【技术实现步骤摘要】
：本专利技术属于生物医药，具体涉及一种靶向抑制软骨细胞铁死亡的cit-aunrs@anti-trpv1复合物、制备方法及应用。
技术介绍
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技术介绍
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1、骨关节炎(osteoarthritis，oa)是世界范围内导致运动系统残疾的首要原因，影响着全球约7％的人口，严重影响患者正常工作和生活，给家庭及社会带来了沉重的经济负担。oa为一种全关节疾病，病理过程涵盖关节软骨、滑膜、软骨下骨、韧带、半月板等多种组织，其中关节软骨退变和滑膜炎是oa最主要的病理表现。目前，国际诊疗指南推荐的oa治疗方案仍以缓解症状为主，对于保守治疗无效的终末期oa患者，只能采用人工关节置换手术来缓解疼痛和改善功能。因此，针对oa发病机制开发新型治疗方法对于改善oa治疗现状具有重要意义。
2、2012年，铁死亡这一新型的程序性细胞死亡模式被提出，其本质为脂质过氧化物水平升高和铁过载导致的细胞死亡，是氧化应激的一种表现。最新研究证实oa中存在铁死亡，这种铁依赖性的细胞死亡，是氧化剂和抗氧化剂之间产生的失衡关系引起ros水平变化引起的，铁离子的过度蓄积会诱导脂质ros积累，促进疾病进展。
3、本团队前期研究发现，人oa软骨损伤部位脂质过氧化水平及铁死亡标志物表达显著高于正常软骨。通过单细胞转录组学测序分析发现了一个以优先表达铁死亡特征和基因的软骨细胞亚群，富集分析显示，瞬时受体电位香草醛1(transient receptor potentialvanilloid 1，trpv1)是人oa软骨中的抵抗铁死亡的潜在靶标。因此，
4、trpv1是一种细胞膜蛋白，温敏型离子通道，43℃为其激活阈值，该温度下能有效激活trpv1，同时又不会对细胞、组织产生明显损伤。金纳米棒(gold nanorods，aunrs)在干细胞治疗和骨组织工程等多种生物医学应用中具有巨大的潜力，并能够在近红外光(near-infrared，nir)的照射下迅速升温，aunrs的制备过程需要形状导向剂的参与，十六烷基三甲基溴化铵(ctab)作为传统的形状导向剂，具有细胞毒性，而采用柠檬酸盐修饰的aunrs(cit-aunrs)具有优异的生物相容性。在可控的nir照射下，cit-aunrs能够随着其功率和时间的变化迅速升温。
5、基于以上内容，本专利技术利用trpv1表达于关节软骨的特点，提供一种靶向抑制软骨细胞铁死亡的cit-aunrs@anti-trpv1复合物、制备方法及应用，开发精准靶向输送的方式将cit-aunrs传递到trpv1周围，在体外通过调整nir的功率和作用时间可控式激活trpv1，抑制软骨细胞铁死亡，从而达到延缓oa进展的治疗效果。
技术实现思路
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技术实现思路
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1、本专利技术的目的是针对现有技术的不足，提供一种靶向抑制软骨细胞铁死亡的cit-aunrs@anti-trpv1复合物、制备方法及应用，首次提出通过靶向输送光热材料，产生热效应激活trpv1，以精准可控地抑制软骨细胞铁死亡，实现对oa的靶向治疗。
2、为了实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：
3、(一)本专利技术提供一种靶向抑制软骨细胞铁死亡的cit-aunrs@anti-trpv1复合物的制备方法，包括以下步骤：
4、(1)cit-aunrs的制备：将aunrs与柠檬酸钠溶液混合孵育，随后将溶液离心并得到沉淀，将沉淀再次与柠檬酸钠溶液混合，得到cit-aunrs溶液；
5、(2)cit-aunrs@anti-trpv1复合物的制备：在cit-aunrs溶液中加入edc和nhs并进行反应，随后加入trpv1抗体继续反应，将所得产物用去离子水多次洗涤以去除残留反应物，得到cit-aunrs@anti-trpv1复合物。
6、进一步的，所述步骤(1)中，aunrs与柠檬酸钠溶液的质量体积比为0.01％w/v，柠檬酸钠溶液浓度为0.1wt％，再混合后所得到的cit-aunrs溶液的浓度为0.05mg/ml。
7、进一步的，所述步骤(1)中，混合孵育时间为12小时，离心转速为5500g，离心时间为15分钟。
8、进一步的，所述步骤(1)中，aunrs的制备方法为：在nacl溶液中加入聚苯乙烯磺酸钠溶液，随后与ctab-aunrs溶液混合，将混合物室温下共同孵育，离心并分离沉淀，得到aunrs。
