【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本公开涉及用可检测的报告物部分标记生物样品中的分析物、检测该标记分析物以及补偿各种检测误差。
技术介绍
1、荧光成像可以用于检测和量化生物样品中的各种不同分析物。通过用不同的荧光染料标记每种不同类型的分析物，可以执行多种分析物的多路复用检测。在一些测定中，可以检测的不同分析物的数量受到可以分辨的不同荧光测量信号的数量的限制。
技术实现思路
1、本公开的特征在于用于标记生物样品中的分析物、测量与标记分析物对应的信号、检测和量化标记分析物以及校正分析物标记和测量信号中的误差的方法、系统和试剂盒。分析物各自用多个报告物部分标记，并且选择用于标记每种不同类型分析物的报告物部分，使得通过测量与报告物部分对应的信号，可以在样品中明确地检测每种不同类型的分析物。此外，可以鉴定和校正测量误差诸如未检测到的信号，使得仍然可以可靠地量化相应的标记分析物。该方法、系统和试剂盒可以与多种不同类型的报告物部分和样品分析物一起使用。此外，通过选择应用于样品的不同报告物部分的数量和用于标记个别分析物的报告物部分的数量，可以调节可以清楚且可靠地检测的不同分析物的数量。即使使用相对适中数量的不同报告物部分，也可以检测相对大量的不同分析物。
2、在一方面，本公开的特征在于方法，其包括：(a)将生物样品暴露于复数个不同类型的探针，其中每种不同类型的探针包含与样品中不同类型的rna分析物结合的核酸捕获部分，以及特征在于至少一个报告物部分的检测部分，其中检测部分与捕获部分连接，并且其中至少一个报告物部分包含多个
3、该方法的实施方案可以包含以下特征中的任何一个或更多个。
4、该方法可以包括，对于光学标记物中的至少一个，在测量由光学标记物中的至少一个生成的光学信号之后且在用不同的复数个光学标记物重复步骤(b)和(c)之前，从样品中除去光学标记物中的至少一个。除去光学标记物中的至少一个可以包括使光学标记物中的至少一个从报告物部分的一个或更多个标记物区脱杂交(dehybridize)。
5、至少一种类型的检测部分的至少一个报告物部分可以包含在至少一个报告物部分内不重复的标记物区。每种类型的检测部分的至少一个报告物部分可以包含在至少一个报告物部分内不重复的标记物区。
6、至少一种类型的检测部分的至少一个报告物部分可以包含至少3个在至少一个报告物部分内不重复的标记物区。每种类型的检测部分的至少一个报告物部分可以包含至少3个在至少一个报告物部分内不重复的标记物区。
7、每个标记物区可以包含至少15个核苷酸(例如，至少30个核苷酸)。报告物部分中的每一个的每个标记物区可以包含相同数量的核苷酸。报告物部分中的每一个可以包含相同数量的标记物区。
8、生成光学信号的种类可以是荧光部分。生成光学信号的种类可以包含至少一种荧光核苷酸。测量由光学标记物生成的光学信号可以包括获得样品中的光学标记物的至少一个图像，以及鉴定与至少一个图像中的光学标记物对应的光学信号。
9、步骤(b)中的每个复数个光学标记物可以包含相同数量的不同类型的光学标记物。步骤(b)中的每个复数个光学标记物可以包含3个或更多个(例如，5个或更多个)不同类型的光学标记物。该方法可以包括重复步骤(b)直到样品已经暴露于光学标记物集，其中至少一个报告物部分的每个标记物区具有光学标记物集中的互补光学标记物。
10、该方法可以包括将所述样品暴露于复数个光学标记物中的至少一个超过一次。
11、每次执行步骤(b)，步骤(b)中的复数个光学标记物的每个成员可以包含生成不同光学信号的种类。不同光学信号可以具有不同的光谱分布。
12、在复数个光学标记物间，光学标记物中的至少两个可以包含生成光学信号的共同种类，并且该光学标记物中的该至少两个可以在步骤(b)的不同重复期间暴露于样品。在复数个光学标记物间，第一和第二光学标记物可以各自包含生成第一和第二光学标记物的光学信号的第一种类，第三和第四光学标记物可以各自包含生成第三和第四光学标记物的光学信号的第二种类，并且第一和第二种类可以是不同的。由第一和第二种类生成的光学信号可以是不同的。该方法可以包括在步骤(b)的不同重复期间使样品暴露于第一和第二光学标记物，以及在步骤(b)的不同重复期间使样品暴露于第三和第四光学标记物。
