【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种用于诊断活动性肺结核病的tsrna标志物及其应用。
技术介绍
1、结核病是由结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis，mtb)感染引起的一种慢性传染性疾病。世界卫生组织(who)的报告显示，2022年全球新增结核病患者近1060万人，死亡人数高达130万。近年来由于耐药菌株的不断出现，结核病的治疗难度越来越大，广泛耐药结核菌株的出现给结核病的防治提出了新的挑战。
2、结核病的预防、诊断和治疗是结核病控制的三个重要环节。考虑到目前全球已有众多的感染者，早期发现和早期诊断结核病病人、及时给予有效的治疗,是减少结核病传播机会、控制结核病疫情的关键环节。目前常用的结核病诊断技术主要包括影像学检查、细菌学检查、分子生物学检测、免疫学实验检查等。结核菌感染的典型胸部x线改变对肺结核的诊断具有积极意义，但胸部x线片诊断肺结核的特异性低，尤其当病变在非好发部位及形态不典型时需与其他肺部疾病鉴别。涂片抗酸染色是结核病诊断最经典的手段，其优点是操作简单、快速，但该方法灵敏度低，仅为20％～30％。结核菌培养是结核病实验室诊断的“金标准”，但结核菌是慢生长菌，传统的固体培养技术耗时较长，一般需要4～8周时间，而全自动液体培养法虽可提高敏感度及缩短其检出时间，但该检测方法因价格高昂且易受污染，导致其应用受限。通过检测结核菌及其特异性dna片段的pcr等分子生物学方法，可用于快速诊断结核菌感染，但存在一定假阳性和假阴性，且检测成本较高。近年来，结核病免疫学诊断技术研究不断取得进
3、trna来源的小rna(trna-derived small rnas,tsrna)是近年来新发现的一类非编码rna分子，其片段长度为18-40nt，由成熟trna或其前体trna在不同位点特异性剪切产生，在生物界中广泛存在。近年的研究发现，tsrna并非由trna随机裂解产生的，而是通过某个特定机制生成。它们广泛存在于各种生物的组织细胞中，高度丰富且稳定，具有一定的组织、时序和疾病特异性，广泛参与机体各种生理和病理过程。尽管目前大多数tsrna的生物学功能尚不明确，但不少研究表明，tsrna分子具有类似于微小rna(microrna，mirna)的调控功能，通过与和靶基因mrna碱基配对引导沉默复合体降解mrna或阻碍其翻译，从而发挥基因调控功能。此外，还有研究发现部分tsrna可通过与rna结合蛋白结合发挥生物学功能，或充当rna结合蛋白海绵，调控有关蛋白质的活性。tsrna不仅在免疫细胞中丰富表达，还在感染及免疫调节中扮演着举足轻重的作用，可参与调节巨噬细胞免疫功能，从而保护宿主免受病毒感染。目前越来越多的证据表明，tsrna的异常表达与包括恶性肿瘤、心血管病及神经系统疾病在内的多种疾病的发生、发展密切相关。近来的研究发现一些特定的tsrna具有疾病和组织特异性，并具有良好的生物稳定性，这使得tsrna在作为新型临床生物标记物的开发应用上具有明显优势。然而，在结核病领域，还没有用于早期诊断的tsrna标志物。
4、鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供用于诊断活动性肺结核病的分子标志物、试剂及试剂盒。
2、本专利技术是这样实现的：
3、本专利技术第一方面提供一种tsrna生物标志物在制备用于诊断活动性肺结核病的试剂中的应用，所述tsrna生物标志物为trf-glu-tcc-026，其序列如seq id no.1所示为tcgactcccggtgtgggaacca。
4、进一步，所述试剂用于检测trf-glu-tcc-026的表达水平。
5、进一步，所述试剂用于检测外周血单个核细胞中trf-glu-tcc-026的表达水平。
6、进一步，所述试剂为荧光定量pcr检测方法用试剂。
7、进一步，所述试剂包括核苷酸序列如下的引物对：
8、trf-glu-ttc-026上游引物，如seq id no.2所示为：
9、5'-ctacagtccgacgatctcgac-3'；
10、trf-glu-ttc-026下游引物，如seq id no.3所示为：5'-cttccgatcttggttcccac-3'。
11、本专利技术第二方面提供一种活动性肺结核病诊断用试剂盒，所述试剂盒包含任选的用于检测trf-glu-tcc-026表达水平的试剂。
12、进一步，所述试剂用于检测外周血单个核细胞中trf-glu-tcc-026的表达水平。
