【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于医药，具体涉及药品原料和制剂杂质分离技术，尤其涉及一种高效检测注射用司美格鲁肽注射液有关物质的分析方法。
技术介绍
1、司美格鲁肽是一种glp-1类似物，与人glp-1有94％的序列同源性。司美格鲁肽作为glp-1受体激动剂，可选择性地结合并激活glp-1受体，glp-1受体是天然glp-1的靶点。glp-1是一种通过glp-1受体介导而对葡萄糖代谢产生多种作用的生理激素。司美格鲁肽通过刺激胰岛素分泌和降低胰高血糖素分泌的机制来降低血糖，两者均为葡萄糖依赖性。因此当血糖升高时，胰岛素分泌受到刺激而胰高血糖素分泌受到抑制。司美格鲁肽降低血糖的机制还涉及轻微延迟餐后早期胃排空。因此，司美格鲁肽注射液在临床上具有很强的不可替代性，具有很高的开发价值。司美格鲁肽注射液(ozempic)目前已被批准在国内上市(进口注册标准号js20210011)，但未被收录到中国药典2020版、usp43、ep10以及jp18中。由于合成方法的原因，司美格鲁肽原料药中会夹杂多种杂质。这些肽司美格鲁肽杂质结构相似，对药品生产质量有至关重要的影响，因此有必要对其进行含量控制。现有技术公开的技术方案如下：
2、cn112285217a公开了一种索玛鲁肽的超高效液相色谱分析方法，该方法采用超高液相方法，以三氟乙酸盐、高氯酸盐、六氟磷酸盐中的一种或多种混合水溶液作为流动相a与流动项b乙腈按一定比例混合，梯度洗脱索玛鲁肽样品，该专利技术方案采用色谱柱串联及多种缓冲盐混合洗脱技术，在特定色谱条件下，可以准确有效的检出索玛鲁肽产品质量。该专利技
3、cn114660214a公开了一种司美格鲁肽的液相色谱检测方法及其应用，该方法采用高效液相方法,以磷酸盐缓冲液作为流动相a，以有机溶剂和水的混合溶液作为流动相b，以单根色谱柱为固定相，检测器为紫外检测器，梯度洗脱司美格鲁肽，该专利技术方案提供了液相色谱检测方法在检测鉴定司美格鲁肽在生产或存放过程中产生的杂质中的应用。该方法需要一根色谱柱即可完成司美格鲁肽的液相色谱检测。但该专利技术虽然与杂质有一定分离，但分出杂质个数较少。
4、因此，如何开发一种简单可行，灵敏度高，且能同时将司美格鲁肽及其体系中存在的几种主要杂质依次洗脱、分离，并定量分析的方法具有现实意义。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于针对现有技术的不足，提供一种司美格鲁肽注射液有关物质的测定方法。该方法利用梯度洗脱的高效液相色谱法，实现了司美格鲁肽和有关物质间的有效洗脱、分离和定量，使有关物质峰与司美格鲁肽主峰完全分离，具有专属性好，分析速度快，检测灵敏度高等优势。
2、为达到上述目的，本专利技术采取以下技术方案：
3、本专利技术提供了一种司美格鲁肽注射液有关物质的检测方法，其步骤如下：
4、(1)供试品溶液配制：以磷酸盐溶液溶解司美格鲁肽注射液，得供试品溶液；
5、(2)自身对照溶液配制：取步骤1)溶液，用磷酸盐溶液稀释，得自身对照溶液；
6、(3)检测：以十八烷基硅烷键合硅胶填料色谱柱为固定相，以磷酸盐缓冲液为流动相a，以乙腈-异丙醇-水溶液为流动相b，采用高效液相色谱法检测所述供试品溶液中司美格鲁肽有关物质的含量；
7、所述的有关物质如下：
8、
9、其中，所述磷酸盐缓冲液的配制方法为：将磷酸盐试剂溶于水中，用无机酸调ph至2-5。
10、本专利技术所述的一种司美格鲁肽注射液有关物质的检测方法，其进一步优选的技术方案是：
11、1、所述供试品溶液浓度为0.67mg/ml、所述自身对照溶液浓度为6.7μg/ml。
12、2、所述色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶填料色谱柱规格为150mm×4.6mm，2.6μm。
13、3、所述磷酸盐缓冲液选自磷酸二氢钾、磷酸二氢钠、磷酸二氢铵缓冲液中的一种或多种；优选磷酸二氢铵缓冲液。
14、4、所述磷酸盐试剂的浓度为50mmol/l-100mmol/l，例如可以是50mmol/l、60mmol/l、70mmol/l、80mmol/l、100mmol/l，优选80mmol/l。
15、5、所述磷酸盐缓冲液浓度为50mmol/l-100mmol/l，例如可以是50mmol/l、60mmol/l、70mmol/l、80mmol/l、100mmol/l，优选80mmol/l。
16、6、所述磷酸盐缓冲液采用无机酸调节ph值至2-5，例如可以是2、2.5、3.6、5，优选2-4，更优选3。所述无机酸选自磷酸、三氟乙酸和高氯酸中的一种或多种，优选磷酸。
17、7、所述色谱柱柱温设置为25℃-50℃，例如可以是25℃、30℃、33℃、35℃、37℃、40℃、42℃、45℃、47℃、50℃，优选25℃-40℃，更优选30℃。
18、8、所述流动相流速为0.6-1.0ml/min，例如可以是0.6ml/min、0.7ml/min、0.8ml/min、1.0ml/min，优选0.7ml/min。