13、除非另有明确说明，方法的实施方案还可以包含本文公开的其他特征中的任一者，并且可以包含此类特征的任何组合，无论此类特征是在共同实施方案中还是在不同实施方案中描述。
14、在另一方面，本公开的特征在于方法，其包括：使生物样品暴露于第一探针，第一探针包含与样品中的第一rna结合的第一核酸捕获部分和包含至少一个第一报告物部分的第一检测部分，其中至少一个第一报告物部分的特征在于各自包含具有序列的寡核苷酸的多个第一标记物区，其中每个第一报告物部分中的多个第一标记物区中的每一个的寡核苷酸序列是不同的；使生物样品暴露于第二探针，第二探针包含与样品中的第二rna结合的第二核酸捕获部分和包含至少一个第二报告物部分的第二检测部分，其中至少一个第二报告物部分的特征在于各自包含具有序列的寡核苷酸的多个第二标记物区，其中每个第二报告物部分中的多个第二标记物区中的每一个的寡核苷酸序列是不同的；使生物样品暴露于多个复数个光学标记物，其中每个复数个光学标记物包含与多个第一和第二标记物区中的至少一个杂交的至少一个光学标记物，直到来自多个复数个光学标记物的光学标记物已经与多个第一和第二标记物区中的每一个杂交；在使生物样品暴露于每个复数个光学标记物之后，测量由与多个第一和第二标记物区中的至少一个杂交的每个复数个光学标记物的至少一个光学标记物生成的空间分辨的光学信号；以及确定样品中的第一和第二rna的一个或更多个位置，其中第一标记物区中的至少两个与第二标记物区中的每一个不同。
15、该方法的实施方案可以包含以下特征的任何一个或更多个。
16、该方法可以包括，对于复数个光学标记物中的至少一个，在测量空间分辨的光学信号之后且在使生物样品暴露于多个复数个光学标记物中的另一个之前，从样品中除去与多个第一和第二标记物区中的至少一个杂交的至少一个光学标记物。除去至少一个光学标记物可以包括将至少一个光学标记物从多个第一和第二标记物区中的至少一个脱杂交。
17、本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.方法，其包括：
2.权利要求1的方法，其进一步包括：对于所述光学标记物中的至少一个，在测量由所述光学标记物中的所述至少一个生成的光学信号之后且用不同的复数个光学标记物重复步骤(b)和(c)之前，从所述样品中除去所述光学标记物中的所述至少一个。
3.权利要求2的方法，其中除去所述光学标记物中的所述至少一个包括使所述光学标记物中的所述至少一个从所述报告物部分的一个或更多个标记物区脱杂交。
4.权利要求1的方法，其中至少一种类型的检测部分的所述至少一个报告物部分包含在所述至少一个报告物部分内不重复的标记物区。
5.权利要求4的方法，其中每种类型的检测部分的所述至少一个报告物部分包含在所述至少一个报告物部分内不重复的标记物区。
6.权利要求1的方法，其中至少一种类型的检测部分的所述至少一个报告物部分包含至少3个在所述至少一个报告物部分内不重复的标记物区。
7.权利要求6的方法，其中每种类型的检测部分的所述至少一个报告物部分包含至少3个在所述至少一个报告物部分内不重复的标记物区。
8.权利要求1的方法，
9.权利要求8的方法，其中每个标记物区包含至少30个核苷酸。
10.权利要求1的方法，其中所述报告物部分中的每一个的每个标记物区包含相同数量的核苷酸。
11.权利要求1的方法，其中所述报告物部分中的每一个包含相同数量的标记物区。
12.权利要求1的方法，其中生成所述光学信号的所述种类是荧光部分。
13.权利要求1的方法，其中生成所述光学信号的所述种类包含至少一种荧光核苷酸。
14.权利要求1的方法，其中测量由所述光学标记物生成的光学信号包括获得所述样品中的所述光学标记物的至少一个图像，并且鉴定与所述至少一个图像中的所述光学标记物对应的光学信号。
