非传播抗猪瘟和乙脑基因工程双价标记减毒活疫苗及应用制造技术

本发明专利技术提供了一种非传播抗猪瘟和乙脑基因工程双价标记减毒活疫苗及其应用。通过基于猪瘟病毒（ＣＳＦＶ）石门株感染性ｃＤＮＡ克隆反向遗传操作，构建ＣＳＦＶ?Ｅ２基因缺失的突变体感染性ｃＤＮＡ克隆，在其开放阅读框的５′端插入乙型脑炎病毒（ＪＥＶ）囊膜糖蛋白Ｅ的主要保护性抗原区编码序列，构建了Ｅ２基因缺失的ＣＳＦＶ嵌合突变体；该Ｅ２缺失嵌合突变体能在表达ＣＳＦＶＥ２ｐ７的反式互补细胞系中拯救出抗猪瘟和乙脑的双价疫苗种毒并进行增殖。该疫苗接种猪体能够诱导机体产生针对ＣＳＦＶ和ＪＥＶ的特异性免疫应答，而其不能在猪体内形成感染性病毒颗粒和在猪群中传播，疫苗接种猪不产生Ｅ２抗体可用于区分ＣＳＦＶ野毒感染猪，是一种安全、高效的非传播双价标记疫苗。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因工程
本专利技术涉及一种非传播抗猪瘟和乙脑基因工程双 价标记减毒活疫苗及其构建方法，同时涉及该疫苗在预防猪瘟和乙型脑炎中的应用。
技术介绍
猪瘟是猪的一种传染性极强的病毒性疾病，早期称为猪霍乱(Hog Cholera, HC)， 可感染各年龄阶段猪，一年四季流行，发病率和死亡率均很高，危害巨大。猪瘟的病原体是 猪瘟病毒(Classical swine fever virus, CSFV)，在国际兽疫局(ΟΙΕ)制定的《国际动物 卫生法典》中，猪瘟被列入A类16种法定报告的传染病之一。我国近年来猪瘟频繁爆发流 行，给养猪业造成了严重经济损失，妨碍了畜牧业的发展和出口贸易，提高对猪瘟的预防和 控制水平是科技工作的重大课题。CSFV基因组长为约12. 3kb的单股正链RNA，由5 ‘端非编码区 (5' Untranstaledregion, 5' UTR)、一个大的开放阅读框架(ORF)和3 ‘端非编码区 (3' UTR)构成。ORF编码一个由3898个氨基酸残基组成的多聚蛋白，多聚蛋白在翻译过程 中或翻译后，被病毒自身编码的蛋白酶和宿主细胞的蛋白酶加工成12种本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种非传播抗猪瘟和乙脑基因工程双价标记减毒活疫苗，其是通过将ＣＳＦＶ全长Ｅ２基因或其部分缺失，构建得到非传播ＣＳＦＶ　Ｅ２缺失突变体；将ＦＭＤＶ的２Ａ蛋白编码序列、泛素蛋白编码序列和ＪＥＶ　Ｅ蛋白抗原区编码序列融合得到ＪＥＶ　Ｅ蛋白抗原区编码基因与２ＡＵｂｉ的融合序列，并将其插入到ＣＳＦＶ　Ｅ２缺失突变体开放阅读框的５′端，构建得到非传播抗猪瘟和乙脑基因工程双价标记减毒活疫苗。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：潘兹书，杨振华，张楚瑜，
申请(专利权)人：武汉大学，
类型：发明
国别省市：83[中国|武汉]