【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，具体涉及一株伪中间型葡萄球菌噬菌体及其在防治犬浅表脓皮症中的应用。
技术介绍
1、犬浅表脓皮症为犬表皮和毛囊的浅表性细菌感染，包括脓包病、黏膜皮肤性脓皮症要和浅表细菌性毛囊炎(byukusenge et al.，2021)。脓疱病的特征为在毛发稀疏的皮肤长出脓疱，黏膜皮肤性脓皮症主要发生于犬的唇部和口周皮肤(boehm et al.，2017)，浅表细菌性毛囊炎为局限于毛囊浅层部分的感染。
2、犬浅表脓皮症常见的致病菌包括葡萄球菌、变形杆菌、大肠杆菌和绿脓杆菌，其中伪中间型葡萄球菌(也称为“假中间葡萄球菌”)是主要病原菌之一。伪中间型葡萄球菌是由devriese等人于2005年报道并命名的一种新的凝固酶阳性葡萄球菌(安妮，2021)，是临床犬标本中最常分离出的细菌，主要与皮肤和耳部的感染有关，具有难治愈、易复发传播迅速的特点，属人兽共患病原体，有研究显示伪中间型葡萄球菌可引起术后尿脓毒症(subediet al.，2021)，给宠主和宠物带来了巨大的健康威胁。研究表明，从犬皮肤上采到的伪中间型葡萄球菌有50％为mrsp并且有97.8％的mpsp对临床上常用的3种或3种以上的抗生素产生多重耐药性(冯勇等，2012)。伪中间型葡萄球菌具有较高的生物膜生成率(arima etal.，2018)，生物膜是引起mrsp获得多重耐药性的重要原因之一。生物膜是指细菌在生长过程中，嵌入胞外多糖中的有组织的微生物聚集体，微生物附着于物体表面后，通过相互作用释放胞外多糖将自身包裹其中而形成的生物被膜。细菌被生物膜包被
3、抗生素是治疗犬浅表脓皮症的首要选择，但由于细菌耐药性的增强，治疗效果并不理想。噬菌体是一种具有高特异性、不产生抗体、研发周期短和无副作用等特点的病毒(齐心等，2018)。近年来噬菌体已成为生物技术专家的重要工具，包括药物设计、新蛋白质的合成、蛋白质和dna疫苗、致病菌的检测以及蛋白质、多肽或抗体的筛选、噬菌体展示技术等(rehman et al.，2019)。此外，最重要的是噬菌体治疗，噬菌体治疗是通过噬菌体裂解细菌治疗病原菌感染的治疗手段(罗婷婷等，2016)。但目前能够用于伪中间型葡萄球菌治疗的噬菌体还很少见有报道；而且有些噬菌体基因组中含有耐药基因和编码毒力因子的基因，从而造成传播耐药基因与毒力基因的风险，这也进一步限制了噬菌体在伪中间型葡萄球菌引起的犬浅表脓皮症治疗中的应用。
技术实现思路
1、针对上述现有技术的不足，本专利技术的目的是提供一株伪中间型葡萄球菌噬菌体及其在防治犬浅表脓皮症中的应用。本专利技术分离并鉴定了一株伪中间型葡萄球菌噬菌体sp914，sp914的生物学特性良好，基因组中不含毒力因子且可清除宿主菌的生物膜，具有应用于犬脓皮症临床治疗的潜力和价值。
2、具体的，本专利技术涉及以下技术方案：
3、本专利技术的第一方面，提供了一株假中间葡萄球菌噬菌体(staphylococcuspseudintermedius phage)sp914，该噬菌体已于2023年10月10日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称cgmcc，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号 中国科学院微生物研究所)，其保藏编号为：cgmcc no.45679。
4、所述假中间葡萄球菌噬菌体sp914具有如下特征：
5、噬菌体sp914属尾状噬菌体目，肌尾噬菌体科，具有正多面体的小头和可收缩的长尾。生物学特性及抗性检测结果显示，噬菌体sp914可裂解伪中间型葡萄球菌，测得效价为1.24×1012pfu/ml，最佳感染复数为1；噬菌体的杀菌动力学表明，当sp914效价处于1010～1012pfu/ml时，可在24h内持续抑制106cfu/ml细菌生长，最适生长温度为37℃，对低温的耐受性比对高温的耐受性强，对ph不敏感，对紫外线敏感。
6、利用illumina hiseq高通量测序平台对dna文库进行测序，用genemarks来预测编码基因，结果显示，噬菌体sp914基因组为双链dna，全基因组长度为135,892bp，gc含量为46.61％，orfs注释结果显示，噬菌体sp914不含有毒力基因，具有应用安全性。
7、噬菌体sp914对假中间葡萄球菌生成的生物膜具有清除作用，在两者接触4h后清除效率达到最高。
