一种Cas12a变体及其在基因编辑中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种Cas12a变体及其在基因编辑中的应用，所述Cas12a变体的氨基酸序列如SED ID NO.1所示。本发明专利技术通过构建FnCas12a的K1065E突变体，提高FnCas12a对双链DNA切割的靶向特异性，降低其脱靶概率。所述Cas12a变体的发现进一步扩大了基因编辑工具的种类。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基因编辑，特别涉及一种cas12a变体及其在基因编辑中的应用。

技术介绍

1、基于crispr/cas系统的基因编辑方法自问世以来，在基础研究、疾病诊断和临床治疗等领域得到了广泛的应用。除了最早被应用于基因编辑的crispr/cas9系统，cas12a作为crisprⅱ类效应蛋白的成员，亦受到了科学界的广泛关注。相比于cas9蛋白需要crrna和tracrrna两个分子才实现对双链dna分子的切割，cas12a只需要单一的crrna诱导即可完成对目标双链dna的有效切割(如图1)。同时，crispr/cas12a蛋白在完成对目标双链dna的顺式切割后保持催化活化状态，随后开启对单链dna的非靶向反式切割，具有疾病和病毒检测的潜在应用。此外，通常cas9偏好的pam序列通常富含g，而cas12a所偏好的pam序列则富含t，此特性更能与cas9优势互补，拓宽基因编辑的范围。目前，仅有francisella tularensiscas12a(fncas12a)、acidaminococcus sp.cas12a(ascas12a)与lachnosp本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种Cas12a变体，其特征在于，所述Cas12a变体的氨基酸序列如SED ID NO.1所示，所述Cas12a变体蛋白具有增加的相对于相应的野生型Cas12a蛋白的DNA切割选择性。

2.一种重组表达载体，其特征在于，所述重组载体表达权利要求1所述的Cas12a变体。

3.根据权利要求2所述的重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体包括质粒载体、病毒载体和噬菌体载体中的任意一种。

4.一种重组菌或重组细胞系或重组病毒，其特征在于，包含权利要求2所述的重组表达载体。

5.一种重组病毒，其特征在于，所述重组病毒采用权利要求3所述的病毒载...

【技术特征摘要】

1.一种cas12a变体，其特征在于，所述cas12a变体的氨基酸序列如sed id no.1所示，所述cas12a变体蛋白具有增加的相对于相应的野生型cas12a蛋白的dna切割选择性。

2.一种重组表达载体，其特征在于，所述重组载体表达权利要求1所述的cas12a变体。

3.根据权利要求2所述的重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体包括质粒载体、病毒载体和噬菌体载体中的任意一种。

4.一种重组菌或重组细胞系或重组病毒，其特征在于，包含权利要求2所述的重组表达载体。

5.一种重组病毒，其特征在于，所述重组病毒采用权利要求3所述的病毒载体包装获得，所述重组病毒包括表达权利要求1所述的cas...

【专利技术属性】
技术研发人员：竺立哲，雷湧，袁罗伟，刘慧慧，
申请(专利权)人：香港中文大学深圳，
类型：发明
国别省市：