19、9、所述方法中检测波长为205-245nm，例如可以是205nm、210nm、220nm、226nm、245nm，优选210nm。
20、10、所述流动相b为乙腈-异丙醇-水溶液，其中乙腈体积分数为50-80％(v/v)，例如50％、60％、70％、80％，优选60％。
21、本专利技术所述方法，采用自身对照法进行定量分析，计算有关物质的含量。
22、本专利技术司美格鲁肽注射液有关物质的检测方法，进一步优选的技术方案步骤如下：
23、(1)供试品溶液配制：以磷酸盐溶液稀释司美格鲁肽注射液，得司美格鲁肽注射液供试品溶液，所述供试品溶液浓度为0.67mg/ml；
24、(2)自身对照溶液配制：取步骤(1)溶液，用磷酸盐溶液稀释，得司美格鲁肽自身对照溶液，所述自身对照溶液浓度为6.7μg/ml；
25、(3)检测：以十八烷基硅烷键合硅胶填料色谱柱为固定相，以50mmol/l-100mmol/l磷酸盐缓冲液为流动相a，采用无机酸调节磷酸盐溶液ph为2.0-5.0，以50％-80％乙腈-异丙醇-水溶液为流动相b，采用高效液相色谱法检测所述供试品溶液中司美格鲁肽有关物质的含量；
26、所述色谱条件设置：
27、色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶填料色谱柱柱，规格150mm×4.6mm，2.6μm；
28、柱温：25-50℃；
29、流速：0.6-1.0ml/min；
30、检测波长：205-245nm；
31、进样体积：20μl；
32、梯度洗脱条件如下：
33、
34、本专利技术司美格鲁肽注射液有关物质的检测方法，进一步优选的技术方案步骤如下：
【技术保护点】
1.一种司美格鲁肽注射液有关物质的检测方法，其特征在于：所述方法步骤如下：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述供试品浓度为0.67mg/ml；所述自身对照溶液浓度为6.7μg/ml。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述十八烷基硅烷键合硅胶填料色谱柱，规格150mm×4.6mm，2.6μm。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述磷酸盐缓冲液选自磷酸二氢钾、磷酸二氢钠、磷
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述磷酸盐缓冲液的配制时，用无机酸调pH至2-4，更优选3；所述无机酸选自磷酸、三氟乙酸和高氯酸中的一种或多种，优选磷酸。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述色谱柱柱温设置为25℃-50℃，优选25℃-40℃，更优选30℃。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述流动相流速为0.6-1.0ml/min，优选0.7ml/min；检测波长为205-245nm，优选210nm。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述流动相B乙腈体积分数
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：其其体步骤如下：
10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：其具体步骤如下：
...【技术特征摘要】
1.一种司美格鲁肽注射液有关物质的检测方法，其特征在于：所述方法步骤如下：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述供试品浓度为0.67mg/ml；所述自身对照溶液浓度为6.7μg/ml。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述十八烷基硅烷键合硅胶填料色谱柱，规格150mm×4.6mm，2.6μm。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述磷酸盐缓冲液选自磷酸二氢钾、磷酸二氢钠、磷
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述磷酸盐缓冲液的配制时，用无机酸调ph至2-4，更优选3；所述无机酸选自磷酸、三氟乙酸...
【专利技术属性】
技术研发人员：董珍珠，常东明，陈帅，
申请(专利权)人：江苏诺泰澳赛诺生物制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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