8、本专利技术的第二方面，提供上述假中间葡萄球菌噬菌体sp914在如下(1)或(2)中的应用：
9、(1)制备抑制或杀灭假中间葡萄球菌的产品；
10、(2)制备预防和/或治疗犬浅表脓皮症的药物。
11、优选的，所述犬浅表脓皮症是由假中间葡萄球菌感染引起的。
12、本专利技术的第三方面，提供一种噬菌体制剂，所述噬菌体制剂以上述假中间葡萄球菌噬菌体sp914为活性成分。
13、优选的，所述噬菌体制剂中，假中间葡萄球菌噬菌体sp914的剂量大于或等于107pfu/ml。
14、上述噬菌体制剂可以以本专利技术的假中间葡萄球菌噬菌体sp914作为唯一活性成分；还可以含有除本专利技术的噬菌体以外的其他噬菌体或抗生素，其与本专利技术的噬菌体复配使用可以得到与之相当或者更好的防治犬浅表脓皮症的效果。
15、上述噬菌体制剂可以根据使用的情况，调制成适合其对象的制剂形态，如液体制剂、凝胶制剂、冻干制剂或口服固体制剂等，经喷雾、涂抹、注射或口服等方式用于预防或治疗由假中间葡萄球菌引起的浅表脓皮症。
16、这些剂型使用药理学上可接受的辅助成分，作为辅助成分，可列举例如，生理盐水、缓冲液、蒸馏水等水性介质，聚乙二醇、丙二醇等非水性介质，表面活性剂、植物油、乳化剂、赋形剂、粘合剂、润滑剂、助溶剂、抗氧化剂等。
17、本专利技术的第四方面，提供上述噬菌体制剂在制备预防和/或治疗犬浅表脓皮症的药物中的应用。
18、上述应用中，所述犬浅表脓皮症是由假中间葡萄球菌感染引起的。
19、本专利技术的有益效果：
20、(1)本专利技术从患犬病灶周围毛发与血痂中分离出1株噬菌体sp914，本专利技术的噬菌体sp914属于肌尾噬菌体科，能够特异性裂解假中间葡萄球菌，效价高；而且，本专利技术的菌体sp914对ph的耐受性良好，在强酸和强碱环境下仍能保持107pfu/ml的较高效价，在犬皮肤正常温度范围内能保持较高的效价，具有开发成药用制剂的潜力。
21、(2)本专利技术的噬菌体sp914不含毒力基因，使用安全。
22、(3)本专利技术的噬菌体sp914对假中间葡萄球菌的生物膜具有清除能力，从而降低了假中间葡萄球菌对抗生素的耐药性，具有与抗生素协同治疗犬浅表脓皮症本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一株假中间葡萄球菌噬菌体(Staphylococcus pseudintermedius phage)SP914，其保藏编号为：CGMCCNo.45679。
2.权利要求1所述的假中间葡萄球菌噬菌体SP914在如下(1)或(2)中的应用：
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述犬浅表脓皮症是由假中间葡萄球菌感染引起的。
4.一种噬菌体制剂，其特征在于，所述噬菌体制剂以权利要求1所述的假中间葡萄球菌噬菌体SP914。
5.根据权利要求4所述的噬菌体制剂，其特征在于，所述噬菌体制剂中，假中间葡萄球菌噬菌体SP914的剂量大于或等于107PFU/mL。
6.根据权利要求4所述的噬菌体制剂，其特征在于，所述噬菌体制剂还包括辅料，所述载辅料选自生理盐水、缓冲液、蒸馏水、聚乙二醇、丙二醇、表面活性剂、植物油、乳化剂、赋形剂、粘合剂、润滑剂、助溶剂和抗氧化剂中的一种或多种。
7.根据权利要求4所述的噬菌体制剂，其特征在于，所述噬菌体制剂的剂型为液体制剂、凝胶制剂、冻干制剂或口服固体制剂。
8.权利要
...【技术特征摘要】
1.一株假中间葡萄球菌噬菌体(staphylococcus pseudintermedius phage)sp914，其保藏编号为：cgmccno.45679。
2.权利要求1所述的假中间葡萄球菌噬菌体sp914在如下(1)或(2)中的应用：
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述犬浅表脓皮症是由假中间葡萄球菌感染引起的。
4.一种噬菌体制剂，其特征在于，所述噬菌体制剂以权利要求1所述的假中间葡萄球菌噬菌体sp914。
5.根据权利要求4所述的噬菌体制剂，其特征在于，所述噬菌...
【专利技术属性】
技术研发人员：魏可锋，闫振贵，宗媛媛，马凤洲，张雪丽，樊瑞锋，李可，
申请(专利权)人：山东益远药业有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。