一种KK-LC-1靶向结合蛋白及其衍生物、试剂盒和应用制造技术

技术编号：40677307 阅读：3 留言：0更新日期：2024-03-18 19:15

本发明专利技术公开了一种KK‑LC‑1靶向结合蛋白及其衍生物、试剂盒和应用，其中：KK‑LC‑1靶向结合蛋白的蛋白序列如SEQ ID No.2、SEQ ID No.3、SEQ ID No.4、SEQ ID No.5之一所示；本发明专利技术中KK‑LC‑1靶向结合蛋白的分子量仅有17Kd左右，约为抗体的十分之一，具有良好的组织穿透性，并且生产工艺简单，产量高。本发明专利技术的靶向结合蛋白对KK‑LC‑1表达阳性的肿瘤体内外均具有良好的靶向性，可以用于肿瘤靶向给药，是肿瘤免疫治疗的潜在药物。同时利用靶向结合蛋白研发了KK‑LC‑1血清检测试剂盒，可定量检测出人体内KK‑LC‑1含量。

全部详细技术资料下载

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物医药，特别涉及一种kk-lc-1靶向结合蛋白、衍生物和试剂盒及其应用。

技术介绍

1、kk-lc-1（kita-kyushu lung cancer antigen-1，也称ct83或cxorf61），位于xq22染色体上，由556bp组成，为癌睾抗原家族成员，蛋白质分子量为12.784kd,细胞亚定位于细胞膜和细胞质。据报道，kk-lc-1可以调节aldh1的表达从而间接介导三阴乳腺癌的进展，而靶向kk-lc-1的小分子化合物可以下调aldh1的表达从而实现肿瘤消退，这表明，kk-lc-1或在肿瘤的发生发展中起着重要调控作用。

2、生理情况下，kk-lc-1表达谱极窄，仅在睾丸组织中表达，在其它健康组织中不表达，而在肿瘤组织中，其在肺癌、胃癌、乳腺癌、肝癌等多种癌种中均被检测出高表达率，这使其成为靶向治疗的潜力靶点。以胃癌为例，kk-lc-1在近80%的胃癌组织中表达，在正常胃组织中不表达，且高表达kk-lc-1的胃癌患者预后较差，提示kk-lc-1是治疗胃癌的一个潜在靶标。现已有研究证明，以kk-lc-1为靶点的多肽偶联药物经尾静脉回输荷瘤小鼠后，皮下接种高表达kk-lc-1的胃癌细胞的荷瘤鼠的瘤体积增长明显被抑制，生存期明显延长。

3、鉴于以kk-lc-1为靶点的靶向治疗效果明显，毒副作用低，以kk-lc-1为靶点的治疗方案可向多个方向展开发展，包括光敏疗法、抗体偶联药物、疫苗、car-t、tcr-t、单克隆抗体药等，其中由美国国家癌症研究所研发的tcr-t正在进行i期临床试验。</p>

4、总之，kk-lc-1是抗肿瘤药物研发中的潜力靶点，但是目前针对kk-lc-1的抗体多存在分子量大、实体瘤渗透性差、免疫原性强需人源化改造、生产工艺复杂、稳定性差运输和保存要求高，研发和使用费用高的问题，因此研发具备高亲和力、高渗透性的低分子量靶向结合蛋白尤为关键。

5、同时，现已有文献证实，肺腺癌患者血清kk-lc-1表达水平与肿瘤负荷成正相关，这提示其或可成为良好的肿瘤血清标志物，但目前临床上尚无kk-lc-1体外诊断检测试剂。因此开发一种能够快速、准确、高灵敏的检测人体内kk-lc-1含量的检测试剂盒，以用于对kk-lc-1阳性肿瘤的预测、诊断与预后监测具有重要的临床应用价值。

技术实现思路

1、为了解决现有技术中的问题，本专利技术提供一种kk-lc-1靶向结合蛋白，该蛋白可与kk-lc-1蛋白特异性结合，体内外实验均可高效靶向kk-lc-1阳性肿瘤，在此基础上，本专利技术提供了一种kk-lc-1靶向结合蛋白的衍生物、一种用于定量检测kk-lc-1的cba试剂盒以及kk-lc-1靶向结合蛋白的应用。

2、为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案为：

3、一种kk-lc-1靶向结合蛋白， kk-lc-1靶向结合蛋白是对kk-lc-1蛋白能特异性结合的蛋白，kk-lc-1靶向结合蛋白的蛋白序列如seq id no.2、seq id no.3、seq id no.4、seq id no.5之一所示。

