【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及仪器分析领域，具体涉及一种检测人血浆和脑脊液中奥希替尼浓度的方法。
技术介绍
1、临床上将肺癌分为小细胞肺癌(small cell lung cancer，sclc)和非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer，nsclc)。nsclc约占肺癌的85％，约75％的患者发现时已处于中晚期。其中，nsclc中有11％～60％具有人表皮生长因子受体(epidermal growthfactor receptor，egfr)突变，egfr突变的晚期患者，表皮生长因子酪氨酸激酶抑制剂(epidermal growth factor－tyrosine kinase inhibitors，egfr-tkis)是目前一线标准治疗方案。
2、奥希替尼(osimertinib)作为第三代egfr-tki药物，对t790m、ex19del、l858r等egfr突变有强烈抑制作用以及中枢神经系统治疗活性。研究表明，奥希替尼由于其相对较小的相对分子量和良好的脂溶性，可以通过血脑屏障控制egfr阳性突变体的nsclc脑转移。于2020年进入nccn和csco晚期egfr突变nsclc患者一线治疗指南。
3、目前egfr-tkis浓度主要的检测手段有hplc、hplc-ms/ms等定量分析方法。hplc、hplc-ms/ms法被用于检测血浆或组织中奥希替尼及代谢物的浓度，但这些方法存在一些缺点，例如耗时、繁琐的样品制备和高样品量(100μl)，致使这些方法不足以用于药代动力学研究。目前国内外egf
技术实现思路
1、因此，本专利技术旨在提供一种新的检测人血浆和脑脊液中奥希替尼浓度的方法，具体采用超高效液相色谱串联质谱(uplc-ms/ms)法。
2、为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
3、本专利技术提供一种检测人血浆和脑脊液中奥希替尼浓度的方法，包括以下步骤：
4、(1)溶液配制：
5、精密称取奥希替尼对照品，用50％甲醇配成奥希替尼储备液备用，精密量取储备液，用空白血浆或空白脑脊液稀释为不同浓度梯度的标准溶液；
6、精密称取格列美脲，用50％甲醇配制为储备液并稀释成所需浓度的内标溶液；
7、(2)样品处理：
8、将血浆或脑脊液样品在室温下解冻后涡旋混合，用蛋白质沉淀法处理样品：精密吸取处理后的样品置于离心管中，加入内标溶液和甲醇，涡旋混合，离心，取上清液加入50％甲醇稀释，涡旋混合，得到供试品溶液；
9、(3)仪器检测：
10、将不同浓度梯度的标准溶液按照步骤(2)的方式加入内标溶液和甲醇后进行处理，通过超高效液相色谱串联质谱法测定其被测组分和内标物的峰面积比，绘制内标标准曲线；
11、将所述供试品溶液在相同条件下进样，并通过内标标准曲线法计算血浆或脑脊液中的奥希替尼浓度，
12、仪器检测中的色谱条件包括：流动相：a：含0.1％甲酸的水溶液，b：乙腈；洗脱条件：梯度洗脱，0.01～1.5min：20％～80％ b；1.5～4min：80％ b；4～4.1min：80％～20％b；4.1～5min：20％ b。
13、进一步地，色谱条件还包括：色谱柱：beh c18，50mm×2.1mm，1.7μm。
14、进一步地，色谱条件还包括：柱温：40℃；流速：0.3ml/min；进样体积：1μl。
15、进一步地，仪器检测中的质谱条件包括：离子源：esi；检测模式：正离子检测模式，mrm；源电压：5500v；源温度：500℃；裂解能量：65v；解簇电压：163v；入口电压：11v；出口电压：15v；雾化气：55psi；加热辅助气：55psi；奥希替尼m/z：500.2→72.1，格列美脲m/z：491.2→352.0。
16、进一步地，步骤(1)中，所述奥希替尼储备液的浓度为0.5mg/ml；用空白血浆稀释得到的标准溶液的浓度分别为1ng/ml、3ng/ml、10ng/ml、30ng/ml、100ng/ml、300ng/ml、1000ng/ml；用空白脑脊液稀释得到的标准溶液的浓度分别为1ng/ml、3ng/ml、5ng/ml、10ng/ml、30ng/ml、50ng/ml、100ng/ml。
17、进一步地，步骤(1)中，格列美脲储备液的浓度为1mg/ml，所述内标溶液的浓度为100ng/ml。
18、进一步地，步骤(2)中，所述处理后的样品与内标溶液和甲醇的体积比为1：1：5。
19、进一步地，步骤(2)中，涡旋混合的条件为：转速2000r/min，时间2min。
20、进一步地，步骤(2)中，离心的条件为：转速11000r/min，时间5min。
