【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种子痫前期孕鼠模型及其构建方法与应用。
技术介绍
1、子痫前期(pe)是一种严重的妊娠并发症，在妊娠20周后出现，主要以高血压为主要症状，并伴有多种终末脏器损伤。它影响全球范围内2％—4％的妊娠，并且对孕妇及新生儿的远期生存质量有严重影响，例如增加了母亲及孩子罹患心血管疾病和神经系统疾病的概率。尽管有许多研究致力于探讨子痫前期的发病机制、危险因素和治疗方法，但对于已经发生的子痫前期，目前除了终止妊娠娩出胎盘外，尚无有效的根治性治疗方法可用。因此在妊娠早期对疾病进行预测并且干预在子痫前期诊疗策略中扮演着十分重要的地位，虽然当前已有多项研究提出胎盘生长因子(plgf)、fms样酪氨酸激酶-1(sflt-1)等多种子痫前期生物标记物，但其精确性及可普及性仍然有待提高。
2、研究指出，子痫前期的发病机制可分为两个阶段。第一阶段是临床前期，即由多种因素导致胎盘缺血缺氧，第二阶段是胎盘缺血缺氧引起胎盘和滋养细胞处于应激状态，释放如肿瘤坏死因子α、白介素1β等促炎细胞因子以及sflt-1等抗血管生成因子进入母体循环系统，从而引起广泛的血管收缩、血管内皮损伤等子痫前期症状。值得注意的是，子痫前期的严重程度很大程度上取决于疾病发生的时程和病理改变的严重程度，因此，妊娠早期母胎界面的稳态成为子痫前期研究的关键点。
3、妊娠早期母胎界面免疫环境紊乱是子痫前期发病的重要病理基础，而螺旋动脉重铸障碍是该复杂病理进程的结果。在正常妊娠过程中，滋养细胞逐步取代螺旋动脉血管壁上的平滑肌细胞和内皮细胞
4、第一种方法是通过手术构建胎盘缺血模型，该模型主要用于研究胎盘缺血与母体综合征之间的关系。较为成熟的方法是通过外科手术结扎大鼠的大动脉，从而阻断大鼠子宫的血供，形成慢性子宫胎盘灌注压降低(rupp)大鼠模型和基于其改良的选择性rupp模型。这些模型已被证明是有效的工具，主要用于研究由胎盘缺血缺氧引起的一系列临床改变的机制。然而，这些模型仅模拟胎盘缺血缺氧的状态，因此对于研究螺旋动脉重铸异常所涉及的机制以及妊娠早期发病机制的研究提供的参考有限；
5、第二种方法是转基因操作，其中常见的转基因鼠包括hangiotensinogen雌性与hrenin雄性转基因鼠、bph5小鼠、中风倾向自发性高血压大鼠(shrsp)、enos基因敲除小鼠和白介素10缺陷小鼠等。然而，转基因鼠难以完全模拟人类疾病的复杂性和多样性。此外，制作和维护转基因鼠需要大量的成本和时间，并对实验室设施和专业技术要求较高，这在一定程度上限制了转基因鼠的应用；
6、第三种方法是化学注射法，基于多种子痫前期疾病机制，通过腺病毒注射、药物输注和药物饲养等手段构建子痫前期孕鼠模型是目前应用最广泛的造模方法。常见的方法包括以免疫激活和细胞因子为干预手段的肿瘤坏死因子α、白介素6、子痫前期孕妇纯化igg输注等；以螺旋动脉重铸障碍为目的的sflt-1、seng(可溶性内皮糖蛋白)、hif-1α(缺氧诱导因子-1α)腺病毒等大鼠模型；以内皮功能障碍为目的输注l-name、at1-aa(血管紧张素ii i型受体激动性自身抗体)等试剂构建的子痫前期孕鼠模型。化学注射法可以构建更接近人类疾病的模型，并具有较高的可控性。然而，需要注意的是内皮功能障碍是子痫前期一系列病理改变的最终结果。因此，该操作方式未能很好地模拟子痫前期完整的疾病过程。免疫激活和细胞因子可能引起多种生理和病理反应，这些反应可能与子痫前期症状有重叠。因此，基于螺旋动脉重铸障碍的干预目的构建的子痫前期孕鼠模型具有较高的科学意义，能够涵盖疾病发生发展的全过程，且腺病毒操作具有较高的实用性。因此，有必要开发更精准的腺病毒子痫前期孕鼠模型，以实现对螺旋动脉重铸的精准干预。
7、滋养层糖蛋白(trophoblast glycoprotein，tpbg)是一种被发现在人类胎盘滋养层的膜蛋白，在胎盘发育和正常功能运作中扮演着重要角色。目前针对tpbg的研究多集中于肿瘤领域，多项研究发现tpbg的过表达与肿瘤的恶性程度、不良预后和药物耐性等因素相关，但目前尚未有研究深入探讨tpbg在子痫前期发病机制中的作用及临床实践中的应用。
