【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于细胞免疫学、分子生物学领域，具体涉及一种由百日咳毒素(pt)刺激产生的单克隆抗体及其应用。
技术介绍
1、百日咳是小儿常见的急性呼吸道传染病，百日咳杆菌是本病的致病菌。百日咳的特征为阵发性痉挛性咳嗽，咳嗽末伴有特殊的吸气吼声，病程较长，可达数周甚至3个月左右，故有百日咳之称。本病通过飞沫传播，传染性极强。百日咳典型的临床症状为持续性阵发性咳嗽，带有吸气性尾声或呕吐，易合并肺炎和脑炎，是导致死亡的主要原因。
2、百日咳杆菌能够产生多种毒性因子，包括百日咳毒素、丝状血凝素(fha)和黏附素(prn)等。其中pt是主要致病因子，pt能诱发机体的持久免疫力，对防治百日咳具有非常重要的作用。同时，pt又具有多种生物活性，比如提高小鼠对组织胺和5-羟色胺的敏感性，抑制巨噬细胞功能，损伤呼吸道纤毛上皮细胞导致阵发性痉挛咳嗽等等。
3、目前，对于无细胞百日咳联合疫苗中有效抗原(pt等)的鉴别实验，主要是通过酶联免疫吸附试验(elisa)，而具有高度特异性的抗pt单克隆抗体可以大大提高实验的准确性和可靠性。目前国内无细胞百日咳疫苗的主要定量检测方法是总蛋白定量，该方法只能对样品中所有蛋白成分总含量进行定量，因此不能监控各批在制产品中各种抗原的质量浓度和比例，造成产品批间差异较大、稳定性较差。目前在无细胞百日咳疫苗生产过程中国际上已趋向采用elisa准确定量其各单一抗原组分，并对其分离纯化进行定量监控。使用高度特异性的抗pt单克隆抗体采用elisa对于pt纯化各个步骤样品以及百日咳类疫苗成品中pt抗原含量进行检
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种抗百日咳毒素的抗体、其编码序列及其在预防或治疗中的应用，旨在用高纯度的抗pt单克隆抗体来进行百日咳疫苗各生产步骤以及成品中对于pt抗原含量的检测，该抗体具有良好特异性、稳定性，可以大大提高pt抗原含量检测的准确性、特异性和工作效率，降低试验成本。
2、第一方面，本专利技术涉及一种抗百日咳毒素的单克隆抗体或其抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段包含重链和轻链，所述重链包含重链互补决定区hcdr1、hcdr2和hcdr3，所述轻链包含轻链互补决定区lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中：
3、(1)所述hcdr1的氨基酸序列如seq id no:1所示，所述hcdr2的氨基酸序列如seqid no:2所示，所述hcdr3的氨基酸序列如seq id no:3所示；或
4、(2)所述hcdr1、hcdr2、hcdr3的氨基酸序列分别为seq id no:1-3经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸而获得的氨基酸序列，且分别与seq id no:1-3功能相同；或
5、(3)所述hcdr1、hcdr2、hcdr3的氨基酸序列分别与seq id no:1-3具有80％以上同一性；并且
6、(4)所述lcdr1的氨基酸序列如seq id no:4所示，所述lcdr2的氨基酸序列如seqid no:5所示，所述lcdr3的氨基酸序列如seq id no:6所示；或
7、(5)所述lcdr1、lcdr2、lcdr3的氨基酸序列分别为seq id no:4-6经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸而获得的氨基酸序列，且分别与seq id no:4-6功能相同；或
8、(6)所述lcdr1、lcdr2、lcdr3的氨基酸序列分别与seq id no:4-6具有80％以上同一性；
9、或者，
10、(1)所述hcdr1的氨基酸序列如seq id no:9所示，所述hcdr2的氨基酸序列如seqid no:10所示，所述hcdr3的氨基酸序列如seq id no:11所示；或
11、(2)所述hcdr1、hcdr2、hcdr3的氨基酸序列分别为seq id no:9-11经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸而获得的氨基酸序列，且分别与seq id no:9-11功能相同；或
12、(3)所述hcdr1、hcdr2、hcdr3的氨基酸序列分别与seq id no:9-11具有80％以上同一性；并且
13、(4)所述lcdr1的氨基酸序列如seq id no:12所示，所述lcdr2的氨基酸序列如seqid no:13所示，所述lcdr3的氨基酸序列如seq id no:14所示；或
14、(5)所述lcdr1、lcdr2、lcdr3的氨基酸序列分别为seq id no:12-14经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸而获得的氨基酸序列，且分别与seq id no:12-14功能相同；或
15、(6)所述lcdr1、lcdr2、lcdr3的氨基酸序列分别与seq id no:12-14具有80％以上同一性。
16、在优选的实施方案中，重链互补决定区hcdr1的氨基酸序列如seq id no:1所示；重链互补决定区hcdr2的氨基酸序列如seq id no:2所示；重链互补决定区hcdr3的氨基酸序列如seq id no:3所示；轻链互补决定区lcdr1的氨基酸序列如seq id no:4所示；轻链互补决定区lcdr2的氨基酸序列如seq id no:5所示；轻链互补决定区lcdr3的氨基酸序列如seq id no:6所示；
17、或者，
18、其中重链互补决定区hcdr1的氨基酸序列如seq id no:9所示；重链互补决定区hcdr2的氨基酸序列如seq id no:10所示；重链互补决定区hcdr3的氨基酸序列如seq idno:11所示；轻链互补决定区lcdr1的氨基酸序列如seq id no:12所示；轻链互补决定区lcdr2的氨基酸序列如seq id no:13所示；轻链互补决定区lcdr3的氨基酸序列如seq idno:14所示。
19、在优选的实施方案中，所述抗体重链的氨基酸序列如seq id no:7所示；或者，所述抗体的重链的氨基酸序列为seq id no:7经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸而获得的氨基酸序列，且与seq id no:7功能相同；或者，所述抗体的重链的氨基酸序列与seq idno:7具有80％以上同一性；并且
