【技术实现步骤摘要】
专利
本公开内容涉及用于抑制血管生成素-样3基因表达的rna干扰(rnai)剂(例如双链rnai剂)、包含血管生成素-样3rnai剂的组合物和其使用方法。
技术介绍
0、背景
1、血管生成素-样3(亦称为angptl3、angpl3、ang3或血管生成素-样蛋白3)是由人类血管生成素-样3基因编码的血管生成素蛋白，其据报道参与调节脂质代谢。angptl3是460个氨基酸的多肽，其由信号肽、n-末端卷曲螺旋结构域和c-末端纤维蛋白原(fbn)-样结构域组成。已知angptl3主要在人类的肝细胞中产生，并且在合成后分泌到循环中。angptl3作为脂蛋白脂肪酶(其催化甘油三酯的水解)和内皮脂肪酶(其水解脂蛋白磷脂)的抑制剂起作用。这些酶的抑制可导致甘油三酯、高密度脂蛋白(hdl)和磷脂的血浆水平增加。此外，angptl3的功能丧失突变导致家族性低β脂蛋白血症，其特征为在血浆中低水平的甘油三酯和低密度脂蛋白(ldl-c)。在人类中，angptl3的功能丧失还与动脉粥样硬化心血管疾病的降低风险相关。
2、靶向angptl3的有效治疗剂可在治疗(包括预防性治疗)心脏代谢疾病，例如高甘油三酯血症、肥胖、高脂血症、异常脂质和/或胆固醇代谢、动脉粥样硬化、ii型糖尿病、心血管疾病、冠状动脉疾病、非酒精性脂肪性肝炎、非酒精性脂肪肝病、纯合和杂合家族性高胆固醇血症、他汀类药物抗性高胆固醇血症和其它代谢相关病症和疾病方面提供有益影响。尽管某些基于双链rna的化合物已被鉴定为能够抑制angptl3基因的表达(参见例如，国际专
3、简述
4、对能够选择性和有效地抑制angptl3基因的表达的新型angptl3-特异性rna干扰(rnai)剂(本文亦称为rnai剂、rnai触发剂或触发剂)，例如双链rnai剂，存在需要。此外，对包括新型angptl3-特异性rnai剂用于治疗尤其与升高的甘油三酯(tg)水平有关的疾病的组合物，存在需要。
5、一般而言，本公开内容的特征为angptl3基因-特异性rnai剂、包括angptl3rnai剂的组合物、和使用本文所述的angptl3 rnai剂和包括angptl3 rnai剂的组合物来体外和/或体内抑制angptl3基因的表达的方法。本文所述的angptl3 rnai剂可选择性和有效地降低或抑制angptl3基因的表达，从而降低受试者、例如人类或动物受试者的tg水平和/或胆固醇水平。
6、所述的angptl3 rnai剂可用于治疗性治疗(包括预防性和阻止性治疗)与升高的tg水平和/或升高的胆固醇水平有关的症状和疾病的方法，所述症状和疾病包括但不限于，高甘油三酯血症、肥胖、高脂血症、异常脂质和/或胆固醇代谢、动脉粥样硬化、ii型糖尿病、心血管疾病、冠状动脉疾病、非酒精性脂肪性肝炎、非酒精性脂肪肝病、纯合和杂合家族性高胆固醇血症、他汀类药物抗性高胆固醇血症和其它代谢相关的病症和疾病。本文公开的angptl3 rnai剂可选择性降低angptl3基因表达，这可导致尤其降低受试者的tg水平和/或胆固醇水平。本文公开的方法包括使用本领域已知的任何合适的方法，例如皮下注射或静脉内给予，给予受试者、例如人类或动物受试者一种或多种angptl3 rnai剂。
7、一方面，本公开的特征在于用于抑制人类angptl3基因表达的rnai剂，其中rnai剂包含有义链和反义链。本文还描述了包含能够抑制angptl3基因表达的rnai剂或由其组成的组合物，其中rnai剂包含有义链和反义链或由其组成，并且组合物进一步包含至少一种药学上可接受的赋形剂。本文所述的包含一种或多种所公开的angptl3 rnai剂的组合物能够选择性和有效地降低angptl3基因的表达。可将包含一种或多种angptl3 rnai剂的组合物给予受试者(比如人类或动物受试者)，以治疗(包括预防性治疗或抑制)与升高的tc、升高的胆固醇和/或提高的angptl3表达相关的症状和疾病。
