【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及污染物残留量测定，具体涉及一种测定手性污染物在人体消化系统中残留量的分析方法。
技术介绍
1、手性污染物六溴环十二烷(hexabromocyclodocane，hbcd)是全球第三代溴代阻燃剂，由α-hbcd、β-hbcd、γ-hbcd三种异构体组成，以外消旋体形式使用于环境。产品母体之间为物理性混合，易在材料的使用和废弃过程中析出，对环境造成污染。该物质具有稳定的环状结构、高度的疏水性，较高的辛醇-水分配系数，在环境中很难进行生物/非生物降解，会通过食物链的富集放大在哺乳动物及人体内蓄积。该物质已在2013年《关于持久性有机污染物的斯德哥尔摩公约》缔约方大会上被明确列为持久性有机污染物，并被建议禁止生产和使用。已有文献报道，相较于其他初级农产品，水产品中hbcd检出率较高。(+)-α-hbcd、β-hbcd、γ-hbcd比相应的(-)-α-hbcd、β-hbcd、γ-hbcd对斑马鱼hepg2细胞毒性更大。(+)-α-hbcd和(+)-γ-hbcd会在斑马鱼和镜鲤体内选择性富集，而(±)-β-hbcd并没有选择性积累现象。这说明，各对映体之间在环境和生物体内也表现出不同的对映体选择性行为及毒性效应。水产品中不同手性结构的hbcd经人体胃肠消化后，在胃肠消化系统的残留量将对人体健康风险评估起到关键性作用。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于克服现有技术的上述不足，提供一种测定手性污染物在人体消化系统中残留量的分析方法。
2、为实现上述专利技术目的，本专
3、对水产品样品进行体外消化模拟实验，得到不同消化阶段的消化样品；
4、对不同阶段的所述消化样品进行前处理，前处理后利用高效液相色谱-串联质谱仪进行hbcd残留量的测定。
5、在一个实施例中，取500g新鲜带壳贝类，洗净后蒸熟，去壳，取肉及蒸制所得汤汁形成湿样，将湿样放于托盘中，放入-40℃冰箱预冻36h，随后马上转移至冻干机中冻干48h，冻干后研磨至粉状，-20℃保存，形成冻干样，将所述冻干样作为所述水产品样品。
6、在一个实施例中，对水产品样品进行体外消化模拟实验，得到不同消化阶段的消化样品，包括：
7、口腔模拟消化阶段：称取所述水产品样品(5±0.1)g于100ml锥形瓶中，加4.0ml纯水，混匀，复原冻干样至湿样，再加入10ml口腔阶段电解液、100μl 0.3mol/lcacl2、1mlα-淀粉酶，混合成糊状，该消化阶段α-淀粉酶活性为75u/ml；37℃恒温水浴，160r/min振荡2min，得到第一消化物；
8、胃模拟消化阶段：取所述第一消化物20ml于100ml锥形瓶中，加入15ml胃阶段电解液、3.2ml胃蛋白酶与脂肪酶混合溶液、10μl 0.3mol/lcacl2、1.39ml纯水，1mol/lhcl调节ph至3.0，该消化阶段胃蛋白酶活性为2000u/ml，胃脂肪酶活性为60u/ml；迅速往锥形瓶中充入氮气10～15min，以保证厌氧条件，密闭后37℃恒温避光水浴，160r/min振荡2h，得到第二消化物；
9、肠模拟消化阶段：取所述第二消化物40ml于150ml锥形瓶中，加入22ml肠阶段电解液、10ml胰蛋白酶溶液、5ml胆盐溶液、80μl 0.3mol/lcacl2、2.62ml纯水，1mol/lnaoh调节ph至7.0，该消化阶段胰蛋白酶活性为100u/ml；胆盐浓度为10mm；迅速充入氮气10～15min，以保证厌氧条件，密闭后37℃恒温避光水浴，160r/min振荡2h，得到第三消化样品。
10、在一个实施例中，口腔阶段电解液中包含0.5mol/l的kcl溶液15.1ml，0.5mol/l的kh2po4溶液3.7ml，1mol/l的nahco3溶液6.8ml，0.15mol/l的mgcl2(h2o)6溶液0.5ml，0.5mol/l的(nh4)2co3溶液60μl，6mol/l的hcl溶液90μl，纯水373.75ml；
11、胃腔阶段电解液中包含0.5mol/l的kcl溶液6.9ml，0.5mol/l的kh2po4溶液0.9ml，1mol/l的nahco3溶液12.5ml，2mol/l的nacl溶液11.8ml，0.15mol/l的mgcl2(h2o)6溶液0.4ml，0.5mol/l的(nh4)2co3溶液0.5ml，6mol/l的hcl溶液1.3ml，纯水365.7ml；
12、肠腔阶段电解液中包含0.5mol/l的kcl溶液6.8ml，0.5mol/l的kh2po4溶液0.8ml，1mol/l的nahco3溶液42.5ml，2mol/l的nacl溶液9.6ml，0.15mol/l的mgcl2(h2o)6溶液1.1ml，6mol/l的hcl溶液0.7ml，纯水338.5ml。
13、在一个实施例中，对不同阶段的所述消化样品进行前处理，包括：
