【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种抗lilrb1抗体及其制备方法和应用。
技术介绍
1、目前癌症免疫疗法研究的重点是通过靶向t细胞检查点来恢复抗肿瘤t细胞的功能，从而增强对肿瘤的适应性免疫。靶向pd-1(程序死亡受体-1)/pdl1(程序死亡受体配体-1)和ctla-4(细胞毒性t淋巴细胞相关蛋白-4)/b7的信号通路取得了巨大成功。但是只有少数患者受益。嵌合抗原受体的t细胞(car-t细胞)不容易进入实体瘤，导致其作用有限。肿瘤微环境中含有大量巨噬细胞，可占肿瘤体积的50％。重要的是，这些巨噬细胞具有免疫监视功能。随着“别吃我”分子cd47的发现，以巨噬细胞相关先天免疫抑制信号通路cd47-sirpα为靶点的抗体药物应运而生，并在实验室和临床上取得了令人惊叹的成果，但仍存在无法解释的肿瘤免疫逃逸现象。在研究癌症对抗cd47抗体的免疫耐受性时，发现了肿瘤细胞上的第二个“别吃我”分子，即mhc i类的一个组成部分—β2微球蛋白(β2m)。一些肿瘤细胞通过减少其表面mhc i类的表达，来逃避t细胞的识别。然而，另一些肿瘤细胞则高表达与mhci类重链复合的β2m，通过与巨噬细胞上的白细胞免疫球蛋白样受体b家族成员1(lilrb1)结合，发出“别吃我”的信号，从而失去免疫监视。通过阻断肿瘤相关巨噬细胞中这种免疫抑制mhc i类-lilrb1信号轴将有助于恢复巨噬细胞功能，增强抗肿瘤反应。
2、白细胞ig样受体亚家族b(lilrb)是一类具有细胞外ig样结构域和细胞内itim(基于酪氨酸的免疫受体抑制基序)的i型跨膜糖蛋
3、人类白细胞抗原g(hla-g)主要表达于胎盘中的外绒毛层滋养细胞，它在妊娠期间介导母胎免疫耐受。虽然hla-g在健康组织中的表达受到限制，但病理条件可诱导hla-g的表达。在各种癌症中，包括结直肠癌(crc)、乳腺癌、黑色素瘤和卵巢癌中，都可以观察到hla-g的新表达。hla-g表达经常与疾病进展、肿瘤转移和不良临床预后相关。hla-g通过与lilrb1(ilt2)和lilrb2(ilt4)受体相互作用，抑制细胞毒性t细胞、自然杀伤细胞(nk)和b细胞的功能，诱导t细胞无能，调节髓系细胞，促进t调节细胞(treg)。此外，在抗原递呈细胞(apcs)，如髓系来源抑制细胞(mdscs)或耐受性树突状细胞(dcs)上表达的hla-g可使t细胞低反应并诱导treg分化。因此靶向lilrbs将对肿瘤治疗起到多种调节功能。
技术实现思路
1、为了解决上述问题，本专利技术采用lilrb1的胞外域进行免疫，并在初筛阶段就对抗体与lilrb1在细胞水平的结合进行考察，筛选出特异性结合细胞表面lilrb1的高亲和力抗体。该抗体有希望用于治疗肿瘤。
2、本专利技术第一方面提供一种抗lilrb1抗体，所述抗lilrb1抗体包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区的cdr1包括如seq id no:3所示的氨基酸序列；所述重链可变区的cdr2包括如seq id no:4所示的氨基酸序列；所述重链可变区的cdr3包括如seq id no:5所示的氨基酸序列；所述轻链可变区的cdr1包括如seq id no:6所示的氨基酸序列；所述轻链可变区的cdr2包括如seq id no:7所示的氨基酸序列；所述轻链可变区的cdr3包括如seqid no:8所示的氨基酸序列。
3、本专利技术第二方面提供一种多核苷酸，编码上述的抗lilrb1抗体。
4、本专利技术第三方面提供一种表达载体，含有上述的多核苷酸。
5、本专利技术第四方面提供一种宿主细胞，所述表达系统含有上述的表达载体或基因组中整合有外源的上述的多核苷酸。
6、本专利技术第五方面提供一种试剂盒或药物，所述试剂盒或药物包括上述的抗lilrb1抗体。
7、本专利技术第六方面提供一种制备上述抗lilrb1抗体的方法，包括在允许所述lilrb1抗体表达的条件下，培养上述的表达载体的宿主细胞或基因组中整合有外源的上述多核苷酸的宿主细胞，从培养的宿主细胞培养物中回收所述抗体。
8、本专利技术第七方面提供上述的抗lilrb1抗体、上述的多核苷酸、上述的表达载体、上述的试剂盒或药物、上述的方法在制备用于诊断、治疗或预防肿瘤的产品中的用途。
9、本专利技术的有益效果在于：
10、1)本专利技术提供的抗lilrb1抗体对细胞表面的lilrb1具有高亲和力，能特异性与lilrb1结合，而不与hlilrb2、hlilra1、hlilra2、hlilra3结合。
11、2)抗lilrb1抗体具有良好的结合活性，结合活性高于对标抗体bion-202。
12、3)抗lilrb1抗体能有效阻断hla-g与lilrb1的结合，为肿瘤治疗提供新的技术方案。
