℃水浴中孵育10-15min，期间颠倒2-3次；充分裂解后，13,000rpm离心10min；取上清置于dna清除柱中，13,000rpm离心60s，收集滤液；加入1.25倍体积的无水乙醇，立即吹打混匀，转移到rna吸附柱中，13,000rpm离心30s，弃掉废液；在吸附柱中依次加入wash solution1、wash solution 2/3溶液进行洗涤，弃掉废液；将rna吸附柱放回收集管中，13,000rpm离心2min，再将吸附柱放入rnase free离心管中，室温放置2min，加入60μl rnase free water，室温放置1min，12,000rpm离心1min，重复洗脱步骤，获得藜麦mrnas提取物，命名：cqu-mirnas，于-80℃保存备用。

7、所述的藜麦浓缩液和clb裂解液的体积比为1：1.5-2.5；

8、本专利技术制备的藜麦mirnas的提取物(cqu-mirnas)，经体外抗肿瘤活性检测显示，该cqu-mirnas可显著抑制结肠癌细胞ht-29和dld1的增殖，诱导ht-29和dld1细胞凋亡；采用裸鼠异体移植瘤模型，进一步证明cqu-mirnas在体内也能够显著抑制结肠癌肿瘤生长。表明：cqu-mirnas具有跨界发挥抗肿瘤活性的功效，有潜力开发为抗肿瘤相关医药产品。

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【技术保护点】

1.一种具有抗肿瘤活性的藜麦miRNAs提取物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.如权利要求1所述的藜麦miRNAs的制备方法，其特征在于，第一步中所述的藜麦和超纯水重量体积比为1：5-7，且藜麦浓缩液浓缩的体积为50-70mL；第二步中所述的藜麦浓缩液和CLB裂解液的体积比为1：1.5-2.5。

3.如权利要求1-2任一所述方法制备的具有抗肿瘤活性的藜麦miRNAs提取物。

4.如权利要求3所述的藜麦miRNAs提取物在制备抗肿瘤药物中的应用。

5.如权利要求4所述的应用，所述的肿瘤为结肠癌。

【技术特征摘要】

1.一种具有抗肿瘤活性的藜麦mirnas提取物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.如权利要求1所述的藜麦mirnas的制备方法，其特征在于，第一步中所述的藜麦和超纯水重量体积比为1：5-7，且藜麦浓缩液浓缩的体积为50-70ml；第二步中所述的藜麦浓缩液和c...

【专利技术属性】
技术研发人员：单树花，许艳霞，李卓玉，史江颖，任敏，
申请(专利权)人：山西大学，
类型：发明
国别省市：

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