13、进一步，所述试剂为荧光定量pcr检测方法用试剂。
14、进一步，所述试剂包括核苷酸序列如下的引物对：
15、trf-glu-ttc-026上游引物，如seq id no.2所示为：
16、5'-ctacagtccgacgatctcgac-3'；
17、trf-glu-ttc-026下游引物，如seq id no.3所示为：
18、5'-cttccgatcttggttcccac-3。
19、本专利技术利用高通量测序技术，通过差异分析，筛选到一条在人活动性肺结核病患者外周血单个核细胞中显著高表达的tsrna，即trf-glu-tcc-026。与健康人群、结核潜伏感染者及肺炎患者相比，trf-glu-tcc-026在活动性肺结核患者外周血单个核细胞中显著高表达，且表达水平与肺结核患者肺部损伤呈正相关。在大样本荧光定量pcr实验中进一步证实活动性肺结核患者外周血单个核细胞中trf-glu-tcc-026表达水平显著高于健康对照、结核潜伏感染者及肺炎患者。肺结核患者外周血单个核细胞中trf-glu-tcc-026表达水平在抗结核治疗后3个月后显著降低，与健康对照人群外周血单个核细胞中trf-glu-tcc-026表达水平差异无统计学意义。进一步的，trf-glu-tcc-026可促进巨噬细胞向m2极化，可促进结核菌在巨噬细胞内的存活。本专利技术通过检测trf-glu-tcc-026的表达水平，可以快速用于活动性肺结核病早期诊断，操作简便，准确性高，不仅为结核病临床诊断及预后监测提供一种新的策略，还可为结核病潜在治疗靶点提供了新的靶标，有利于新药的开发。
20、本专利技术的有益效果为：
21、(1)提出了trf-glu-tcc-026作为标志物在诊断活动性肺结核病中的用途；
22、(2)trf-glu-本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种tsRNA生物标志物在制备用于诊断活动性肺结核病的试剂中的应用，其特征在于，所述tsRNA生物标志物为tRF-Glu-TCC-026，其序列如SEQ ID NO.1所示为TCGACTCCCGGTGTGGGAACCA。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述试剂用于检测tRF-Glu-TCC-026的表达水平。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述试剂用于检测外周血单个核细胞中tRF-Glu-TCC-026的表达水平。
4.根据权利要求1-3任一项所述的应用，其特征在于，所述试剂为荧光定量PCR检测方法用试剂。
5.根据权利要求1-3任一项所述的应用，其特征在于，所述试剂包括核苷酸序列如下的引物对：
6.一种活动性肺结核病诊断用试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包含任选的用于检测tRF-Glu-TCC-026表达水平的试剂。
7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂用于检测外周血单个核细胞中tRF-Glu-TCC-026的表达水平。
8.根据权利要求6或7所述的试剂
9.根据权利要求6或7所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂包括核苷酸序列如下的引物对：
...【技术特征摘要】
1.一种tsrna生物标志物在制备用于诊断活动性肺结核病的试剂中的应用，其特征在于，所述tsrna生物标志物为trf-glu-tcc-026，其序列如seq id no.1所示为tcgactcccggtgtgggaacca。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述试剂用于检测trf-glu-tcc-026的表达水平。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述试剂用于检测外周血单个核细胞中trf-glu-tcc-026的表达水平。
4.根据权利要求1-3任一项所述的应用，其特征在于，所述试剂为荧光定量pcr检测方法用试剂...
【专利技术属性】
技术研发人员：黄自坤，李俊明，罗清，郭泳芩，乐爱平，
申请(专利权)人：南昌大学第一附属医院，
类型：发明
国别省市：
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