【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物化工领域，具体而言，涉及一种含二十碳五烯酸乙酯的组合物及其制备方法与应用。
技术介绍
1、随着人们越来越关注自身的健康，大众开始更多的摄取营养健康膳食补充剂，多不饱和脂肪酸(pufa)类产品在其中占有重要的地位。多不饱和脂肪酸是指含两个或两个以上双键且碳链长度为18-22个碳原子的直链脂肪酸，是机体代谢，特别是婴幼儿大脑发育等活动中的重要物质基础，是细胞膜的构成成分，主要起到保持细胞膜流动性，促使胆固醇酯化，降低胆固醇和甘油三酯，降低血液粘稠度，改善血液循环等生理功能，同时还具备改善人类思维和增强记忆力等作用。而人体自身无法合成多不饱和脂肪酸(pufa)物质，必须通过饮食等进行摄取获得。
2、多不饱和脂肪酸(pufa)种类繁多，主要包括ω-3多不饱和脂肪酸(ω-3pufa)、ω-6多不饱和脂肪酸(ω-6pufa)、ω-9多不饱和脂肪酸(ω-9pufa)等形式，如α-亚麻酸(ala)、二十碳五烯酯(epa)、二十一碳五烯酸(hpa)、二十二碳六烯酸(dha)、二十二碳五烯酸(dpa)、亚油酸(la)、共轭亚油酸(cla)，γ-亚麻酸(gla)、花生四烯酸(aa)等，其中，尤以二十碳五烯酸(epa)和二十二碳六烯酸(dha)为主要代表的ω-3多不饱和脂肪酸(ω-3pufa)最为大众所熟知和接受，它们和低脂饮食一起可用于降低高甘油三酯血症。
3、通常情况下，可从各种海产品原材料中通过压榨、萃取等手段获得含量约30％左右的鱼油粗品(称之为粗鱼油或毛鱼油)，其中epa和dha通常以甘油三酯的形式存
4、美国amarin公司研制的用于治疗高甘油三酯血症和血脂异常症的药物，就是采用纯度大于96.5％的二十碳五烯酸乙酯(epa-ee)，是美国治疗高甘油三酯血症和血脂异常症的欧米伽-3-酸乙酯处方药，具有良好的疗效。
5、高纯度的二十碳五烯酸乙酯原料药主要通过纯化乙酯型鱼油得到，目前从低含量的乙酯型鱼油中分离纯化epa-ee原料药的方法主要包括以下几种的组合：尿素包合法、低温冷冻法、金属盐沉淀法、真空蒸馏法、超临界萃取法、高效液相色谱法和柱层析法。
6、同时，考虑到作为原料药，不仅主成分二十碳五烯酸乙酯(epa-ee)含量要大于96.5％，而且其中其它杂质成分也应满足要求。由于epa-ee等含较多双键的脂肪酸对热极度敏感，在高温下容易发生异构化、裂解、聚合等，如europena j.of lipid sci.andtech.,108(2006)589-597，以及jaocs,66(1989)1822-1830中都描述了epa-ee在受热过程中易产生其5个双键中一个或两个同时异构化为反式脂肪酸的异构体，并对这几个异构体进行了定位。
7、所以原料药epa-ee生产过程中，除了要将源自原料鱼油的除epa以外的脂肪酸乙酯等尽量去除外，而且在epa-ee的分离纯化过程中，工艺条件要尽量温和，在尽量将其它脂肪酸乙酯去除的同时，减少epa-ee异构体和其它杂质的产生。一般来说，原料药中其它已知的脂肪酸乙酯含量应小于0.50％，对于每一种未知杂质，要求其含量在0.1％以下。
8、在先前技术中，有大量研究从工艺或设备创新方面来提纯得到高纯度的二十碳五烯酸乙酯，但并未考虑到此高纯度二十碳五烯酸乙酯中杂质的去除。
9、cn102391112b公开了一种通过分子蒸馏法、盐沉淀法、制备色谱法生产高纯度epa-ee的方法，得到的epa-ee含量在96％以上，但对其中的其它脂肪酸杂质没有关注。
10、cn106795452a中公布了一种通过控制精馏塔真空度和温度，结合制备色谱法得到epa-ee，其主要目的是控制epa-ee中异构体的产生，以及尽量去除花生四烯酸乙酯(aa)，而对其它如相对于epa-ee保留时间为0.613，0.836，0.966等的未知杂质峰没有进行控制，而在药品级原料中，这些未知杂质的含量有严格的要求。
11、总的来说，先前制备得到的高含量二十碳五烯酸乙酯组合及其制备技术存在几方面的缺陷：或者只是注意到将二十碳五烯酸乙酯(epa-ee)含量提高到96％以上，而对其中的杂质没有关注；或者只是关注到epa-ee的异构体杂质，对其它脂肪酸杂质或未知杂质没有控制，这样的产品不适于作为原料药应用。
12、另外，原料药二十碳五烯酸乙酯是天然来源，其杂质种类及杂质水平随着鱼类来自不同的捕捞区域会有较大的不同，如以秘鲁来源的毛鱼油为原料，利用先前工艺生产药品级二十碳五烯酯乙酯，有部分杂质峰很难去除至理想水平，特别是相对保留时间为0.613，0.728，0.836，0.858，0.868，0.966的这几个未知杂质通过常规工艺较难去除。
13、针对先前技术上的缺陷和天然原料产地导致的组成上的差异，有必要找到一种能高效率、适于工业化生产，适于应用不同产地鱼油来制备二十碳五烯酸乙酯的工艺，不仅能尽量减少工艺过程中的杂质的产生，而且能有效地去除除epa-ee外其它脂肪酸乙酯如硬脂酸乙酯(sda-ee)、花生四烯酸乙酯(aa-ee)、二十碳四烯酸乙酯(eta-ee)、二十二碳六烯酸乙酯(dha-ee)、二十二碳五烯酸乙酯(dpa-ee)、二十碳五烯酸乙酯(hpa-ee)等杂质，以及其它未经鉴定的未知杂质，特别是相对保留时间为0.613，0.728，0.836，0.858，0.868，0.966的这几个未知杂质，从而使生产出的epa-ee能满足食品级原料的要求。
技术实现思路
1、本专利技术的主要目的在于提供一种含二十碳五烯酸乙酯的组合物及其制备方法与应用，以解决现有技术中以鱼油制备的含二十碳五烯酸乙酯的组合物中杂质含量较高，尤其是相对于二十碳五烯酸乙酯，保留时间为0.613，0.728，0.836，0.858，0.868，0.966的未知杂质的含量较高的问题。