15.权利要求1的方法，其中步骤(b)中的每个复数个光学标记物包含相同数量的不同类型的光学标记物。
16.权利要求1的方法，其中步骤(b)中的每个复数个光学标记物包含3个或更多个不同类型的光学标记物。
17.权利要求16的方法，其中步骤(b)中的每个复数个光学标记物包含5个或更多个不同类型的光学标记物。
18.权利要求1的方法，其进一步包括，重复步骤(b)直到所述样品已经暴露于光学标记物集，其中所述至少一个报告物部分的每个标记物区在所述光学标记物集中具有互补光学标记物。
19.权利要求1的方法，其进一步包括将所述样品暴露于所述复数个光学标记物中的至少一个超过一次。
20.权利要求1的方法，其中每次执行步骤(b)，步骤(b)中的所述复数个光学标记物的每个成员包含生成不同光学信号的种类。
21.权利要求20的方法，其中所述不同光学信号具有不同的光谱分布。
22.权利要求1的方法，其中在所述复数个光学标记物间：
23.权利要求1的方法，其中在所述复数个光学标记物间：
24.权利要求18的方法，其中由所述第一和第二种类生成的所述光学信号是不同的。
25.权利要求24的方法，其进一步包括：
26.方法，其包括：
27.权利要求26的方法，其进一步包括，对于所述复数个光学标记物的至少一个，在测量空间分辨的光学信号之后且在使所述生物样品暴露于所述多个复数个光学标记物中的另一个之前，从所述样品中除去与所述多个第一和第二标记物区中的至少一个杂交的所述至少一个光学标记物。
28.权利要求27的方法，其中除去所述至少一个光学标记物包括使所述至少一个光学标记物从所述多个第一和第二标记物区中的至少一个脱杂交。
29.权利要求26的方法，其中所述至少一个第一报告物部分的每个报告物部分包含在所述报告物部分内不重复的第一标记物区。
30.权利要求29的方法，其中所述至少一个第二报告物部分的每个报告物部分包含在所述报告物部分内不重复的第二标记物区。
31.权利要求26的方法，其中所述至少一个第一报告物部分的每个报告物部分包含至少3个在所述报告物部分内不重复的第一标记物区。
32.权利要求31的方法，其中所述至少一个第二报告物部分的每个报告物部分包含至少3个在所述报告物部分内不重复的第二标记物区。
33.权利要求26的方法，其中每个标记物区包含至少15个核苷酸。
34.权利要求33的方法，其中每个标记物区包含至少30个核苷酸。
35.权利要求26的方法，其中所述至少一个第一报告物部分...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.方法，其包括：
2.权利要求1的方法，其进一步包括：对于所述光学标记物中的至少一个，在测量由所述光学标记物中的所述至少一个生成的光学信号之后且用不同的复数个光学标记物重复步骤(b)和(c)之前，从所述样品中除去所述光学标记物中的所述至少一个。
3.权利要求2的方法，其中除去所述光学标记物中的所述至少一个包括使所述光学标记物中的所述至少一个从所述报告物部分的一个或更多个标记物区脱杂交。
4.权利要求1的方法，其中至少一种类型的检测部分的所述至少一个报告物部分包含在所述至少一个报告物部分内不重复的标记物区。
5.权利要求4的方法，其中每种类型的检测部分的所述至少一个报告物部分包含在所述至少一个报告物部分内不重复的标记物区。
6.权利要求1的方法，其中至少一种类型的检测部分的所述至少一个报告物部分包含至少3个在所述至少一个报告物部分内不重复的标记物区。
7.权利要求6的方法，其中每种类型的检测部分的所述至少一个报告物部分包含至少3个在所述至少一个报告物部分内不重复的标记物区。
8.权利要求1的方法，其中每个标记物区包含至少15个核苷酸。
9.权利要求8的方法，其中每个标记物区包含至少30个核苷酸。
10.权利要求1的方法，其中所述报告物部分中的每一个的每个标记物区包含相同数量的核苷酸。
11.权利要求1的方法，其中所述报告物部分中的每一个包含相同数量的标记物区。
