【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
技术介绍
1、结节性硬化综合征(tuberous sclerosis complex；tsc)，也称为结节性硬化，是一种多系统、常染色体显性遗传疾病，其可导致在脑中和其他重要器官中(如肾、心脏、肝、眼睛、肺和皮肤)中生长的非癌性肿瘤。在脑中，这类肿瘤可引起发育迟缓、孤独症、癫痫和脑积水。与结节性硬化相关的危及生命的病症包括肾血管平滑肌脂肪瘤(其可引起内出血)和淋巴管平滑肌瘤病(lam)(其可损害呼吸)。
2、结节性硬化是由tsc1基因和/或tsc2基因中的一个或多个突变引起。由tsc2中的突变引起的结节性硬化更严重且更普遍。tsc1和tsc2是分别编码蛋白质错构瘤蛋白(hamartin)和马铃薯球蛋白(tuberin)的肿瘤生长抑制基因。马铃薯球蛋白和错构瘤蛋白形成整合多种信号以主要通过抑制mtorc1复合物来调节雷帕霉素(rapamycin)的哺乳动物靶蛋白(mtor)信号传导的蛋白质复合物。此外，马铃薯球蛋白还含有gtp酶活化结构域(gap)结构域，其下调mtorc1活化剂rheb。
3、目前对结节性硬化的治疗涉及施用雷帕霉素和其类似物。然而，这些药物必须连续施用并且具有显著的副作用，包括受损的脑发育和免疫抑制。由于mtorc1活性的过度抑制，雷帕霉素和其类似物的施用也可能会引起不良事件。此外，一些患者对雷帕霉素没有反应，或者最初起反应并且接着变得抗性。
4、因此，对可用于治疗结节性硬化的组合物和方法，特别是基于基因疗法的组合物和方法存在未满足的需求。
技术实
1、本公开提供了用于治疗结节性硬化综合征的组合物和方法。在一些实施方案中，本公开提供了凝聚的马铃薯球蛋白(ctuberin)，其包含(i)能够结合错构瘤蛋白的n端区域，和(ii)c端gtp酶活化蛋白(gap)区域，其中ctuberin缺乏人马铃薯球蛋白(seq id no:1)的某些氨基酸残基。在一些实施方案中，本公开的ctuberin缺乏人马铃薯球蛋白(seq idno:1)的氨基酸残基451至932。在一些实施方案中，本公开的ctuberin缺乏人马铃薯球蛋白(seq id no:1)的氨基酸残基419至932。在一些实施方案中，本公开的ctuberin包含(i)能够结合错构瘤蛋白的n端区域，和(ii)c端gtp酶活化蛋白(gap)区域，其中c端区域包含与seq id no:7具有至少90％同一性的氨基酸序列，并且缺乏seq id no:1的氨基酸残基451至932。在一些实施方案中，本公开的ctuberin包含(i)能够结合错构瘤蛋白的n端区域，和(ii)c端gtp酶活化蛋白(gap)区域，其中c端区域包含与seq id no:10-12中的一个具有至少90％同一性的氨基酸序列，并且其中ctuberin缺乏seq id no:1的氨基酸残基451至932。
2、除了ctuberin蛋白之外，本公开提供了编码本文公开的任一种ctuberin蛋白的核酸分子以及被配置为引起本文公开的任一种ctuberin蛋白在给定细胞中表达的组合物。例如，本公开提供了腺相关病毒(aav)表达盒，其从5′至3′包含：5’aav反向末端重复序列(itr)；本文公开的任一种核酸分子；和3’aav itr。本公开还提供了重组aav(raav)，其包含：aav衣壳蛋白以及本文公开的任一种核酸分子或aav表达盒。此外，本公开提供了包含药物组合物的组合物，该药物组合物包含本文公开的任一种ctuberin蛋白、任一种核酸分子、任一种质粒、任一种宿主细胞或任一种raav。
3、在另一方面，本公开提供了在靶细胞中表达本文公开的任一种ctuberin的方法，其包括：使本文公开的任一种核酸分子、本文公开的任一种质粒、本文公开的任一种raav、本文公开的任一种细胞外囊泡(ev)或本文公开的任一种组合物与靶细胞接触，从而在靶细胞中表达ctuberin。
4、在另一方面，本公开提供了治疗有需要的受试者的结节性硬化的方法，其包括：向受试者施用治疗有效量的本文公开的任一种核酸分子、本文公开的任一种质粒、本文公开的任一种raav、本文公开的任一种ev或本文公开的任一种组合物，从而治疗受试者的结节性硬化。
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1.一种凝聚的马铃薯球蛋白(cTuberin)，其包含(i)能够结合错构瘤蛋白的N端区域，和(ii)C端GTP酶活化蛋白(GAP)区域，其中所述cTuberin缺乏SEQ ID NO:1的氨基酸残基419至932。
2.如权利要求1所述的cTuberin，其中所述cTuberin还缺乏SEQ ID NO:1的氨基酸残基947-988。