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1.一种抗LILRB1抗体，其特征在于，所述抗LILRB1抗体包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区的CDR1包括如SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列；所述重链可变区的CDR2包括如SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列；所述重链可变区的CDR3包括如SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列；所述轻链可变区的CDR1包括如SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列；所述轻链可变区的CDR2包括如SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列；所述轻链可变区的CDR3包括如SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列。
2.根据权利要求1所述的抗LILRB1抗体，其特征在于，所述抗LILRB1抗体的重链可变区的氨基酸序列包括如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列；
3.根据权利要求1所述的抗LILRB1抗体，其特征在于，所述抗LILRB1抗体还包括重链恒定区和轻链恒定区，优选的，所述重链恒定区为人源IgG4重链恒定区，所述轻链恒定区为人源Kappa轻链恒定区，优选的，所述IgG4重链恒定区氨基酸序列相对于野生型IgG4重链恒定区氨基酸序列存在如下突变：S228P，所述
4.根据权利要求3所述的抗LILRB1抗体，其特征在于，所述抗LILRB1抗体的重链恒定区的氨基酸序列包括如SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列；
5.一种多核苷酸，编码权利要求1-4任一项所述的抗LILRB1抗体。
6.一种表达载体，含有权利要求5所述的多核苷酸。
7.一种宿主细胞，所述宿主细胞含有如权利要求6所述的表达载体或基因组中整合有外源的如权利要求5所述的多核苷酸。
8.一种试剂盒或药物，所述试剂盒或药物包括如权利要求1～4任一项所述的抗LILRB1抗体。
9.一种制备如权利要求1～4任一项所述的抗LILRB1抗体的方法，包括，在允许所述LILRB1抗体表达的条件下，培养含有权利要求6所述的表达载体的宿主细胞或基因组中整合有外源的权利要求5所述多核苷酸的宿主细胞，从培养的宿主细胞培养物中回收所述抗体。
10.权利要求1～4任一项权利要求所述的抗LILRB1抗体、权利要求5所述的多核苷酸、权利要求6所述的表达载体、权利要求7所述的宿主细胞、权利要求8所述的试剂盒或药物、权利要求9所述的方法在制备用于诊断、治疗或预防肿瘤的产品中的用途；优选的，所述肿瘤为食管癌、胃癌、大肠癌、肝癌、鼻咽癌、脑肿瘤、肺癌、乳腺癌、宫颈癌、骨癌、肾细胞癌、黑素瘤、胰腺癌、皮肤癌、卵巢癌、阴道癌、甲状腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、膀胱癌、中枢神经系统瘤、内分泌系统癌、尿道癌、脊椎肿瘤、血液瘤中的一种或多种；更优选的，所述肿瘤为血液瘤。
...【技术特征摘要】
1.一种抗lilrb1抗体，其特征在于，所述抗lilrb1抗体包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区的cdr1包括如seq id no:3所示的氨基酸序列；所述重链可变区的cdr2包括如seq id no:4所示的氨基酸序列；所述重链可变区的cdr3包括如seq id no:5所示的氨基酸序列；所述轻链可变区的cdr1包括如seq id no:6所示的氨基酸序列；所述轻链可变区的cdr2包括如seq id no:7所示的氨基酸序列；所述轻链可变区的cdr3包括如seq id no:8所示的氨基酸序列。
2.根据权利要求1所述的抗lilrb1抗体，其特征在于，所述抗lilrb1抗体的重链可变区的氨基酸序列包括如seq id no:1所示的氨基酸序列；
3.根据权利要求1所述的抗lilrb1抗体，其特征在于，所述抗lilrb1抗体还包括重链恒定区和轻链恒定区，优选的，所述重链恒定区为人源igg4重链恒定区，所述轻链恒定区为人源kappa轻链恒定区，优选的，所述igg4重链恒定区氨基酸序列相对于野生型igg4重链恒定区氨基酸序列存在如下突变：s228p，所述野生型igg4重链恒定区氨基酸序列如seq id no:11所示。
4.根据权利要求3所述的抗lilrb1抗体，其特征在于，所述抗lilrb1抗体的重链恒定区的氨基酸序列包括如seq i...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈亚莉，张红艳，景庆庆，金理娜，万婷婷，郭晓月，许杰，
申请(专利权)人：上海吉凯生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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