20、所述抗体的轻链的氨基酸序列如seq id no:8所示；或者，所述抗体的轻链的氨基酸序列为seq id no:8经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸而获得的氨基酸序列，且与seq id no:8功能相同；或者，所述抗体的轻链的氨基酸序列与seq id no:8具有80％以上同一性；
21、或者，
22、其中所述抗体重链的氨基酸序列如seq id no:15所示；或者，所述抗体的重链的氨基酸序列为seq id no:15经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸而获得的氨基酸序列，且与seq id no:1本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种抗百日咳毒素的单克隆抗体或其抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段包含重链和轻链，其特征在于，所述重链包含重链互补决定区HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述轻链包含轻链互补决定区LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中：
2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中重链互补决定区HCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；重链互补决定区HCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示；重链互补决定区HCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示；轻链互补决定区LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示；轻链互补决定区LCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示；轻链互补决定区LCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示；
3.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体重链的氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示；或者，所述抗体的重链的氨基酸序列为SEQ ID NO:7经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸而获得的氨基酸序列，且与SEQ ID NO:7功能相同；或者，所述抗体的重链的氨基酸序列与SEQ
4.根据权利要求1-3中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗原结合片段包括Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv片段和/或单链抗体。
5.核酸分子，其编码权利要求1-4中任一项的抗体或其抗原结合片段。
6.根据权利要求5所述的核酸分子，其为分离的DNA。
7.一种检测装置，包括权利要求1-4中任一项的抗体或其抗原结合片段，优选地所述装置用于检测百日咳毒素，优选地所述装置为试纸、试剂盒或芯片。
8.根据权利要求7所述的装置，其为ELISA检测试剂盒，其包含包被抗体和检测抗体，其中所述包被抗体为根据权利要求1-4中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，所述检测抗体为特异性识别百日咳毒素的抗体；
9.一种药物组合物，其包含权利要求1-4中任一项的抗体或其抗原结合片段以及可药用的载体。
10.权利要求1-4中任一项的抗体或其抗原结合片段在制备用于检测百日咳毒素的装置中的用途；优选地，所述装置包括但不限于试纸、试剂盒或芯片。
11.权利要求1-4中任一项的抗体或其抗原结合片段在制备用于治疗由百日咳毒素引起的疾病的药物制剂中的用途；优选地，所述疾病是百日咳。
12.权利要求1-4中任一项的抗体或其抗原结合片段在百日咳疫苗质检中的用途，优选地用于检测百日咳疫苗制备过程中或疫苗成品中百日咳毒素抗原的含量。
13.一种检测生物学样品中百日咳毒素抗原的存在和/或量的方法，所述方法包括：
...【技术特征摘要】
1.一种抗百日咳毒素的单克隆抗体或其抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段包含重链和轻链，其特征在于，所述重链包含重链互补决定区hcdr1、hcdr2和hcdr3，所述轻链包含轻链互补决定区lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中：
2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中重链互补决定区hcdr1的氨基酸序列如seq id no:1所示；重链互补决定区hcdr2的氨基酸序列如seq id no:2所示；重链互补决定区hcdr3的氨基酸序列如seq id no:3所示；轻链互补决定区lcdr1的氨基酸序列如seq id no:4所示；轻链互补决定区lcdr2的氨基酸序列如seq id no:5所示；轻链互补决定区lcdr3的氨基酸序列如seq id no:6所示；
3.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体重链的氨基酸序列如seq id no:7所示；或者，所述抗体的重链的氨基酸序列为seq id no:7经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸而获得的氨基酸序列，且与seq id no:7功能相同；或者，所述抗体的重链的氨基酸序列与seq id no:7具有80％以上同一性；并且
4.根据权利要求1-3中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗原结合片段包括fab、fab’、f(ab’)2、fv片段...
【专利技术属性】
技术研发人员：王梦舒，刘大维，韩玲，江涛，沈雪，
申请(专利权)人：长春百克生物科技股份公司，
类型：发明
国别省市：
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