技术实现思路
1、针对上述子痫前期模型的不足、转基因模型繁琐高昂的缺点以及子痫前期缺乏特异性的生物标记物等一系列问题，本专利技术进行了如下实验：(1)使用腺病毒注射方法构建tpbg过表达子痫前期孕鼠模型，并将其应用于子痫前期机制的研究。(2)采用免疫组织化学法、免疫印迹法、免疫荧光法、酶联免疫吸附法、苏木精-伊红染色法、蛋白组学测序以及其他适用的生物检测方法，评估tpbg过表达对孕鼠的影响以及孕鼠蜕膜和子宫浅肌层的螺旋动脉重铸情况。(3)使用sprague-dawley大鼠(sd大鼠)作为实验模型。(4)使用单克隆抗体和多克隆抗体。(5)腺病毒注射方式为尾静脉注射。(6)使用孕妇妊娠晚期的蜕膜组织样本进行tpbg的定量。(7)使用妊娠早期正常妊娠及子痫前期孕妇血液样本进行tpbg、plgf、ftl、papp-a定量实验分析。(8)记录相对应受检产妇的家族史、map、utpi、体重、身高、年龄、孕产史等临床信息以供进一步临床分析。(9)使用逻辑回归，正则化分析方法(最优子集法、lasso回归分析、交叉验证)对指标进行筛选。
2、本专利技术基于tpbg过表达状态下可高度还原疾病病理生理过程，提供了全新的动物模型和相对应的阻断方法，为子痫前期及螺旋动脉重铸障碍的发病机制研究提供了新的参考和借鉴。与此同时，我们评估了tpbg对子痫前期的诊断价值，为子痫前期的诊断提供新的参考。
3、本专利技术的首要目的是提供一种基于腺病毒注射构建tpbg过表达子痫前期孕鼠模型的方法。
4、本专利技术的第二个目的在于提供上述基于腺病毒注射构建tpbg过表达子痫前期孕鼠模型的方法的应用。
5、本专利技术的第三个目的在于提供定量tpbg的物质在制备子痫前期诊断试剂盒中的应用。
6、本专利技术的目的通过如下技术方案实现：
7、一种基于腺病毒注射构建tpbg过表达子痫前期孕鼠模型的方法，于大鼠妊娠期注射tpbg基因过表达腺病毒，通过监测其血本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种基于腺病毒注射构建TPBG过表达子痫前期孕鼠模型的方法，其特征在于：于大鼠妊娠期注射TPBG基因过表达腺病毒，通过监测其血压、尿蛋白、生化指标和主要脏器病理改变来确定模型构建是否成功。
2.根据权利要求1所述的基于腺病毒注射构建TPBG过表达子痫前期孕鼠模型的方法，其特征在于：
3.权利要求1中所述的方法在筛选子痫前期治疗候选药物中的应用。
4.权利要求1中所述的方法在子痫前期发生发展机制研究中的应用。
5.检测样本中标志物表达水平的试剂在制备子痫前期诊断产品中的应用，其特征在于：
6.检测样本中标志物表达水平的试剂在制备子痫前期诊断产品中的应用，其特征在于：
7.一种子痫前期诊断试剂盒，其特征在于：包括权利要求6中所述的检测样本中标志物表达水平的试剂。
8.一种子痫前期预测模型的训练方法，其特征在于：获取训练样本的标志物的表达水平及其对应的标注结果；其中，所述标志物为权利要求5中所述的标志物，所述标注结果为代表样本子痫前期的患病风险；
9.一种子痫前期预测装置，其特征在于：包
10.一种子痫前期预测系统，其特征在于：包括检测装置和权利要求9中所述的子痫前期预测装置；其中：
...【技术特征摘要】
1.一种基于腺病毒注射构建tpbg过表达子痫前期孕鼠模型的方法，其特征在于：于大鼠妊娠期注射tpbg基因过表达腺病毒，通过监测其血压、尿蛋白、生化指标和主要脏器病理改变来确定模型构建是否成功。
2.根据权利要求1所述的基于腺病毒注射构建tpbg过表达子痫前期孕鼠模型的方法，其特征在于：
3.权利要求1中所述的方法在筛选子痫前期治疗候选药物中的应用。
4.权利要求1中所述的方法在子痫前期发生发展机制研究中的应用。
5.检测样本中标志物表达水平的试剂在制备子痫前期诊断产品中的应用，其特征在于：
【专利技术属性】
技术研发人员：李瑞满，王广，黄铮睿，孙露，
申请(专利权)人：暨南大学附属第一医院广州华侨医院，
类型：发明
国别省市：
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