8、本文所述的angptl3 rnai剂包含有义链(亦称为信使链)和反义链(亦称为指导链)。有义链和反义链可以彼此部分、基本上或完全互补。本文所述的rnai剂有义和反义链的长度各自可为16-30个核苷酸长。在一些实施方案中，有义和反义链的长度独立地为17-26个核苷酸。有义和反义链可为相同长度或不同长度。在一些实施方案中，有义和反义链的长度独立地为21-26个核苷酸。在一些实施方案中，有义和反义链的长度独立地为21-24个核苷酸。在一些实施方案中，有义链和反义链两者的长度均为21个核苷酸。在一些实施方案中，有义和/或反义链的长度独立地为16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个核苷酸。当递送至表达angptl3的细胞时，本文所述的rnai剂在体内或体外抑制一种或多种angptl3基因的表达。
9、本文所述的angptl3 rnai剂的有义链包含至少16个连续核苷酸，其与angptl3mrna中相同数目核苷酸的核心区段序列(本文也称为“核心区段”或“核心序列”)具有至少85％的同一性。在一些实施方案中，该有义链核心区段的长度为16、17、18、19、20、21、22或23个核苷酸。在一些实施方案中，该有义链核心区段的长度为17个核苷酸。在一些实施方案中，该有义链核心区段的长度为19个核苷酸。
10、本文所述的angptl3 rnai剂的反义链包含至少16个连续核苷酸，其与angptl3mrna中相同数目核苷酸的核心区段和与相应的有义链中相同数目核苷酸的核心区段具有至少85％的互补性。在一些实施方案中，该反义链核心区段的长度为16、17、18、19、20、21、22或23个核苷酸。在一些实施方案中，该反义链核心区段的长度为19个核苷酸。在一些实施方案中，该反义链核心区段的长度为17个核苷酸。
11、在一些实施方案中，本文公开的angptl3 rnai剂靶向具有表1中公开的任何序列的序列的angptl3基因的一部分。
12、在本文公开的angptl3 rnai剂中可包括的angptl3 rnai剂有义链和反义链的实例提供于表3和表4。angptl3 rnai剂双链体的实例提供于表5。组成本文公开的angptl3rnai剂的有义链和反义链或包括在其中的19个核苷酸的核心区段序列的实例提供于表2。
13、在另一方面，本公开的特征在于用于在体内将angptl3 rnai剂递送至受试者(比如哺乳动物)的肝细胞的方法。本文还描述了用于这种方法的组合物。可使用本领域已知的任何寡核苷酸递送技术将一种或多种angptl3 rnai剂递送至靶细胞或组织。核酸递送方法包括(但不限于)通过封装在脂质体中、通过离本文档来自技高网...
【技术保护点】
1. 一种用于抑制ANGPTL3基因表达的RNAi剂，其包含：
2.权利要求1的RNAi剂，其中所述反义链包含表2或表3中提供的任何一个序列的核苷酸2-18。
3.权利要求1或权利要求2的RNAi剂，其中所述有义链包含与表2或表4中提供的任何一个有义链序列相差0或1个核苷酸的至少17个连续核苷酸的核苷酸序列，和其中所述有义链在17个连续核苷酸上具有与所述反义链至少85%互补性的区域。
4.权利要求1-3中任何一项的RNAi剂，其中所述RNAi剂的至少一个核苷酸为修饰核苷酸或包含修饰的核苷间连键。