12.权利要求1的方法，其中生成所述光学信号的所述种类是荧光部分。
13.权利要求1的方法，其中生成所述光学信号的所述种类包含至少一种荧光核苷酸。
14.权利要求1的方法，其中测量由所述光学标记物生成的光学信号包括获得所述样品中的所述光学标记物的至少一个图像，并且鉴定与所述至少一个图像中的所述光学标记物对应的光学信号。
15.权利要求1的方法，其中步骤(b)中的每个复数个光学标记物包含相同数量的不同类型的光学标记物。
16.权利要求1的方法，其中步骤(b)中的每个复数个光学标记物包含3个或更多个不同类型的光学标记物。
17.权利要求16的方法，其中步骤(b)中的每个复数个光学标记物包含5个或更多个不同类型的光学标记物。
18.权利要求1的方法，其进一步包括，重复步骤(b)直到所述样品已经暴露于光学标记物集，其中所述至少一个报告物部分的每个标记物区在所述光学标记物集中具有互补光学标记物。
19.权利要求1的方法，其进一步包括将所述样品暴露于所述复数个光学标记物中的至少一个超过一次。
20.权利要求1的方法，其中每次执行步骤(b)，步骤(b)中的所述复数个光学标记物的每个成员包含生成不同光学信号的种类。
21.权利要求20的方法，其中所述不同光学信号具有不同的光谱分布。
22.权利要求1的方法，其中在所述复数个光学标记物间：
23.权利要求1的方法，其中在所述复数个光学标记物间：
24.权利要求18的方法，其中由所述第一和第二种类生成的所述光学信号是不同的。
25.权利要求24的方法，其进一步包括：
26.方法，其包括：
27.权利要求26的方法，其进一步包括，对于所述复数个光学标记物的至少一个，在测量空间分辨的光学信号之后且在使所述生物样品暴露于所述多个复数个光学标记物中的另一个之前，从所述样品中除去与所述多个第一和第二标记物区中的至少一个杂交的所述至少一个光学标记物。
28.权利要求27的方法，其中除去所述至少一个光学标记物包括使所述至少一个光学标记物从所述多个第一和第二标记物区中的至少一个脱杂交。
29.权利要求26的方法，其中所述至少一个第一报告物部分的每个报告物部分包含在所述报告物部分内不重复的第一标记物区。
30.权利要求29的方法，其中所述至少一个第二报告物部分的每个报告物部分包含在所述报告物部分内不重复的第二标记物区。
31.权利要求26的方法，其中所述至少一个第一报告物部分的每个报告物部分包含至少3个在所述报告物部分内不重复的第一标记物区。
32.权利要求31的方法，其中所述至少一个第二报告物部分的每个报告物部分包含至少3个在所述报告物部分内不重复的第二标记物区。
33.权利要求26的方法，其中每个标记物区包含至少15个核苷酸。
34.权利要求33的方法，其中每个标记物区包含至少30个核苷酸。
35.权利要求26的方法，其中所述至少一个第一报告物部分的每个标记物区包含相同数量的核苷酸。
36.权利要求26的方法，其中所述至少一个第一报告物部分的每一个包含相同数量的标记物区。
37.权利要求36的方法，其中所述至少一个第二报告物部分的每一个包含相同数量的标记物区。
38.权利要求26的方法，其中所述光学标记物中的每一个包含生成光学信号的种类。
39.权利要求38的方法，其中生成所述光学信号的所述种类是荧光部分。
40.权利要求38的方法，其中生成所述光学信号的所述种类包含至少一种荧光核苷酸。
41.权利要求26的方法，其中测量由所述至少一个光学标记物生成的空间分辨的光学信号包括，获得所述样品中所述至少一个光学标记物的至少一个图像，并且鉴定与所述至少一个图像中的光学标记物对应的光学信号。
42.权利...
【专利技术属性】
技术研发人员：P·J·米勒，J·肯尼迪达林，
申请(专利权)人：阿科亚生物科学股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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