21、进一步地，步骤(2)中，所述上清液与50％甲醇的体积比为1：9。
22、本专利技术技术方案，具有如下优点：
23、本专利技术提供了一种简便、灵敏、快速、准确的uplc-ms/ms方法检测人血浆和脑脊液中奥希替尼的浓度。奥希替尼血药浓度在1～1000ng/ml，脑脊液浓度在1～100ng/ml范围内存在良好线性的关系，选择性、准确度精密度、基质效应、提取回收率和稳定性均符合方法学测定的要求。本专利技术提供的检测方法可以为临床实践提供支持，对指导临床精准治疗有重要意义。
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1.一种检测人血浆和脑脊液中奥希替尼浓度的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的检测人血浆和脑脊液中奥希替尼浓度的方法，其特征在于，色谱条件还包括：色谱柱：BEH C18，50mm×2.1mm，1.7μm。
3.根据权利要求1所述的检测人血浆和脑脊液中奥希替尼浓度的方法，其特征在于，色谱条件还包括：柱温：40℃；流速：0.3mL/min；进样体积：1μL。
4.根据权利要求1所述的检测人血浆和脑脊液中奥希替尼浓度的方法，其特征在于，仪器检测中的质谱条件包括：离子源：ESI；检测模式：正离子检测模式，MRM；源电压：5500V；源温度：500℃；裂解能量：65V；解簇电压：163V；入口电压：11V；出口电压：15V；雾化气：55psi；加热辅助气：55psi；奥希替尼m/z：500.2→72.1，格列美脲m/z：491.2→352.0。
5.根据权利要求1所述的检测人血浆和脑脊液中奥希替尼浓度的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述奥希替尼储备液的浓度为0.5mg/mL；用空白血浆稀释得到的标准溶液的浓度分别为1n
6.根据权利要求1所述的检测人血浆和脑脊液中奥希替尼浓度的方法，其特征在于，步骤(1)中，格列美脲储备液的浓度为1mg/mL，所述内标溶液的浓度为100ng/mL。
7.根据权利要求1所述的检测人血浆和脑脊液中奥希替尼浓度的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述处理后的样品与内标溶液和甲醇的体积比为1：1：5。
8.根据权利要求1所述的检测人血浆和脑脊液中奥希替尼浓度的方法，其特征在于，步骤(2)中，涡旋混合的条件为：转速2000r/min，时间2min。
9.根据权利要求1所述的检测人血浆和脑脊液中奥希替尼浓度的方法，其特征在于，步骤(2)中，离心的条件为：转速11000r/min，时间5min。
10.根据权利要求1所述的检测人血浆和脑脊液中奥希替尼浓度的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述上清液与50％甲醇的体积比为1：9。
...【技术特征摘要】
1.一种检测人血浆和脑脊液中奥希替尼浓度的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的检测人血浆和脑脊液中奥希替尼浓度的方法，其特征在于，色谱条件还包括：色谱柱：beh c18，50mm×2.1mm，1.7μm。
3.根据权利要求1所述的检测人血浆和脑脊液中奥希替尼浓度的方法，其特征在于，色谱条件还包括：柱温：40℃；流速：0.3ml/min；进样体积：1μl。
4.根据权利要求1所述的检测人血浆和脑脊液中奥希替尼浓度的方法，其特征在于，仪器检测中的质谱条件包括：离子源：esi；检测模式：正离子检测模式，mrm；源电压：5500v；源温度：500℃；裂解能量：65v；解簇电压：163v；入口电压：11v；出口电压：15v；雾化气：55psi；加热辅助气：55psi；奥希替尼m/z：500.2→72.1，格列美脲m/z：491.2→352.0。
5.根据权利要求1所述的检测人血浆和脑脊液中奥希替尼浓度的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述奥希替尼储备液的浓度为0.5mg/ml；用空白血浆稀释得到的标准溶液的浓度分别为1ng/ml、3ng/ml、10ng/...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘江，左亚兰，杨培丹，梁平，
申请(专利权)人：河北医科大学第四医院，
类型：发明
国别省市：
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