一种根围金黄杆菌及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种根围金黄杆菌及其应用。本发明专利技术分离得到了一种能够产纤维素酶的新的细菌——根围金黄杆菌（Ｃｈｒｙｓｅｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ?ｒｈｉｚｏｓｐｈａｅｒａｅ）ＧＩＭＮ１．００５，该菌于２００９年１０月２０日保藏于中国典型培养物保藏中心（ＣＣＴＣＣ），地址：中国武汉市武汉大学，保藏编号为ＣＣＴＣＣ?ＮＯ：Ｍ２０９２３０。因为本发明专利技术的根围金黄杆菌能够产生纤维素酶，可用于产纤维素酶的应用上，因此对纤维素酶的生产和利用纤维素酶降解纤维素的研究和利用具有重要的价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于微生物
，特别是涉及一种能产生纤维素酶的新的细菌-根围 金黄杆菌及其应用。
技术介绍
自从在蜗牛消化道中发现纤维素酶以来，纤维素的微生物降解问题引起了业界足 够的关注。现在纤维素酶的应用已扩展到食品发酵、医药、纺织、日用化工、造纸、工业洗涤、 烟草、石油开采、废水处理及饲料等各个领域，其应用前景十分广阔。随着能源问题日益突出，各国逐渐把对纤维素的降解研究作为一项重要的研究课 题。而纤维素的酶降解是利用纤维素的一个有效途径。目前主要对真菌纤维素酶的研究已 经非常成熟，且真菌纤维素酶的活性比较高，例如里氏木霉、绿色木霉、康氏木霉等。对细菌 纤维素酶方面的研究近几年也有很多报道，但普遍认为细菌纤维素酶活性比真菌纤维素酶 的活性低。而细菌作为世界分布最广的生物具有非常大的开发价值空间，对于筛选一系列 产纤维素酶细菌菌群，得到高产而且具较好稳定性纤维素酶新的菌群也是一个研究热点。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供一种能够产纤维素酶的新的细菌——根围金黄杆菌 (Chryseoba cterium rhizosphaerae)GIMN1. 005，该菌于 2009 年 10 月 20 日保藏于中国典 型培养物保藏中心(CCTCC)Jiyi 中国武汉市武汉大学，保藏编号为CCTCC NO :M209230。本专利技术的根围金黄杆菌是从越南采集的根际土壤中分离培养获得的。该菌培养 条件为培养基采用营养琼脂培养基(NA)，具体配方为蛋白胨10. 0g，酵母膏5g，氯化钠 5g，琼脂 20. 0g,7jC 1000ml ；pH6. 8 7. 0。培养温度:30°C。其形态特征该根围金黄杆菌在平板上培养24h后的菌落呈金黄色，圆形或不规 则形，表面光滑半透明，边缘整齐；革兰氏染色为阴性，菌体杆状，具有周身纤毛，不运动，无 荚膜，不形成芽孢。本专利技术根围金黄杆菌(Chryseobacteriumrhizosphaerae) GIMN1. 005 的分子分类 地位的确定。常规方法提取根围金黄杆菌的16SrDNA，其序列如SEQ ID NO :1所示，该序 列与GenBank数据库中的已知序列进行BLAST比较分析，并从数据库获得相关种属的 16SrDNA序列，构建系统发育树，见于图2。经比较分析发现，本专利技术的根围金黄杆菌与菌 株(Chryseobacterium aquifrigidense KCTC 12894τ)亲缘关系最近，根围金黄杆菌的 16SrDNA 基因序列只与 Chryseobacterium aquifrigidense KCTC 12894τ 有 98. 6% 的同 源性，但通过DNA-DNA杂交显示，根围金黄杆菌与金黄杆菌模式菌株Chryseobacterium soli KACC12502T, C. jejuense KACC12501T, and C. taiwanense KACC12985T 分别只有 20. 3士0. 8%, 28. 6士0. 6%和 18. 1 士0. 的同源性。将本专利技术的根围金黄杆菌与其同源性最高的金黄杆菌菌株进行微生物学特性分析，具体结果见于表1。表1根围金黄杆菌与其同源性最高的金黄杆菌菌株微生物学特性比较 注+，阳性；-，阴性；+/_，弱阳性；NA，无可取数据由表1可以看出，本专利技术的根围金黄杆菌，其接触酶试验为阳性；能水解明胶、淀粉和酪蛋白；吲哚为阴性；不利用柠檬酸盐，在L-海藻糖、D-甘露醇、甘露糖、麦芽糖中产 酸，不能利用纤维二糖、蔗糖、松三糖、棉子糖、木糖、蜜二糖、鸟氨酸脱羧酶、精氨酸脱羧酶、 赖氨酸脱羧酶，在糖类中生长不产气；ONPG为阳性，尿素为阴性。