【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及车纳米医学，具体说是一种“菌-药”纳米复合体系及其制备方法和应用。
技术介绍
1、三阴性乳腺癌(tnbc)作为预后最差的乳腺癌亚型，被称为“乳腺癌之王”，因其癌组织免疫组织化学检查结果显示雌性素受体、孕激素受体和人表皮生长因子受体均为阴性而得名，其具有侵袭性强、恶性程度高、易复发转移等特点。据国家癌症中心和中国疾病预防控制中心发布数据显示：tnbc在我国的发病率为23.8％，呈逐年上升趋势，已成为中国最严重的公共卫生问题之一。因此，开发有效的抗tnbc侵袭转移策略已成为临床治疗亟需解决的科学问题。最新研究表明，tnbc肿瘤组织呈现“核心-边缘”的三维结构，且两者具有高度异质性，其核心有大量高转移能力的肿瘤细胞而边缘为快速增殖的细胞。与快速增殖的边缘相比，核心的tnbc细胞保持高水平的活性缺氧诱导因子1α，进而调节环氧化酶-2、e-钙粘蛋白、n-钙粘蛋白和基质金属蛋白酶等蛋白的表达，促进上皮-间质转化和远端转移。目前常规的化疗、放疗和热疗等治疗方式由于肿瘤渗透能力的局限性主要杀伤快速增殖的边缘细胞，而对核心细胞的作用效率低，最终导致tnbc临床治疗失败。因此，研发具有能抑制深部肿瘤组织细胞侵袭转移的治疗药物，联合其他有效的治疗手段，开展精准的肿瘤组织“核心-边缘”双重治疗，最终抑制肿瘤的侵袭转移，有望为解决tnbc临床治疗问题提供新思路。
2、中药蟾酥(cs)为蟾蜍科动物中华大蟾蜍或黑眶蟾蜍的干燥分泌物，味辛、性温、有毒、归心经，最早记录于《名医别录》，具有解毒、止痛、开窍醒神的作用。cs主要成分日蟾毒它
3、纳米材料具有小尺寸效应、表界面效应等，展现出独特的声、光、热力学等特性，在药物载体、基因递送等方面显示出巨大的潜力和应用价值。但是，肿瘤具有特殊的结构和生理环境，紊乱的血管网络和淋巴管的缺少使其组织液静水压升高，阻碍药物递送。而纳米药物的运输主要依赖于体循环并且缺少深入肿瘤的驱动力，仅能有效杀伤边缘浅表的肿瘤细胞，无法渗透到缺氧的肿瘤核心以抑制细胞的远端转移。鼠伤寒沙门氏菌属作为一类革兰氏阴性的兼性厌氧菌具有厌氧趋化能力。s.lux菌是通过敲除rela和spot基因得到的减毒鼠伤寒沙门氏菌，其毒力仅为野生型的百万分之一，有效解决鼠伤寒沙门氏菌的安全性问题，为其临床应用提供了可能。已有研究表明，减毒鼠伤寒沙门氏菌在肿瘤组织中优先定植，其比例大于1000:1，并通过厌氧趋化能力有效扩散到缺氧核心部位。然而，单一的减毒鼠伤寒沙门氏菌在肿瘤治疗中的疗效不理想，无法达到临床治疗的需求。但高效的深入肿瘤趋化能力，为其作为靶向递送的生物载体提供了契机。
4、因此，纳米材料与生物载体相结合将是一种有前景的策略，通过克服生理障碍(肿瘤缺氧屏障、血脑屏障、组织穿透屏障等)实现药物高效递送，以提高抗tnbc效果并有效抑制侵袭转移。
技术实现思路
1、针对上述问题，本专利技术提供一种显著提高药物利用度，显著抑制三阴性乳腺癌的生长和远端转移的“菌-药”纳米复合体系。
2、本专利技术解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种“菌-药”纳米复合体系，包括光热纳米颗粒、日蟾毒它灵和细菌，所述日蟾毒它灵通过疏水间相互作用力负载到所述光热纳米颗粒中，所述细菌与所述光热纳米颗粒通过共价键连接。
3、作为优选，所述细菌选自沙门氏菌、乳酸杆菌、长双歧杆菌和李斯特菌中的至少一种，进一步优选为沙门氏菌。
4、作为优选，沙门氏菌为减毒沙门氏菌，进一步优选为s.t-δpgflab，简称为s.lux菌。
5、作为优选，所述光热纳米颗粒为羟基化修饰的普鲁士蓝纳米颗粒。
6、作为优选，所述光热纳米颗粒的粒径为70-150nm，进一步优选为80-120nm。
7、本专利技术还提供一种“菌-药”纳米复合体系的制备方法，包括如下步骤：
8、s1，将柠檬酸为溶解介质的fecl3溶液和k4[fe(cn)6]溶液混合，水浴搅拌得到羧基化修饰的普鲁士蓝纳米颗粒；
9、s2，将日蟾毒它灵和羧基化修饰的普鲁士蓝纳米颗粒溶液混合，所述日蟾毒它灵和羧基化修饰的普鲁士蓝纳米颗粒的质量比为(1-5):1，优选为1:1，得到负载日蟾毒它灵的光热纳米颗粒；
10、s3，将细菌溶液、负载日蟾毒它灵的光热纳米颗粒和偶联剂混合均匀，使得细菌和负载日蟾毒它灵的光热纳米颗粒通过共价键连接，得到“菌-药”纳米复合体系，即负载日蟾毒它灵的光热纳米颗粒-细菌复合体系。
