家蚕血液型脓病病源ＢｍＮＰＶ直接ＰＣＲ检测法制造技术

本发明专利技术公开了一种家蚕血液型脓病病源ＢｍＮＰＶ直接ＰＣＲ检测法，其检测方法首先对染病家蚕的血液通过乙醇沉淀法进行处理，去除ＰＣＲ反应抑制物；根据家蚕血液型脓病病源ＢｍＮＰＶ的基因组分析，设计多角体蛋白基因ＰＣＲ引物；对多角体蛋白基因进行ＰＣＲ扩增，反应体系中加入了抗ＰＣＲ反应抑制物ＢＳＡ，同时以家蚕线粒体ＣＯＩ基因的引物进行ＰＣＲ反应做阳性对照；分别取正常家蚕血液和感染了白僵病、绿僵病、细菌病、微孢子病的家蚕的染病中肠，进行ＰＣＲ反应的特异性分析；琼脂糖胶电泳检测上述ＰＣＲ反应结果。整个检测过程操作简单，仅４个小时就可完成。应用本发明专利技术定期抽样检测，可以在ＢｍＮＰＶ感染早期对疾病进行诊断，及时采取措施预防疾病的发生。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及由家蚕核型多角体病毒BmNPV引起的家蚕血液型脓病的早期分子生 物学诊断技术，属家蚕蚕病防治生物

技术介绍
家蚕是有重要经济价值的鳞翅目昆虫，在国际市场上，我国生丝出口占世界生丝 出口总量的90%以上，绸缎出口占50%以上，丝绸服装出口也占相当大的比重。家蚕核型多角体病毒(BmNPV)是一种环状双链DNA，由其引起的家蚕核型多角体 病是茧丝生产中最重要的病害，该病传染性极强，难以控制。每年全国蚕桑生产因蚕病的损 失占到总产量的30%，其中70%由核型多角体病毒(BmNPV)引起。该病在各龄幼虫、蛹、成虫 期均可发生，每年都有5-20%的发病率，严重时可达到50%。目前我国还没有对BmNPV引起 的疾病进行早期规范化的诊断技术，生产上主要依靠病症来进行诊断，即在发病中后期才 可以诊断，而此时病蚕已不可用药物治疗，严重影响了蚕农的生产积极性和蚕桑产业的发 展。基于PCR的诊断技术已经在疾病的诊断中发挥了重要的作用，它具有快速、灵敏、 准确的特点，并已在人类的一些由病原微生物引起的疾病如HIV、SARS等中得到广泛应用。 染病家蚕血细胞中BmNPV多角体(occl本文档来自技高网...

【技术保护点】
家蚕血液型脓病病源ＢｍＮＰＶ直接ＰＣＲ检测法，其特征在于检测步骤如下：　　（１）对染病家蚕的血液通过乙醇沉淀法进行处理，去除ＰＣＲ反应抑制物；　　（２）根据家蚕血液型脓病病源ＢｍＮＰＶ的基因组分析，设计多角体蛋白基因（ｐｏｌｙｈｅｄｒｏｎ，ｐｏｌｈ）　ＰＣＲ引物，　　引物序列为：ｐｏｌｈｆ：ＡＴＧＣＣＧＡＡＴＴＡＴＴＣＡＴＡＣＡＣＣＣＣ　　ｐｏｌｈｒ：ＴＡＡＴＡＣＧＣＣＧＧＡＣＣＡＧＴＧＡＡＣＡＧ　　（３）对多角体蛋白基因进行ＰＣＲ扩增，反应体系中加入了抗ＰＣＲ反应抑制物ＢＳＡ，同时以家蚕线粒体ＣＯＩ基因的引物进行ＰＣＲ反应做阳性对照；　　（４）分别取正常家蚕血液和感染了白僵病、绿僵病、细菌病...

【技术特征摘要】
家蚕血液型脓病病源BmNPV直接PCR检测法，其特征在于检测步骤如下(1)对染病家蚕的血液通过乙醇沉淀法进行处理，去除PCR反应抑制物；(2)根据家蚕血液型脓病病源BmNPV的基因组分析，设计多角体蛋白基因 (polyhedron, polh) PCR引物，引物序列为polhfATGCCGAATTATTCATACACCCCpolhr...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨金宏，孔卫青，王代钢，
申请(专利权)人：安康学院，
类型：发明
国别省市：61[中国|陕西]