5.权利要求1-3中任何一项的RNAi剂，其中所述RNAi剂的有义和/或反义链的所有或基本上所有核苷酸为修饰核苷酸。
6.权利要求4-5中任何一项的RNAi剂，其中所述修饰核苷酸选自：2’-O-甲基核苷酸、2’-氟核苷酸、2’-脱氧核苷酸、2’,3’-裂环核苷酸模拟物、锁定核苷酸、2’-F-阿糖核苷酸、2’-甲氧基乙基核苷酸、脱碱基核苷酸、核糖醇、倒置的核苷酸、倒置的2’-O-甲基核苷酸、倒置的2’-脱氧核苷酸、2’-氨基修饰核
7.权利要求5的RNAi剂，其中所有或基本上所有修饰核苷酸是2’-O-甲基核苷酸和2’-氟核苷酸。
8.权利要求1-7中任何一项的RNAi剂，其中所述反义链包含表3中提供的任何一个修饰反义链序列的核苷酸序列。
9.权利要求1-8中任何一项的RNAi剂，其中所述有义链包含表4中提供的任何一个修饰有义链序列的核苷酸序列。
10.权利要求1的RNAi剂，其中所述反义链包含表3中提供的任何一个修饰序列的核苷酸序列，和所述有义链包含表4中提供的任何一个修饰序列的核苷酸序列。
11.权利要求1-10中任何一项的RNAi剂，其中所述RNAi剂连接于靶向配体。
12.权利要求11的RNAi剂，其中所述靶向配体包含n-乙酰基-半乳糖胺。
13.权利要求11或权利要求12的RNAi剂，其中所述靶向配体包含选自以下的结构：(NAG13)、(NAG13)s、(NAG18)、(NAG18)s、(NAG24)、(NAG24)s、(NAG25)、(NAG25)s、(NAG26)、(NAG26)s、(NAG27)、(NAG27)s、(NAG28)、(NAG28)s、(NAG29)、(NAG29)s、(NAG30)、(NAG30)s、(NAG31)、(NAG31)s、(NAG32)、(NAG32)s、(NAG33)、(NAG33)s、(NAG34)、(NAG34)s、(NAG35)、(NAG35)s、(NAG36)、(NAG36)s、(NAG37)、(NAG37)s、(NAG38)、(NAG38)s、(NAG39)、(NAG39)s。
14.权利要求13的RNAi剂，其中所述靶向配体包含(NAG37)或(NAG37)s的结构。
15.权利要求11-14中任何一项的RNAi剂，其中所述靶向配体连接于有义链。
16.权利要求15的RNAi剂，其中所述靶向配体连接于所述有义链的5’末端。
17.权利要求1-16中任何一项的RNAi剂，其中所述有义链的长度在18-30个核苷酸之间，和所述反义链的长度在18-30个核苷酸之间。
18.权利要求17的RNAi剂，其中所述有义链和所述反义链的长度各自在18-27个核苷酸之间。
19.权利要求18的RNAi剂，其中所述有义链和所述反义链的长度各自在18-24个核苷酸之间。
20.权利要求19的RNAi剂，其中所述有义链和所述反义链的长度各自为21个核苷酸。
21.权利要求17-20中任何一项的RNAi剂，其中所述RNAi剂具有两个平末端。
22.权利要求1-21中任何一项的RNAi剂，其中所述有义链包含一个或两个末端帽。
23.权利要求1-22中任何一项的RNAi剂，其中所述有义链包含一个或两个倒置的脱碱基残基。
24.权利要求1的RNAi剂，其中所述RNAi剂由有义链和反义链组成，所述有义链和反义链形成具有表5中任何一个双链体结构的双链体。
25. 权利要求1的RNAi剂，其包含反义链，所述反义链由与以下核苷酸序列(5′ → 3′)之一相差0或1个核苷酸的核苷酸序列组成、基本上由其组成或包含与以下核苷酸序列(5′→ 3′)之一相差0或1个核苷酸的核苷酸序列：
26. 权利要求25的RNAi剂，其中所述有义链由与以下核...
