嵌合抗原受体T细胞制造技术

本发明专利技术涉及嵌合抗原受体(CAR)T细胞，并且具体地但不排他地涉及它们在免疫疗法中的用途，以及用于治疗、预防或改善癌症(例如T细胞淋巴瘤)、各种微生物感染(例如HIV和TB)以及自身免疫性疾病的用途。本发明专利技术特别涉及CAR工程化粘膜相关恒定T(MAIT)细胞的用途，以及用于刺激、分离和扩增高度纯化的MAIT细胞的新方法，然后可以将其工程化改造为此类CAR‑MAIT细胞。本发明专利技术还涉及体外扩增MAIT细胞的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】

技术介绍

技术实现思路

【技术保护点】

1.一种分离MAIT细胞的方法，所述方法包括：

2.一种产生CAR-MAIT细胞的方法，所述方法包括：

3.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述方法包括在对PBMC进行MACS和/或FACS之前刺激PBMC。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述刺激步骤包括使PBMC接触：(a)包含MR1/5-OP-RU或5-OP-RU的抗原；和/或(b)细胞因子；优选地，所述刺激步骤包括使PBMC接触：(a)包含MR1/5-OP-RU或5-OP-RU的抗原；和(b)细胞因子。

5.根据权利要求4所述的方法，其中所述细胞因子是白细胞介素。

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【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

1.一种分离mait细胞的方法，所述方法包括：

2.一种产生car-mait细胞的方法，所述方法包括：

3.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述方法包括在对pbmc进行macs和/或facs之前刺激pbmc。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述刺激步骤包括使pbmc接触：(a)包含mr1/5-op-ru或5-op-ru的抗原；和/或(b)细胞因子；优选地，所述刺激步骤包括使pbmc接触：(a)包含mr1/5-op-ru或5-op-ru的抗原；和(b)细胞因子。

5.根据权利要求4所述的方法，其中所述细胞因子是白细胞介素。

6.根据权利要求4或5所述的方法，其中所述细胞因子是选自il-2、il-7、il-12、il-15、il-18和il-23或其任意组合中的一种或多种白细胞介素。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述一种或多种白细胞介素包含：(i)il-2；(ii)il-12和il-18；(iii)il-2、il-12和il-18；(iv)il-12、il-18和il-23；(v)il-2、il-12、il-18和il-23，或(vi)il-7、il-15、il-12和il-18。

8.根据权利要求6或7所述的方法，其中所述一种或多种白细胞介素包含il-12、il-18和il-23的组合。

9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述方法包括对pbmc进行macs和facs以从中分离mait细胞。

10.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中对pbmc进行macs，然后进行facs。

11.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述分离的mait细胞用抗cd3抗体激活。

12.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述分离的mait细胞用抗cd28抗体激活。

13.根据权利要求2至12中任一项所述的方法，其中步骤(iv)包括用编码嵌合抗原受体(car)的核酸转导mait细胞，任选地所述转导通过病毒或逆转录病毒进行。

14.根据权利要求13所述的方法，其中所述核酸编码靶向t细胞上的cd4抗原的car。

15.根据权利要求13所述的方法，其中所述核酸编码靶向t细胞上的至少一个或多个tcr vbeta区的car。

16.根据权利要求15所述的方法，其中所述一个或多个tcr vbeta区是(i)表1中所示的tcr vbeta区，和/或(ii)选自由以下vbeta区：vb 1、vb 2、vb 3、vb 5.1、vb 7.1、vb8、vb12、vb 13.1、vb 17和vb 20。

17.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述方法包括在步骤(iv)之后的后续步骤中扩增car-mait细胞。

18.根据权利要求17所述的方法，其中car-mait细胞的扩增步骤包括在转导后一天或两天收获转导的car-mait细胞；任选地其中收获的细胞与白细胞介素接触，优选il-2；任选地其中所述白细胞介素是在r10培养基中。

19.一种通过根据前述权利要求中任一项所述的方法获得或可获得的car-mait细胞。

20.一种表达嵌合抗原受体(car)的粘膜相关恒定t(mait)细胞。

21.根据权利要求19或20所述的mait细胞，其中所述car-mait细胞表达靶向t细胞上的cd4抗原的car，任选地其中所述car对包含基本上如seq id no：1所示的氨基酸或其变体或片段的cd4抗原具有特异性。

22.根据权利要求19或20所述的mait细胞，其中所述car-mait细胞表达靶向t细胞上的t细胞受体(tcr)β链可变区(vbeta)的car；任选地(i)如表1所示的任意一个vbeta区，或者(ii)t细胞上的多个t细胞受体(tcr)β链可变区(vbeta)，任选地其中所述多个vbeta区选自表1所示的一组vbeta区，任选地其中所述多个tcr vbeta区是相同或不同的vbeta区。

23.根据权利要求22所述的mait细胞，其中所述car靶向选自下组的t细胞上的一个或多个tcr vbeta区：vb 1、vb...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐晓宁，马伟伟，钱宇新，
申请(专利权)人：帝国理工学院有限公司，
类型：发明
国别省市：