【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于农业科学，涉及水稻转录因子oswrky66及其应用。
技术介绍
1、作物抗虫性的利用是农业防治的一个重要方向。应用抗虫性品种有效地压低甚至消灭害虫，是符合我国农作物绿色控虫这一重大战略需求，且具产业化前景的。当前对半翅目昆虫，如稻飞虱的防治策略则主要依赖于化学农药，而化学农药的长期过量使用已经对生态环境造成严重威胁。因此，通过基因工程技术培育抗稻飞虱水稻新品种是一种行之有效的绿色控虫策略。
2、纵观我国百余年的水稻育种历程，经历了矮化育种、杂种优势利用(三系法杂交水稻)和绿色超级稻(两系法杂交水稻)培育3次跨越式突破。每1次突破均是一些核心基因发挥了至关重要的作用，包括矮化基因sd1(程式华主编.中国超级稻育种[m].北京：科学出版社，2010.)、核质互作雄性不育恢复基因rf3和rf4(景润春,何予卿,黄青阳.水稻野败型细胞质雄性不育恢复基因的issr和sslp标记分析[j].中国农业科学,2000,33(2):10-15)以及光温敏核不育基因pms3(梅明华，陈亮，章志宏，等.农垦58s光敏不育基因突变位点的确定及pms3区间的进一步作图[j].中国科学，1999，29(3)：6)，这极大地加速了我国育种业的发展，始终处于世界领先地位。近年来，研究发现其它一些基因，如抗稻瘟病基因pi(bryangt,wu ks,farrall l,et al.a single amino acid difference distinguishesresistant and susceptible alleles o
3、在褐飞虱中，国内外已经鉴定和报道了43个主效抗性基因，其中bph14、bph15、bph3、bph2/26、bph9/1/7/10/21、bph18、bph29、bph32、bph6已经被克隆研究(程式华主编.中国超级稻育种[m].北京：科学出版社，2010.)。考虑到将来若含有这些基因的抗虫水稻被大面积种植，选择压会导致新的昆虫抗性生物型的进化，从而严重威胁了作物抗性的持久性。因此，不断挖掘新的抗虫基因或许能帮助作物抗性品系在农业应用上保持其耐久性。先前文献结果表明，转录因子wrky家族可以正或者负调控植物抗性(zhen x,zhang zl,zouxl,et al.annotations and functional analyses of the rice wrky genesuperfamily reveal positive and negative regulators of abscisic acidsignaling in aleurone cells[j].plant physiology,2005 137(1):176–189.)，目前对于oswrky66的功能未知。
技术实现思路
1、专利技术目的：针对传统育种获得优良水稻突变体材料费时费力的缺点，本专利技术所要解决的技术问题是提供了转录因子oswrky66或含有所述转录因子的过表达载体或重组菌在提高水稻对褐飞虱抗性中的应用，实现抗虫水稻品种的精准高效选育。
2、本专利技术还要解决的技术问题是提供了一种获得具有褐飞虱抗性水稻的方法。
3、技术方案：为了解决上述技术问题，本专利技术提供了转录因子oswrky66或含有所述转录因子的过表达载体在提高水稻对褐飞虱抗性中的应用，所述转录因子oswrky66的核苷酸序列如seq id no.1所示，其编码蛋白的氨基酸序列如seq id no.2所示。
4、其中，所述过表达载体包括pegoepubi-h-ubi-oswrky66-gus。
5、其中，所述过表达载体pegoepubi-h-ubi-oswrky66-gus是将目的基因oswrky66通过同源重组方法构建到过表达载体pegoepubi-h-ubi-gus中得到。
6、本
技术实现思路
还包括一种获得具有褐飞虱抗性水稻的方法，所述方法包括使水稻包含转录因子oswrky66或含有所述转录因子的过表达载体。
7、本专利技术oswrky66转录因子的过表达载体pegoepubi-h-ubi-oswrky66-gus遗传转化水稻日本晴后，显著提高了oswrky66的转录水平。
8、其中，所述方法具体包括如下步骤：将含有所述转录因子oswrky66的过表达载体转化至农杆菌感受态细胞中得到阳性菌，将阳性菌侵染野生型水稻的愈伤组织，移出该愈伤组织到共培养基中，20℃条件下培养48-72h后，接种到筛选培养基上，26℃暗培养20-30d后，挑取单克隆阳性愈伤组织接种到二次筛选培养基上，26℃暗培养7-10d后，将该阳性愈伤组织接种到分化培养基上，25-27℃光照培养15-20d，之后将分化出2-5cm的芽接种至生根培养基，30℃光照培养7-10d。
9、有益效果：相对于现有技术，本专利技术具备以下优点：本专利技术挖掘了wrky家族转录本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.转录因子OsWRKY66或含有所述转录因子的过表达载体或重组菌在提高水稻对褐飞虱抗性中的应用，其特征在于，所述转录因子OsWRKY66的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述转录因子OsWRKY66的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述过表达载体包括pEGOEPubi-H-Ubi-OsWRKY66-GUS。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述过表达载体pEGOEPubi-H-Ubi-OsWRKY66-GUS是将目的基因OsWRKY66通过同源重组方法构建到过表达载体pEGOEPubi-H-Ubi-GUS中得到。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述重组菌是将所述的过表达载体导入宿主菌中得到。
5.一种获得具有褐飞虱抗性水稻的方法，其特征在于，所述方法包括使水稻包含转录因子OsWRKY66或含有所述转录因子的过表达载体。
6.根据权利要求5所述的获得具有褐飞虱抗性水稻的方法，其特征在于，所述方法具体包括如下步骤：将含有所述转录因子OsWRK
...【技术特征摘要】
1.转录因子oswrky66或含有所述转录因子的过表达载体或重组菌在提高水稻对褐飞虱抗性中的应用，其特征在于，所述转录因子oswrky66的核苷酸序列如seq id no.1所示，所述转录因子oswrky66的氨基酸序列如seq id no.2所示。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述过表达载体包括pegoepubi-h-ubi-oswrky66-gus。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述过表达载体pegoepubi-h-ubi-oswrky66-gus是将目的基因oswrky66通过同源重组方法构建到过表达载体pegoepubi-h-ubi-gus中得到。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述重组菌是将所述的...
【专利技术属性】
技术研发人员：付健美，纪锐，方继朝，赵志畅，李晶，
申请(专利权)人：江苏省农业科学院，
类型：发明
国别省市：
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