【技术特征摘要】
1. 一种用于抑制angptl3基因表达的rnai剂，其包含：
2.权利要求1的rnai剂，其中所述反义链包含表2或表3中提供的任何一个序列的核苷酸2-18。
3.权利要求1或权利要求2的rnai剂，其中所述有义链包含与表2或表4中提供的任何一个有义链序列相差0或1个核苷酸的至少17个连续核苷酸的核苷酸序列，和其中所述有义链在17个连续核苷酸上具有与所述反义链至少85%互补性的区域。
4.权利要求1-3中任何一项的rnai剂，其中所述rnai剂的至少一个核苷酸为修饰核苷酸或包含修饰的核苷间连键。
5.权利要求1-3中任何一项的rnai剂，其中所述rnai剂的有义和/或反义链的所有或基本上所有核苷酸为修饰核苷酸。
6.权利要求4-5中任何一项的rnai剂，其中所述修饰核苷酸选自：2’-o-甲基核苷酸、2’-氟核苷酸、2’-脱氧核苷酸、2’,3’-裂环核苷酸模拟物、锁定核苷酸、2’-f-阿糖核苷酸、2’-甲氧基乙基核苷酸、脱碱基核苷酸、核糖醇、倒置的核苷酸、倒置的2’-o-甲基核苷酸、倒置的2’-脱氧核苷酸、2’-氨基修饰核苷酸、2’-烷基修饰核苷酸、吗啉代核苷酸、乙烯基膦酸酯脱氧核糖核苷酸和3’-o-甲基核苷酸。
7.权利要求5的rnai剂，其中所有或基本上所有修饰核苷酸是2’-o-甲基核苷酸和2’-氟核苷酸。
8.权利要求1-7中任何一项的rnai剂，其中所述反义链包含表3中提供的任何一个修饰反义链序列的核苷酸序列。
9.权利要求1-8中任何一项的rnai剂，其中所述有义链包含表4中提供的任何一个修饰有义链序列的核苷酸序列。
10.权利要求1的rnai剂，其中所述反义链包含表3中提供的任何一个修饰序列的核苷酸序列，和所述有义链包含表4中提供的任何一个修饰序列的核苷酸序列。
11.权利要求1-10中任何一项的rnai剂，其中所述rnai剂连接于靶向配体。
12.权利要求11的rnai剂，其中所述靶向配体包含n-乙酰基-半乳糖胺。
13.权利要求11或权利要求12的rnai剂，其中所述靶向配体包含选自以下的结构：(nag13)、(nag13)s、(nag18)、(nag18)s、(nag24)、(nag24)s、(nag25)、(nag25)s、(nag26)、(nag26)s、(nag27)、(nag27)s、(nag28)、(nag28)s、(nag29)、(nag29)s、(nag30)、(nag30)s、(nag31)、(nag31)s、(nag32)、(nag32)s、(nag33)、(nag33)s、(nag34)、(nag34)s、(nag35)、(nag35)s、(nag36)、(nag36)s、(nag37)、(nag37)s、(nag38)、(nag38)s、(nag39)、(nag39)s。
14.权利要求13的rnai剂，其中所述靶向配体包含(nag37)或(nag37)s的结构。
15.权利要求11-14中任何一项的rnai剂，其中所述靶向配体连接于有义链。
16.权利要求15的rnai剂，其中所述靶向配体连接于所述有义链的5’末端。
17.权利要求1-16中任何一项的rnai剂，其中所述有义链的长度在18-30个核苷酸之间，和所述反义链的长度在18-30个核苷酸之间。
18.权利要求17的rnai剂，其中所述有义链和所述反义链的长度各自在18-27个核苷酸之间。
19.权利要求18的rnai剂，其中所述有义链和所述反义链的长度各自在18-24个核苷酸之间。
20.权利要求19的rnai剂，其中所述有义链和所述反义链的长度各自为21个核苷酸。
21.权利要求17-20中任何一项的rnai剂，其中所述rnai剂具有两个平末端。
22.权利要求1-21中任何一项的rnai剂，其中所述有义链包含一个或两个末端帽。
23.权利要求1-22中任何一项的rnai剂，其中所述有义链包含一个或两个倒置的脱碱基残基。
24.权利要求1的rnai剂，其中所述rnai剂由有义链和反义链组成，所述有义链和反义链形成具有表5中任何一个双链体结构的双链体。
25. 权利要求1的rnai剂，其包含反义链，所述反义链由与以下核苷酸序列(5′ → 3′)之一相差0或1个核苷酸的核苷酸序列组成、基本上由其组成或包含与以下核苷酸序列(5′→ 3′)之一相差0或1个核苷酸的核苷酸序列：
26. 权利要求25的rnai剂，其中所述有义链由与以下核苷酸序列(5′ → 3′)之一相差0或1个核苷酸的核苷酸序列组成、基本上由其组成或包含与以下核苷酸序列(5′ → 3′)之一相差0或1个核苷酸的核苷酸序列：
27.权利要求25或26的rnai剂，其中所有或基本上所有核苷酸是修饰核苷酸。
28.权利要求25或26的rnai剂，其中所述有义链进一步包括在核苷酸序列的3’末端、在核苷酸序列的5’末端或在二者处的倒置的脱碱基残基。
29. 权利要求1的rnai剂，其包含反义链，所述反义链包含与以下核苷酸序列(5′ →3′)之一相差0或1个核苷酸的修饰核苷酸序列、由其组成或基本上由其组成：
30. 权利要求32...
【专利技术属性】
技术研发人员：李珍，朱锐，S黄，
申请(专利权)人：箭头药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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