4、优选地，kk-lc-1靶向结合蛋白的氨基酸序列如seq id no.2所示：其中，第30位、第32位、第33位、第35位、第41位、第42位、第63位、第65位、第66位、第68位、第74位、第75位、第96位、第98位、第99位、第101位、第107位和第108位的x为任意氨基酸。

5、一种kk-lc-1靶向结合蛋白的衍生物，包括噬菌体、荧光染料偶联产物、螯合物、放射性核素络合物偶联产物。

6、一种kk-lc-1靶向结合蛋白的试剂盒，kk-lc-1靶向结合蛋白的试剂盒为cba试剂盒。

7、进一步的，所述cba试剂盒包括荧光磁珠标记的靶向kk-lc-1靶向结合蛋白和生物素标记的kk-lc-1靶向结合蛋白。

8、进一步的，所述荧光磁珠标记的靶向kk-lc-1靶向结合蛋白的制备方法为：将edc、nhs加入化学发光磁珠终，混匀，活化结束后用磁力架分离磁珠，向磁珠中加入kk-lc-1靶向结合蛋白，混匀,标记反应结束后，磁力架分离磁珠，加入封闭剂，封闭后磁力架分离，得终产物；

9、进一步的，所述生物素标记的kk-lc-1靶向结合蛋白的制备方法为：将kk-lc-1靶向结合蛋白加入到生物素溶液中，混匀，标记反应结束后，利用pd-10柱纯化分离，得终产物。

10、一种kk-lc-1靶向结合蛋白的应用， kk-lc-1靶向结合蛋白用于制备kk-lc-1靶向结合蛋白试剂盒，所述kk-lc-1靶向结合蛋白试剂盒用于定量检测kk-lc-1。

11、进一步的，所述cba试剂盒定量检测检测kk-lc-1的方法包括以下步骤：将待检测的血清或血浆样本，以及生物素标记的kk-lc-1靶向结合蛋白加入荧光磁珠标记的kk-lc-1靶向结合蛋白中，震荡混匀；反应结束后磁分离；加入sa-pe抗体，震荡混匀，反应结束后磁分离，检测荧光强度，绘制标准曲线，计算得出待测血清或血浆样本中kk-lc-1的浓度。

12、一种kk-lc-1靶向结合蛋白的应用，所述kk-lc-1靶向结合蛋白用于制备kk-lc-1阳性肿瘤靶向药物。

13、进一步的，所述kk-lc-1阳性肿瘤靶向药物包括：

14、蛋白偶联细胞毒性药物，如mmae、pe、美登素、喜树碱类化合物、卡奇霉素类化合物等；

15、融合免疫细胞因子如il-2、il-7、il-15、il-21、tnf-α等；

16、免疫细胞结合蛋白如融合cd3结合肽、蛋白或抗体，cd28结合肽、蛋白或抗体，cd16a结合肽、蛋白或抗体，nkp46结合肽、蛋白或抗体；

17、以及含kk-lc-1靶向结合蛋白基因及kk-lc-1靶向结合蛋白序列的转基因修饰的免疫细胞如car-t、car-nk等。

18、进一步的，所述kk-lc-1靶向结合蛋白的衍生物及含kk-lc-1靶向结合序列的各种衍生产物在制备kk-lc-1阳性肿瘤靶向药物中的应用。

19、与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：

20、本专利技术提供了一种新型、高亲和力的kk-lc-1特异性靶向结合蛋白，其分子量仅有17kd左右，约为抗体的十分之一，具有良好的组织穿透性，并且生产工艺简单，产量高。本专利技术的靶向结合蛋白对kk-lc-1表达阳性的肿瘤体内外均具有良好的靶向性，可以用于肿瘤靶向给药，是肿瘤免疫治疗的潜在药物。同时利用靶向结合蛋白研发了kk-lc-1血清检测试剂盒，可定量检测出人体内kk-lc-1含量。

本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种KK-LC-1靶向结合蛋白，其特征在于，KK-LC-1靶向结合蛋白是对KK-LC-1蛋白能特异性结合的蛋白，KK-LC-1靶向结合蛋白的蛋白序列如SEQ ID No.2、SEQ ID No.3、SEQID No.4、SEQ ID No.5之一所示。

