【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及电穿孔，特别涉及一种电穿孔缓冲液及其应用。
技术介绍
1、car-t细胞是通过基因工程技术激活并装上肿瘤嵌合抗原受体的t细胞，专门用于识别体内肿瘤细胞，并通过免疫作用释放大量的多种效应因子，car-t细胞能高效地杀灭肿瘤细胞，治疗恶性肿瘤。car-t细胞制备过程中，t细胞对dna转染耐受很低，使得转染后实际存活的细胞并不多，大大降低了生产效率。电穿孔技术是通过将原代细胞重悬在电穿孔缓冲液中，并加入质粒混匀，进行电穿孔，将电击后细胞继续培养，获得目的细胞，可以大大提高car-t细胞的生产效率。
2、现有报道认为，电穿孔技术制备car-t细胞的过程中，改变使用的缓冲液渗透压能够显著抑制由cgas-sting途径介导的dna转染毒性，依此设计的b1mix电穿孔缓冲液能将car-t细胞的生产效率提升20倍以上，生成的car-t细胞抗肿瘤活性也高于传统慢病毒方法。然而，b1mix电穿孔缓冲液含11种成分，成分复杂，制备繁琐；其采用的glutamax价格较高，且其采用的硝酸钙是易制爆管制品，购买手续繁琐，以上各种因素导致b1mix电穿孔缓冲液的整体成本非常高，不宜进行工业化使用。
技术实现思路
1、针对b1mix电穿孔缓冲液制备复杂、原料成本高、购买手续繁琐等导致的不宜进行工业化使用的问题，本专利技术提供了一种成本较低的电穿孔缓冲液及其应用。
2、本专利技术提供的技术方案具体如下：
3、第一方面，本专利技术提供一种电穿孔缓冲液，渗透压力为270
4、
5、所述磷酸盐缓冲对包括na2hpo4和nah2po4；
6、所述丁二酸及其盐包括丁二酸、丁二酸钠、丁二酸钾、丁二酸镁中的一种或多种；
7、所述非离子型渗透剂为葡萄糖、蔗糖、果糖、甘露醇、山梨醇、乳糖、海藻糖、甘油、peg300、peg400、peg600、甘氨酸、脯氨酸、牛磺酸、甜菜碱、硼酸中的一种或多种。
8、本专利技术提供的一些实施方式中，所述电穿孔缓冲液由以下组分组成：
9、
10、本专利技术提供的一些实施方式中，所述电穿孔缓冲液由以下组分组成:
11、
12、
13、磷酸盐缓冲对为na2hpo4和nah2po4，其中，na2hpo4浓度为62.5mm，nah2po4浓度为24.3mm。
14、本专利技术提供的一些实施方式中，所述电穿孔缓冲液的电导率为7-8ms/cm。
15、本专利技术提供的一些实施方式中，所述电穿孔缓冲液用于电转mrna，还包括：k+1-40mm，肌醇1-25mm。
16、本专利技术提供的一些实施方式中，所述k+的浓度为1-4mm，肌醇的浓度为1-3mm。
17、本专利技术提供的一些实施方式中，所述电穿孔缓冲液中各物质的浓度为：
18、
19、磷酸盐缓冲对为na2hpo4和nah2po4，其中，na2hpo4浓度为31.25mm，nah2po4浓度为12.15mm。
20、本专利技术提供的一些实施方式中，所述电穿孔缓冲液用于电转mrna，还包括：
21、glutamax、l-glutamine、d-glutamine中的一种或多种，浓度为1％～3％；
22、丙酮酸钠、丙酮酸、乙酰半胱氨酸、柠檬酸、edta、dpta、硫醇、抗坏血酸或多酚、抗坏血酸、硫代硫酸盐、甲硫氨酸、生育酚、没食子酸丙酯、叔丁基对苯二酚、丁基羟基茴香醚、丁基羟基甲苯中的一种或多种，浓度为0.5～0.6mm。
23、本专利技术提供的一些实施方式中，所述电穿孔缓冲液中的mg2+由mgcl2提供，所述非离子型渗透剂为葡萄糖。
24、第二方面，本专利技术提供上述电穿孔缓冲液在电穿孔技术中的应用。
25、与现有技术相比，本专利技术提供的技术方案具有以下有益效果：
26、1.本专利技术提供的cyto e1电穿孔缓冲液和t1y2相对已报道的b1mix电穿孔缓冲液减少了多种成分，配制上更高效，且未采用管制品硝酸钙，以及成本较高的glutamaxtm，成本低廉，易于工业推广。
27、2.本专利技术提供的t1mix电穿孔缓冲液和t1y2电穿孔缓冲液降低了电导率，在电转mrna时，平均荧光强度有显著提高，效率高于已报道的b1mix电穿孔缓冲液。
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1.一种电穿孔缓冲液，其特征在于，渗透压力为270-330mOsm/kg，电导率为7-13mS/cm，所述电穿孔缓冲液由以下组分组成：
2.根据权利要求1所述的电穿孔缓冲液，其特征在于：所述电穿孔缓冲液由以下组分组成：
3.根据权利要求1所述的电穿孔缓冲液，其特征在于：所述电穿孔缓冲液由以下组分组成：
4.根据权利要求1所述的电穿孔缓冲液，其特征在于：所述电穿孔缓冲液的电导率为7-8mS/cm。
5.根据权利要求4所述的电穿孔缓冲液，其特征在于：所述电穿孔缓冲液用于电转mRNA，还包括：K+1-40mM，肌醇1-25mM。
6.根据权利要求5所述的电穿孔缓冲液，其特征在于：所述K+的浓度为1-4mM，肌醇的浓度为1-3mM。
7.根据权利要求5或6所述的电穿孔缓冲液，其特征在于：所述电穿孔缓冲液中各物质的浓度为：
8.根据权利要求5或6所述的电穿孔缓冲液，其特征在于：所述电穿孔缓冲液用于电转mRNA，还包括：
9.根据权利要求1所述的电穿孔缓冲液，其特征在于：所述电穿孔缓冲液中的Mg2
10.权利要求1～9任一项所述的电穿孔缓冲液在电穿孔技术中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种电穿孔缓冲液，其特征在于，渗透压力为270-330mosm/kg，电导率为7-13ms/cm，所述电穿孔缓冲液由以下组分组成：
2.根据权利要求1所述的电穿孔缓冲液，其特征在于：所述电穿孔缓冲液由以下组分组成：
3.根据权利要求1所述的电穿孔缓冲液，其特征在于：所述电穿孔缓冲液由以下组分组成：
4.根据权利要求1所述的电穿孔缓冲液，其特征在于：所述电穿孔缓冲液的电导率为7-8ms/cm。
5.根据权利要求4所述的电穿孔缓冲液，其特征在于：所述电穿孔缓冲液用于电转mrna，还包括：k+1-40mm，肌醇...
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