猪瘟病毒疫苗及其生产方法技术

本发明专利技术公开了一种以细胞微载体悬浮培养系统制备猪瘟（ＣＳＦ）疫苗的方法，包括如下步骤：（１）将制苗用细胞接种到含有培养液与微载体的载体罐中，并将上述细胞与微载体混合均匀，使细胞贴附在微载体上；（２）待细胞数增至５～４０倍初始接种浓度时，以病毒感染复数（Ｍ．Ｏ．Ｉ．）为０．０１～１的比例，将猪瘟病毒（兔化弱毒株）接种至细胞上，繁殖病毒；（３）将制得的病毒液混合，加入适当冻干保护剂，充分混匀后定量分装，冻干，即得到猪瘟（ＣＳＦ）疫苗。以本发明专利技术方法生产猪瘟疫苗具有培养的细胞密度高、可连续培养和病毒产量高、疫苗免疫效力高、安全性好等优点，对猪瘟强毒攻击有完全的免疫保护作用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物制品
，涉及一种。
技术介绍
猪瘟(ClassicalSwine fever，简称 CSF)又称为猪霍乱(Hog cholera)或欧洲 型猪瘟(European swine fever)，是一种猪只急性或超急性发热的病毒传染性疾病，临床 上的特征是散播迅速、发烧，解剖检验时可看到典型的出血病变。猪瘟可感染各种年龄的猪 只，一年四季流行，发病率和死亡率均高，对猪只危害极大。本病是威胁养猪业最重要的传 染病之一。世界动物卫生组织(0IE)将猪瘟列为A类16种法定传染病之一，中国则定为一 类烈性传染病。许多国家和地区使用猪瘟活毒疫苗强制接种免疫，也是目前防治猪瘟的最佳方 法。目前猪瘟(CSF)疫苗的生产方法有以下几种(1)组织苗法即以猪瘟病毒(兔化 弱毒株)接种家兔，然后收集家兔的脾脏和淋巴结生产猪瘟脾淋苗；(2)原代牛睾丸细胞苗 法即采集初生小牛睾丸，经过EDTA-胰酶消化分散细胞，用转瓶培养系统培养，生产细胞 疫苗；(3)细胞系法用细胞系(例如ST)经过EDTA-胰酶消化分散细胞，用转瓶培养系统 培养，得到猪瘟兔化弱毒疫苗，收获细胞病毒液，加适宜稳定剂，经本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种猪瘟疫苗的生产方法，其特征在于，包括如下步骤：１）微载体生物反应器中，加入微载体、传代细胞与细胞生长液，启动细胞吸附程序，使微载体与传代细胞充分结合后，启动细胞培养程序，培养传代细胞。其中微载体密度为３０～６０ｇ／Ｌ，传代细胞密度为１．６×１０７～３．２×１０↑［７］ｃｅｌｌｓ／ｇ微载体；２）上述传代细胞培养至４×１０↑［１０］ｃｅｌｌｓ／Ｌ～３．２×１０↑［１１］ｃｅｌｌｓ／Ｌ时换用细胞维持液，按照感染复数为Ｍ．Ｏ．Ｉ．＝０．０１～１接种猪瘟病毒，启动病毒吸附程序，使病毒与传代细胞充分接触，换用病毒培养程序，扩增猪瘟病毒；３）病毒培养２～５天后，收获病毒液，获得猪瘟病毒，４℃保存；４）收...

【技术特征摘要】
CN 2010-1-28 201010102031.X一种猪瘟疫苗的生产方法，其特征在于，包括如下步骤1)微载体生物反应器中，加入微载体、传代细胞与细胞生长液，启动细胞吸附程序，使微载体与传代细胞充分结合后，启动细胞培养程序，培养传代细胞。其中微载体密度为30～60g/L，传代细胞密度为1.6×107～3.2×107cells/g微载体；2)上述传代细胞培养至4×1010cells/L～3.2×1011cells/L时换用细胞维持液，按照感染复数为M.O.I.＝0.01～1接种猪瘟病毒，启动病毒吸附程序，使病毒与传代细胞充分接触，换用病毒培养程序，扩增猪瘟病毒；3)病毒培养2～5天后，收获病毒液，获得猪瘟病毒，4℃保存；4)收获的病毒液，纯化后加入冻干保护剂，制得猪瘟疫苗。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述生物反应器为微载体悬浮培养生物 反应器。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述生物反应器为为潮汐式微载体悬浮 培养生物反应器。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述微载体为球形、网状或片状；所述微 载体的成分为聚酯、明胶或多糖。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤1)中所述细胞生长液为含羊血清或牛 血清的DMEM培养基。6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤2)中所述细胞维持液为含羊血清或牛 血清的DMEM培养基。7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)中所述细胞生长液为含3% 15%羊血清或牛血清的DMEM培养基。8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)中所述细胞维持液为含 5% 羊血清或牛血清的DMEM培养基。9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述微载体生物反应器的培养条件为温 度34°C 37°C，CO2浓度为2. 5% 5%，培养液pH值为7. 0 7. 6。10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤1)中所述的细胞贴附程...

【专利技术属性】
技术研发人员：张许科，孙进忠，乔荣岑，
申请(专利权)人：洛阳普莱柯生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：41[中国|河南]