2.根据权利要求1所述的KK-LC-1靶向结合蛋白的衍生物，其特征在于，包括噬菌体、荧光染料偶联产物、螯合物、放射性核素络合物偶联产物。

3.根据权利要求1所述的KK-LC-1靶向结合蛋白的试剂盒，其特征在于，所述KK-LC-1靶向结合蛋白的试剂盒为CBA试剂盒。

4.根据权利要求3所述的KK-LC-1靶向结合蛋白的试剂盒，其特征在于，所述CBA试剂盒包括荧光磁珠标记的靶向KK-LC-1靶向结合蛋白和生物素标记的KK-LC-1靶向结合蛋白。

5.根据权利要求4所述的KK-LC-1靶向结合蛋白的试剂盒，其特征在于，所述荧光磁珠标记的靶向KK-LC-1靶向结合蛋白的制备方法为：将EDC、NHS加入化学发光磁珠终，混匀，活化结束后用磁力架分离磁珠，向磁珠中加入KK-LC-1靶向结合蛋白

6.根据权利要求4所述的KK-LC-1靶向结合蛋白的应用，其特征在于，KK-LC-1靶向结合蛋白用于制备KK-LC-1靶向结合蛋白试剂盒，所述KK-LC-1靶向结合蛋白试剂盒用于定量检测KK-LC-1。

7.根据权利要求3所述的KK-LC-1靶向结合蛋白的应用，其特征在于，CBA试剂盒定量检测检测KK-LC-1的方法包括以下步骤：将待检测的血清或血浆样本，以及生物素标记的KK-LC-1靶向结合蛋白加入荧光磁珠标记的KK-LC-1靶向结合蛋白中，震荡混匀；反应结束后磁分离；加入SA-PE抗体，震荡混匀，反应结束后磁分离，检测荧光强度，绘制标准曲线，计算得出待测血清或血浆样本中KK-LC-1的浓度。

8.根据权利要求2所述的KK-LC-1靶向结合蛋白的应用，其特征在于，所述KK-LC-1靶向结合蛋白用于制备KK-LC-1阳性肿瘤靶向药物。

9.根据权利要求8所述的KK-LC-1靶向结合蛋白的应用，其特征在于，所述KK-LC-1阳性肿瘤靶向药物包括：蛋白偶联细胞毒性药物、融合免疫细胞因子、免疫细胞结合蛋白以及含KK-LC-1靶向结合蛋白基因及KK-LC-1靶向结合蛋白序列的转基因修饰的免疫细胞。

10.根据权利要求2所述的KK-LC-1靶向结合蛋白的应用，其特征在于，所述KK-LC-1靶向结合蛋白的衍生物及含KK-LC-1靶向结合序列的各种衍生产物在制备KK-LC-1阳性肿瘤靶向药物中的应用。

...

【技术特征摘要】

1.一种kk-lc-1靶向结合蛋白，其特征在于，kk-lc-1靶向结合蛋白是对kk-lc-1蛋白能特异性结合的蛋白，kk-lc-1靶向结合蛋白的蛋白序列如seq id no.2、seq id no.3、seqid no.4、seq id no.5之一所示。

2.根据权利要求1所述的kk-lc-1靶向结合蛋白的衍生物，其特征在于，包括噬菌体、荧光染料偶联产物、螯合物、放射性核素络合物偶联产物。

3.根据权利要求1所述的kk-lc-1靶向结合蛋白的试剂盒，其特征在于，所述kk-lc-1靶向结合蛋白的试剂盒为cba试剂盒。

4.根据权利要求3所述的kk-lc-1靶向结合蛋白的试剂盒，其特征在于，所述cba试剂盒包括荧光磁珠标记的靶向kk-lc-1靶向结合蛋白和生物素标记的kk-lc-1靶向结合蛋白。

5.根据权利要求4所述的kk-lc-1靶向结合蛋白的试剂盒，其特征在于，所述荧光磁珠标记的靶向kk-lc-1靶向结合蛋白的制备方法为：将edc、nhs加入化学发光磁珠终，混匀，活化结束后用磁力架分离磁珠，向磁珠中加入kk-lc-1靶向结合蛋白，混匀,标记反应结束后，磁力架分离磁珠，加入封闭剂，封闭后磁力架分离，得终产物；

6.根据权利要求4所述的kk-lc-1靶向结合蛋白的应用，其特征在于，kk-lc-1...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘宝瑞，陈天然，
申请(专利权)人：南京鼓楼医院，
类型：发明
国别省市：

全部详细技术资料下载我是这个专利的主人