9、进一步的，nacl、聚苯乙烯磺酸钠、和ctab-aunrs的质量比为30:0.875:3；所述nacl溶液的浓度为5mm，聚苯乙烯磺酸钠溶液的浓度为10g/l，ctab-aunrs溶液的浓度为0.1mg/ml。
10、进一步的，所述共同孵育时间为1小时；所述离心转速为6000g，离心时间为15分钟。
11、进一步的，所述步骤(2)中，cit-aunrs、edc、nhs和trpv1抗体的质量比为50:191:115:10。
12、进一步的，所述步骤(2)中，在cit-aunrs溶液中加入edc和nhs后，反应温度为室温，反应时间为2小时；加入trpv1抗体后反应温度为4℃，反应时间为12小时。
13、(二)本专利技术还提供一种靶向抑制软骨细胞铁死亡的cit-aunrs@anti-trpv1复合物，由以上制备方法获得。
14、进一步的，所制备的cit-aunrs@anti-trpv1复合物能够可控、有效、靶向激活软骨细胞上的trpv1，以抑制软骨细胞铁死亡，实现oa治疗。所述可控是指，基于金纳米棒的光热响应性，通过改变nir的功率与作用时间而使材料升温，达到激活trpv1的温度阈值。所述有效、靶向软骨细胞的方式是利用单抗与软骨细胞表面的trpv1精准结合，将光热材料靶向精准传递到trpv1周围。所述抑制软骨细胞铁死亡指激活trpv1可以抑制软骨细胞铁死亡，降低氧化应激水平，保护关节软骨，从而发挥对oa的治疗效果。
15、进一步的，本专利技术所制备的光热材料是cit-aunrs，具有良好的生物相容性和较高的温度转化性能，比普通光热材料更加安全、稳定。其中，所述复合物即cit-aunrs@anti-trpv1复合物，通过抗原抗体反应起到精准靶向效果。
16、(三)本专利技术提供了由以上制备方法制备的cit-aunrs@anti-trpv1复合物在制备骨关节炎治疗药物中的应用。
17、本专利技术的有益效果：
18、本专利技术利用trpv1高度定位于关节软骨细胞的特点，开发了一种靶向抑制软骨细胞铁死亡的cit-aunrs@anti-trpv1复合物，将光热材料精准靶向输送到trpv1周围，可通过在体外调整nir强度和作用于cit-aunrs的时间来升高trpv1周围温度，以实现可控式激活trpv1，有效、靶向地抑制软骨细胞铁死亡，从而降低氧化应激水平，保护关节软骨，达到延缓oa进展的治疗效果。克服了本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种靶向抑制软骨细胞铁死亡的Cit-AuNRs@Anti-TRPV1复合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的靶向抑制软骨细胞铁死亡的Cit-AuNRs@Anti-TRPV1复合物的制备方法，其特征在于，
3.根据权利要求1所述的靶向抑制软骨细胞铁死亡的Cit-AuNRs@Anti-TRPV1复合物的制备方法，其特征在于，
4.根据权利要求1所述的靶向抑制软骨细胞铁死亡的Cit-AuNRs@Anti-TRPV1复合物的制备方法，其特征在于，
5.根据权利要求4所述的靶向抑制软骨细胞铁死亡的Cit-AuNRs@Anti-TRPV1复合物的制备方法，其特征在于，
6.根据权利要求4所述的靶向抑制软骨细胞铁死亡的Cit-AuNRs@Anti-TRPV1复合物的制备方法，其特征在于，
7.根据权利要求1所述的靶向抑制软骨细胞铁死亡的Cit-AuNRs@Anti-TRPV1复合物的制备方法，其特征在于，
8.根据权利要求1所述的靶向抑制软骨细胞铁死亡的Cit-AuNRs@An
9.权利要求1～8任意一项所述的制备方法制备的Cit-AuNRs@Anti-TRPV1复合物。
10.权利要求1～8任意一项所述的制备方法制备的Cit-AuNRs@Anti-TRPV1复合物在制备骨关节炎治疗药物中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种靶向抑制软骨细胞铁死亡的cit-aunrs@anti-trpv1复合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的靶向抑制软骨细胞铁死亡的cit-aunrs@anti-trpv1复合物的制备方法，其特征在于，
3.根据权利要求1所述的靶向抑制软骨细胞铁死亡的cit-aunrs@anti-trpv1复合物的制备方法，其特征在于，
4.根据权利要求1所述的靶向抑制软骨细胞铁死亡的cit-aunrs@anti-trpv1复合物的制备方法，其特征在于，
5.根据权利要求4所述的靶向抑制软骨细胞铁死亡的cit-aunrs@anti-trpv1复合物的制备方法，其特征在于，...
【专利技术属性】
技术研发人员：史冬泉，王鹏，李维彤，吕中阳，谢亚，孙伟，
申请(专利权)人：南京鼓楼医院，
类型：发明
国别省市：
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