生长温度范围5-37°C， 以及生长PH值范围为5. 0-9.0，其甲基萘醌主要类型为MK-6。与其同源性最高的菌株 C. aquifrigidense KCTC 12894τ在生理生化特征、G+Cmol%,以及细胞壁脂肪酸种类和含 量等各方面都存在差异。C.aquifrigidense KCTC 12894τ的生理生化特征是在麦康凯琼脂 上不生长，不产H2S,不利用海藻糖，生长范围为15-35°C，pH范围为6. 0-9. 0，硝酸盐还原为 阳性，G+Cmol %为35. 6mol % ；而根围金黄杆菌能在麦康凯琼脂上生长，产H2S，利用海藻糖， 生长范围为5-37°C, pH范围为5. 0-9. 0，硝酸盐还原为阴性，G+Cmol%为42. Imol%0除此 以外，C. aquifrigidense KCTC 12894τ的脂肪酸主要种类和含量分别为iso-C15:(1 (45. 5% )， ISO-L17. lv9c (14. 4%) ？ iso—C17.Q3-OH (13. O% ) and summed feature 3 (comprising iso_C15:02—0H and/or C16llv7c ；8. 8% )，而根围金黄杆菌为 iso-C17:(13_QH (22. 41% ), iso-C17:lw9c (19. 20% ) 和iso-C15:Q(18. 3%)。而且根围金黄杆菌的16SrDNA基因序列只与C. aquifrigidense KCTC 1289#有98. 6%的同源性，综合上述数据，可以证明它们不是同一个种。综合16SrDNA序列分析、微生物学特性分析和DNA-DNA杂交结果(1987年国际系 统细菌学委员会ICSB规定，DNA同源性小于70%或杂交分子的热解链温度差小于或等于 2°C为细菌种的界线，Wayne et al，1987)，表明本专利技术的芽孢杆菌是一种新的细菌，命名为 根围金黄杆菌(Chryseobacterium rhizosphaerae) GIMN1. 005，该菌于 2009 年 10 月 20 日 保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，地址中国武汉市武汉大学，保藏编号为CCTCC NO :M209230。经实验发现，本专利技术的根围金黄杆菌具有产生纤维素酶的能力。因此本专利技术的另外一个目的是提供根围金黄杆菌(Chryseobacterium rhizosphaerae)GIMN1. 005在产纤维素酶上的应用。由于本专利技术的根围金黄杆菌具有产生纤维素酶的能力，可用于生产纤维素酶，因 此对纤维素酶的生产和利用纤维素酶降解纤维素的研究和利用具有重要的价值。本专利技术的根围金黄杆菌(Chryseobacterium rhizosphaerae)GIMN1. 005 已于 2009年10月20日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，地址中国武汉市武汉大学， 保藏编号为 CCTCC NO :M209230。附图说明图1是本专利技术的根围金黄杆菌的透射电子显微镜照片(A，6000倍；B 超薄切片 7000 倍)；图2是本专利技术的根围金黄杆菌及部分相关菌株依据16S rDNA序列构建的系统发育树。具体实施例方式以下是对本专利技术做进一步的说明，而不是对本专利技术的限制。实施例1 ―、卞艮Iimff胃(Chryseobacterium rhizosphaerae) GIMN 1.005 的^>畠。从越南根际0-30cm土样，取IOg土壤放入装有90mL无本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种根围金黄杆菌（Ｃｈｒｙｓｅｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｒｈｉｚｏｓｐｈａｅｒａｅ）ＧＩＭＮ１．００５，其保藏编号为ＣＣＴＣＣＮＯ：Ｍ２０９２３０。

【技术特征摘要】
一种根围金黄杆菌(Chryseobacterium rhizosphaerae)GIMN1.005...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱红惠，黎志坤，羊宋贞，冯广达，王永红，陈美标，
申请(专利权)人：广东省微生物研究所，
类型：发明
国别省市：81[中国|广州]