14、取所述第二消化物或所述第三消化物至100ml离心管中，4000r/min离心10min；将上清液装入200ml分液漏斗中，加入20ml正己烷，剧烈振荡5min，将上清液装入100ml鸡心瓶中，用20ml正己烷再重复提取1次，提取结束后将鸡心瓶在40℃下减压旋转蒸发至近干；
15、用2.5ml正己烷洗涤鸡心瓶，然后转移到15ml离心管，重复此步骤一次；
16、进行净化步骤，所述净化步骤包括往15ml离心管中加入0.5ml浓硫酸，混匀，2000r/min离心4min，上清液转移至另一15ml的离心管中；重复所述净化步骤2～4次；
17、随后转入预先用5ml正己烷活化的硅胶固相萃取柱，12ml正己烷淋洗，8ml丙酮洗脱，收集全部洗脱液至10ml玻璃管，40℃下氮吹至干；加入0.5ml定容液超声溶解，过0.22μm滤膜后，供高效液相色谱-串联质谱仪测定。
18、在一个实施例中，利用高效液相色谱-串联质谱仪进行hbcd残留量的测定后，还包括：
19、利用高效液相色谱-串联质谱仪进行hbcd残留量的测定后，得到胃模拟消化阶段或肠胃模拟消化阶段中α-hbcd的浓度；
20、根据胃模拟消化阶段或肠胃模拟消化阶段中α-hbcd的浓度，计算在胃模拟消化阶段或肠模拟消化阶段的α-hbcd生物可给性。
21、在一个实施例中，计算在胃模拟消化阶段或肠模拟消化阶段的α-hbcd生物可给性，包括：
22、通过公式(1)计算胃模拟消化阶段或肠模拟消化阶段的α-hbcd生物可给性，所述公式(1)为：
23、
24、公式(1)中，ba为胃模拟消化阶段或肠模拟消化阶段的α-hbcd生物可给性(％)，c1为胃模拟消化阶段或肠模拟消化阶段中α-hbcd的浓度(ng/ml)，vl为胃模拟消化阶段，充入氮气前锥形瓶中液体体积或为肠模拟消化阶段，充入氮气前锥形瓶中液体体积(ml)，c本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种测定手性污染物在人体消化系统中残留量的分析方法，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的测定手性污染物在人体消化系统中残留量的分析方法，其特征在于，取500g新鲜带壳贝类，洗净后蒸熟，去壳，取肉及蒸制所得汤汁形成湿样，将湿样放于托盘中，放入-40℃冰箱预冻36h，随后马上转移至冻干机中冻干48h，冻干后研磨至粉状，-20℃保存，形成冻干样，将所述冻干样作为所述水产品样品。
3.根据权利要求1所述的测定手性污染物在人体消化系统中残留量的分析方法，其特征在于，对水产品样品进行体外消化模拟实验，得到不同消化阶段的消化样品，包括：
4.根据权利要求3所述的测定手性污染物在人体消化系统中残留量的分析方法，其特征在于：
5.根据权利要求3所述的测定手性污染物在人体消化系统中残留量的分析方法，其特征在于，对不同阶段的所述消化样品进行前处理，包括：
6.根据权利要求2所述的测定手性污染物在人体消化系统中残留量的分析方法，其特征在于，利用高效液相色谱-串联质谱仪进行HBCD残留量的测定后，还包括：
7.根据权利要求
8.根据权利要求7所述的测定手性污染物在人体消化系统中残留量的分析方法，其特征在于，冻干样中α-HBCD的含量的测定方法，包括：
9.根据权利要求8所述的测定手性污染物在人体消化系统中残留量的分析方法，其特征在于，对所述冻干样进行前处理，前处理后利用高效液相色谱-串联质谱仪测定冻干样中α-HBCD浓度，包括：
10.根据权利要求9所述的测定手性污染物在人体消化系统中残留量的分析方法，其特征在于，根据冻干样中α-HBCD浓度计算冻干样中α-HBCD的含量，包括：
...【技术特征摘要】
1.一种测定手性污染物在人体消化系统中残留量的分析方法，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的测定手性污染物在人体消化系统中残留量的分析方法，其特征在于，取500g新鲜带壳贝类，洗净后蒸熟，去壳，取肉及蒸制所得汤汁形成湿样，将湿样放于托盘中，放入-40℃冰箱预冻36h，随后马上转移至冻干机中冻干48h，冻干后研磨至粉状，-20℃保存，形成冻干样，将所述冻干样作为所述水产品样品。
3.根据权利要求1所述的测定手性污染物在人体消化系统中残留量的分析方法，其特征在于，对水产品样品进行体外消化模拟实验，得到不同消化阶段的消化样品，包括：
4.根据权利要求3所述的测定手性污染物在人体消化系统中残留量的分析方法，其特征在于：
5.根据权利要求3所述的测定手性污染物在人体消化系统中残留量的分析方法，其特征在于，对不同阶段的所述消化样品进行前处理，包括：
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【专利技术属性】
技术研发人员：钱卓真，刘智禹，汤水粉，陈燕婷，位绍红，刘海新，罗方方，姜琳琳，余颖，王丽娟，陈思，
申请(专利权)人：福建省水产研究所福建水产病害防治中心，
类型：发明
国别省市：
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