2、为了实现上述目的，根据本专利技术的第一方面，提供了一种含二十碳五烯酸乙酯的组合物的制备方法，该制备方法包括如下步骤：
3、转酯化：将鱼油进行转酯化反应，得到脂肪酸乙酯化产物；
4、多级分子蒸馏：将脂肪酸乙酯化产物经多级分子蒸馏得到第一脂肪酸乙酯组合物，多级分子蒸馏为至少三级分子蒸馏；
5、尿素包合：对第一脂肪酸乙酯组合物进行尿素包合，本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种含二十碳五烯酸乙酯的组合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述尿素包合为：将所述第一脂肪酸乙酯组合物与脂肪醇和尿素混合，得到混合物；将所述混合物加热至70-80℃，保温0.5-1h，随后降温至-2-4℃结晶，过滤，得到滤液；对所述滤液进行水洗、脱气，或使用萃取剂对所述滤液进行萃取，随后浓缩，得到所述第二脂肪酸乙酯组合物。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述脂肪醇为叔丁醇；和/或，所述萃取剂为异辛烷。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的制备方法，其特征在于，
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，
7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述六级分子蒸馏的温度依次为100-110℃、110-120℃、120-130℃、130-140℃、140-150℃、150-160℃。
8.一种含二十碳五烯酸乙酯的组合物，其特征在于，采用如下气相色谱方法检测时，以所述二十碳
9.根据权利要求8所述的含二十碳五烯酸乙酯的组合物，其特征在于，所述组合物中，二十碳五烯酸乙酯异构体面积百分含量的总和＜2％。
10.根据权利要求8或9所述的含二十碳五烯酸乙酯的组合物，其特征在于，所述组合物中，相对保留时间为0.989、1.013、1.017、1.024、1.03的物质均为二十碳五烯酸乙酯异构体。
11.根据权利要求8或9所述的含二十碳五烯酸乙酯的组合物，其特征在于，所述组合物中，以面积百分含量计，所述第一杂质的含量＜0.07％、所述第二杂质的含量＜0.53％、所述第三杂质的含量＜0.51％、所述第四杂质的含量＜0.35％、所述第五杂质的含量＜0.3％、所述第六杂质的含量＜0.3％。
12.根据权利要求11所述的含二十碳五烯酸乙酯的组合物，其特征在于，所述组合物中，以面积百分含量计，所述第一杂质的含量＜0.03％、所述第二杂质的含量＜0.15％、所述第三杂质的含量＜0.1％、所述第四杂质的含量＜0.1％、所述第五杂质的含量＜0.1％、所述第六杂质的含量＜0.15％。
13.根据权利要求8或9所述的含二十碳五烯酸乙酯的组合物，其特征在于，所述组合物中，以面积百分含量计，硬脂酸乙酯的含量＜1％、二十二碳五烯酸乙酯的含量＜0.1％、二十二碳六烯酸乙酯的含量＜0.1％、二十一碳五烯酸乙酯的含量＜0.3％。
14.根据权利要求8至13中任一项所述的含二十碳五烯酸乙酯的组合物在制备食品领域中的应用。
15.根据权利要求8至13中任一项所述的含二十碳五烯酸乙酯的组合物在制备药品领域中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种含二十碳五烯酸乙酯的组合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述尿素包合为：将所述第一脂肪酸乙酯组合物与脂肪醇和尿素混合，得到混合物；将所述混合物加热至70-80℃，保温0.5-1h，随后降温至-2-4℃结晶，过滤，得到滤液；对所述滤液进行水洗、脱气，或使用萃取剂对所述滤液进行萃取，随后浓缩，得到所述第二脂肪酸乙酯组合物。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述脂肪醇为叔丁醇；和/或，所述萃取剂为异辛烷。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的制备方法，其特征在于，
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，
7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述六级分子蒸馏的温度依次为100-110℃、110-120℃、120-130℃、130-140℃、140-150℃、150-160℃。
8.一种含二十碳五烯酸乙酯的组合物，其特征在于，采用如下气相色谱方法检测时，以所述二十碳五烯酸乙酯的保留时间为1，以各组分峰的面积之和为100％，所述组合物中，以面积百分含量计，
9.根据权利要求8所述的含二十碳五烯酸乙酯的组合物，其特征在于，所述组合物中，二十碳五烯酸乙酯异构体面积百分含量的总和＜2％。
10....
【专利技术属性】
技术研发人员：许新德，王升帆，王佳伟，张伟峰，赵琳，王小平，白亚龙，
申请(专利权)人：浙江可明生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：
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