一种同时检测精子脱氧核糖核酸碎片及膜完整性的方法技术

本发明专利技术公开了一种同时检测精子脱氧核糖核酸碎片及膜完整性的方法，其步聚如下：①制备低渗液；②制备伊红－吉姆萨染液；③单纯精子低渗肿胀实验；④离心处理步骤③中所述的低渗处理后精液，弃上清液，并稀释；⑤将步骤④中所述的稀释精液与琼脂凝胶按比例混匀后，进行孵育５分钟得配制精液；⑥将步骤⑤中所述的配制精液置入载玻片上；⑦将所述的载玻片在ＨＣｌ溶液内浸泡；⑧向所述的载玻片上加入三羟甲基氨基甲烷、二硫苏糖醇和磺化琥珀酸Ｎ－月桂基单酰胺二钠盐浸泡成标本片；⑨将步骤⑧中所述的标本片用缓冲液冲洗；⑩将所述标本片脱水；?????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????经步骤⑩脱水后的标本片干燥后加入染液染色。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及医学临床上使用的检测方法，确切地说是一种同时检测精子脱氧核糖 核酸碎片及膜完整性的方法。
技术介绍
精子膜完整性与精子代谢、顶体反应、精子获能及精卵融合密切相关，测定精子膜 是否完整可以准确地反映精子功能并预测精子潜在受精能力。自1984年建立精子尾部低 渗肿胀实验测定人精子膜功能以来，精子尾部低渗肿胀实验已成为目前不多的几个评价精 子膜功能的检测方法之一，越来越广泛地运用于男性生殖避孕的基础研究和不育的临床诊 治中。细胞的物质交换和新陈代谢活动依靠细胞膜进行，精子在男、女性生殖道中极易受到 各种化学物质影响，精子膜对这些物质的传递能力直接影响精子的活力和新陈代谢，从而 关系到能否获能，完成受精的全过程。因此，评价精子膜功能在精子功能检测中具有重要意 义。但是，单纯的精子低渗肿胀实验只能确定一个精子膜是否完整，而不能鉴别其DNA是否 完整，而仅单纯检测精子膜的完整性，而不检测精子脱氧核糖核酸碎片的完整性还不能准 确地判断精子的活性，因此，现有的实验方法难以准确判断出同一条精子的膜及DNA是否 有损伤，即难以对精子的质量作出精确的评价。
技术实现思路
本专利技术的目的，是提本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种同时检测精子脱氧核糖核酸碎片及膜完整性的方法，其特征在于：其步聚如下：　　①制备低渗液　　低渗液为每１００ｍｌ蒸馏水中含０．７３５ｇ柠檬酸钠和１．３５ｇ果糖，渗透压是１５０ｍＯｓｍ的溶液；　　②制备伊红－吉姆萨染液　　向每１００ｍｌ的０．９％的生理盐水中加入０．５ｇ伊红和０．１ｇ吉姆萨，混匀，使其充分溶解，配成染液，再用双层滤纸过滤，所得滤液即伊红－吉姆萨染液，伊红－吉姆萨染液置于２２℃室温内保存备用；　　③单纯精子低渗肿胀实验：　　向每１ｍｌ步骤中所述的低渗液中加入０．１ｍｌ精液，混匀，在水温为３７℃的水中水浴３０分钟后，得低渗处理后精液，观察２００个精子，计算尾部肿胀的精子比率；　　④...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王磊光，邱毅，张丽红，
申请(专利权)人：山东省计划生育科学技术研究所，
类型：发明
国别省市：88[中国|济南]