11、作为优选，所述步骤s1中柠檬酸、fecl3和k4[fe(cn)6]的摩尔质量比为(20-30):(0.5-2):(0.5-2)，优选为25:1:1，水浴温度为50-70℃，优选为60℃，搅拌转速为600-1000rpm，优选为800rpm，水浴时间为20-50min，优选为30min。
12、作为优选，所述步骤s3中负载日蟾毒它灵的光热纳米颗粒质量和所述细菌溶液的菌落数的比为(25-200μg/ml):1×108cfu/ml，优选为200μg/ml:1×108cfu/ml。
13、作为优选，所述步骤s3中的偶联剂为edc和/或nhs。
14、本专利技术还提供了“菌-药”纳米复合体系或根据上述制备方法制备得到的“菌-药”纳米复合体系在抗三阴性乳腺癌侵袭转移中的应用。
15、与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
16、本专利技术中的负载日蟾毒它灵的光热纳米颗粒-细菌复合体系能主动靶向肿瘤乏氧区，减少纳米药物在体内运输中的损耗，显著提高药物的利用度，从而实现对tnbc核心区域细胞的特异性杀伤，并有效抑制侵袭转移，还能够实现光热治疗、化疗和细菌治疗的联合，这种主动靶向肿瘤乏氧核心区的细菌载药体系显著增强了肿瘤的治疗效果，可显著抑制三阴性乳腺癌的生长和远端转移，并降低了毒副作用。
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1.一种“菌-药”纳米复合体系，其特征在于：包括光热纳米颗粒、日蟾毒它灵和细菌，所述日蟾毒它灵通过疏水间相互作用力负载到所述光热纳米颗粒中，所述细菌与所述光热纳米颗粒通过共价键连接。
2.根据权利要求1所述“菌-药”纳米复合体系，其特征在于：所述细菌选自沙门氏菌、乳酸杆菌、长双歧杆菌和李斯特菌中的至少一种。
3.根据权利要求2所述“菌-药”纳米复合体系，其特征在于：所述沙门氏菌为减毒沙门氏菌。
4.根据权利要求1所述“菌-药”纳米复合体系，其特征在于：所述光热纳米颗粒为羟基化修饰的普鲁士蓝纳米颗粒。
5.根据权利要求1所述“菌-药”纳米复合体系，其特征在于：所述光热纳米颗粒的粒径为70-150nm。
6.根据权利要求1-5任意一项所述“菌-药”纳米复合体系的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
7.根据权利要求6所述“菌-药”纳米复合体系的制备方法，其特征在于：所述步骤S1中柠檬酸、FeCl3和K4[Fe(CN)6]的摩尔质量比为(20-30):(0.5-2):(0.5-2)，水浴温度为50-70℃，搅拌转速
8.根据权利要求6所述“菌-药”纳米复合体系的制备方法，其特征在于：所述步骤S3中负载日蟾毒它灵的光热纳米颗粒质量和所述细菌溶液的菌落数的比为(25-200μg/mL):1×108cfu/mL。
9.根据权利要求6所述“菌-药”纳米复合体系的制备方法，其特征在于：所述步骤S3中的偶联剂为EDC和/或NHS。
10.根据权利要求1-5任意一项所述的“菌-药”纳米复合体系或根据权利要求6-9任意一项所述的制备方法制备得到的“菌-药”纳米复合体系在抗三阴性乳腺癌侵袭转移中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种“菌-药”纳米复合体系，其特征在于：包括光热纳米颗粒、日蟾毒它灵和细菌，所述日蟾毒它灵通过疏水间相互作用力负载到所述光热纳米颗粒中，所述细菌与所述光热纳米颗粒通过共价键连接。
2.根据权利要求1所述“菌-药”纳米复合体系，其特征在于：所述细菌选自沙门氏菌、乳酸杆菌、长双歧杆菌和李斯特菌中的至少一种。
3.根据权利要求2所述“菌-药”纳米复合体系，其特征在于：所述沙门氏菌为减毒沙门氏菌。
4.根据权利要求1所述“菌-药”纳米复合体系，其特征在于：所述光热纳米颗粒为羟基化修饰的普鲁士蓝纳米颗粒。
5.根据权利要求1所述“菌-药”纳米复合体系，其特征在于：所述光热纳米颗粒的粒径为70-150nm。
6.根据权利要求1-5任意一项所述“菌-药”纳米复合体系的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
7.根...
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