【技术实现步骤摘要】
本申请涉及双特异性抗体活性检测，特别是涉及一种检测双特异性抗体结合活性的方法及试剂盒。
技术介绍
1、enzyme linked immunosorbent assay，elisa即酶联免疫吸附测定，是一类常用的免疫酶技术。该方法主要是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，然后利用酶标记(偶联)的抗体或抗原与之孵育，加入显色剂显色，将酶标板放入酶标仪中，在450nm下测定吸光值，使用酶标仪自带软件或者graph pad prism8.0软件分析曲线，以获得标准物和待测物的ec50值，计算待测物的相对活性。
2、抗体药物的活性测定是对药物的有效性和药物效价的测定，是抗体药物评价体系中必不可少的部分，是探索药物作用机制(moa)，提供药物ind申报依据的重要手段。elisa是测定抗体的抗原结合能力的主要检测方式。
3、受限于常规的抗体elisa检测实验都是针对单靶点的检测，对于双特异性抗体(以下简称双抗)，因为双抗具有双靶点，需要分别测定两个靶点的抗原结合能力。因此，现有的基于elisa检测的双特异性抗体活性检测方法存在以下缺陷和不足：一是耗时耗力，二是无法同时反映双抗两个靶点的结合活性。
技术实现思路
1、本申请的目的是提供一种新的检测双特异性抗体结合活性的方法及试剂盒。
2、为了实现上述目的，本申请采用了以下技术方案：
3、本申请的一方面公开了一种检测双特异性抗体结合活性的方法，包括将与待测双特异性抗体结合的第一抗原固定在固体介质上，
4、需要说明的是，本申请的检测方法，先将第一抗原固定在固体介质上，待测双特异性抗体如果具有良好的与第一抗原结合的能力，则会被固定在固体介质上的第一抗原捕获；然后再加入带组氨酸标记的第二抗原，如果待测双特异性抗体具有良好的与第二抗原结合的能力，则能够进一步的捕获带组氨酸标记的第二抗原；由于第二抗原带有组氨酸标记，采用常规的his-hrp抗体即可实现对带有组氨酸标记的第二抗原进行检测，以此反映双特异性抗体对两个靶点的结合活性。本申请的方法，能够同时对双特异性抗体的两个靶点进行抗原结合能力检测，时间短，检测结果能够反应两个靶点的抗原结合能力。
5、本申请的一种实现方式中，固体介质为酶标板。
6、可以理解，酶标板是本领域常规使用的elisa检测方式；根据本申请的专利技术构思，不排除还可以采用其他方式固定第一抗原，例如层析柱或者其他固体介质。
7、本申请的一种实现方式中，待测双特异性抗体为能够与4-1bb抗原和msln抗原同时结合的双抗药物。
8、需要说明的是，与4-1bb抗原和msln抗原同时结合的双抗药物只是本申请的一种实现方式中具体检测的待测双特异性抗体；可以理解，本申请的检测方法不仅限于该双抗药物的检测，其他双特异性抗体同样可以采用并且的方法进行两个靶点抗原结合能力的检测。
9、本申请的一种实现方式中，对双抗药物进行检测的第一抗原为4-1bb抗原，第二抗原为带有组氨酸标记的msln抗原，即msln-his抗原。
10、本申请的一种实现方式中，本申请方法具体包括以下步骤：
11、(1)抗原包板步骤，将第一抗原加入酶标板中，孵育；
12、(2)封闭步骤，对孵育过夜的酶标板进行清洗，然后采用封闭缓冲液封闭酶标板，封闭完成后，清洗酶标板，备用；
13、(3)一抗处理步骤，将待测双特异性抗体加入酶标板中，孵育；
14、(4)第二抗原处理步骤，对步骤(3)孵育后的酶标板进行清洗，然后，将带有组氨酸标记的第二抗原加入酶标板中，孵育；
15、(5)二抗处理步骤，将his-hrp加入酶标板中，孵育；
16、(6)显色步骤，对步骤(5)孵育后的酶标板进行清洗，然后，加入显色液，室温避光显色；
17、(7)终止步骤，染色完成后，加入h2so4终止显色；
18、(8)分析检测步骤，将酶标板放入酶标仪中，在450nm下测定吸光值，获得双特异性抗体结合活性检测结果。
19、本申请的一种实现方式中，步骤(1)孵育的条件为4℃孵育过夜。
20、本申请的一种实现方式中，步骤(2)采用封闭缓冲液封闭酶标板的方式为，加入封闭缓冲液，室温孵育1-3小时。
21、本申请的一种实现方式中，步骤(3)、步骤(4)和步骤(5)孵育的条件为37℃孵育0.5-2小时；
22、本申请的一种实现方式中，步骤(6)室温避光染色的时间为10-15分钟。
23、本申请的另一面公开了一种检测双特异性抗体结合活性的试剂盒，包括与待测双特异性抗体结合的第一抗原和第二抗原，以及his-hrp抗体；其中，第二抗原带有组氨酸标记。
24、例如，对于与4-1bb抗原和msln抗原同时结合的双抗药物，第一抗原为4-1bb抗原，第二抗原为带有组氨酸标记的msln抗原，即和msln-his抗原。
25、本申请的一种实现方式中，本申请的试剂盒还包括酶标板，以及elisa检测试剂。
26、由于采用以上技术方案，本申请的有益效果在于：
27、本申请检测双特异性抗体结合活性的方法，能够同时对双特异性抗体的两个靶点进行抗原结合能力检测，不仅时间短，而且还能够反应两个靶点的抗原结合能力，为双特异性抗体结合活性检测提供了一种新的方案和途径。
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1.一种检测双特异性抗体结合活性的方法，其特征在于：包括将与待测双特异性抗体结合的第一抗原固定在固体介质上，将待测双特异性抗体与第一抗原结合，将带有组氨酸标记的与待测双特异性抗体结合的第二抗原与待测双特异性抗体结合，采用His-HRP抗体检测带有组氨酸标记的第二抗原，实现双特异性抗体结合活性的检测。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述固体介质为酶标板。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述待测双特异性抗体为能够与4-1BB抗原和MSLN抗原同时结合的双抗药物。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述第一抗原为4-1BB抗原，所述第二抗原为带有组氨酸标记的MSLN抗原，即MSLN-His抗原。
5.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其特征在于：具体包括以下步骤，
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：步骤（1）中，孵育的条件为4℃孵育过夜。
7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：步骤（2）中，采用封闭缓冲液封闭酶标板的方式为，加入封闭缓冲液，室温孵育1-3小时。
<...【技术特征摘要】
1.一种检测双特异性抗体结合活性的方法，其特征在于：包括将与待测双特异性抗体结合的第一抗原固定在固体介质上，将待测双特异性抗体与第一抗原结合，将带有组氨酸标记的与待测双特异性抗体结合的第二抗原与待测双特异性抗体结合，采用his-hrp抗体检测带有组氨酸标记的第二抗原，实现双特异性抗体结合活性的检测。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述固体介质为酶标板。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述待测双特异性抗体为能够与4-1bb抗原和msln抗原同时结合的双抗药物。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述第一抗原为4-1bb抗原，所述第二抗原为带有组氨酸标记的msln抗原，即msln-his抗原。
5.根据权利要...
【专利技术属性】
技术研发人员：靳翠翠，吴三星，苏吾娇，何宇君，
申请(专利权)人：深圳市乐土生命科技投资有限公司，
类型：发明
国别省市：
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