3.如权利要求1或2所述的cTuberin，其中所述cTuberin还缺乏SEQ ID NO:1的氨基酸残基1205-1271。
4.如权利要求1至3中任一项所述的cTuberin，其中所述cTuberin还缺乏SEQ ID NO:1的氨基酸残基1336-1497。
5.如权利要求1所述的cTuberin，其中所述C端区域包含与SEQ ID NO:10-12中的一个具有至少90％同一性的氨基酸序列。
6.如权利要求1所述的cTuberin，其中所述cTuberin还缺乏SEQ ID NO:1的氨基酸残基933至1109。
7.如权利要求6所述的cTuberin，其中C端结构域包
8.如权利要求1至7中任一项所述的cTuberin，其中N端结构域包含与SEQ ID NO:5具有至少90％同一性的氨基酸序列。
9.一种凝聚的马铃薯球蛋白(cTuberin)，其包含(i)能够结合错构瘤蛋白的N端区域，和(ii)C端GTP酶活化蛋白(GAP)区域，其中所述C端区域包含与SEQ ID NO:7具有至少90％同一性的氨基酸序列，并且其中所述cTuberin缺乏SEQ ID NO:1的氨基酸残基451至932。
10.如权利要求9所述的cTuberin，其中所述cTuberin缺乏SEQ ID NO:1的氨基酸残基419至932。
11.如权利要求9或10所述的cTuberin，其中所述C端区域包含与SEQ ID NO:8具有至少90％同一性的氨基酸序列。
12.如权利要求9或10所述的cTuberin，其中所述C端区域包含与SEQ ID NO:9具有至少90％同一性的氨基酸序列。
13.如权利要求9所述的cTuberin，其中所述N端区域包含与SEQ ID NO:4具有至少90％同一性的氨基酸序列。
14.如权利要求9至12中任一项所述的cTuberin，其中所述N端区域包含与SEQ ID NO:5具有至少90％同一性的氨基酸序列。
15.如权利要求9所述的cTuberin，其中所述cTuberin包含与SEQ ID NO:14具有至少90％同一性的氨基酸序列。
16.如权利要求9所述的cTuberin，其中所述cTuberin包含与SEQ ID NO:15具有至少90％同一性的氨基酸序列。
17.如权利要求9所述的cTuberin，其中所述cTuberin包含与SEQ ID NO:16具有至少90％同一性的氨基酸序列。
18.一种凝聚的马铃薯球蛋白(cTuberin)，其包含(i)能够结合错构瘤蛋白的N端区域，和(ii)C端GTP酶活化蛋白(GAP)区域，其中所述C端区域包含与SEQ ID NO:10-12中的一个具有至少90％同一性的氨基酸序列，并且其中所述cTuberin缺乏SEQ ID NO:1的氨基酸残基451至932。
19.如权利要求18所述的cTuberin，其中所述cTuberin缺乏SEQ ID NO:1的氨基酸残基419-932。
20.如权利要求18或19所述的cTuberin，其中所述C端区域包含与SEQ ID NO:10具有至少90％同一性的氨基酸序列。
21.如权利要求18或19所述的cTuberin，其中所述C端区域包含与SEQ ID NO:11具有至少90％同一性的氨基酸序列。
22.如权利要求18或19所述的cTuberin，其中所述C端区域包含与SEQ ID NO:12具有至少90％同一性的氨基酸序列。
23.如权利要求18所述的cTuberin，其中所述cTuberin包含与SEQ ID NO:17具有至少90％同一性的氨基酸序列。
24.如权利要求18所述的cTuberin，其中所述cTuberin包含与SEQ ID NO:18具有至少90％同一性的氨基酸序列。
25.如权利要求18所述的cTuberin，其中所述cTuberin包含与SEQ ID NO:19具有至少90％同一性的氨基酸序列。
26.如权利...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种凝聚的马铃薯球蛋白(ctuberin)，其包含(i)能够结合错构瘤蛋白的n端区域，和(ii)c端gtp酶活化蛋白(gap)区域，其中所述ctuberin缺乏seq id no:1的氨基酸残基419至932。
2.如权利要求1所述的ctuberin，其中所述ctuberin还缺乏seq id no:1的氨基酸残基947-988。
3.如权利要求1或2所述的ctuberin，其中所述ctuberin还缺乏seq id no:1的氨基酸残基1205-1271。
4.如权利要求1至3中任一项所述的ctuberin，其中所述ctuberin还缺乏seq id no:1的氨基酸残基1336-1497。
5.如权利要求1所述的ctuberin，其中所述c端区域包含与seq id no:10-12中的一个具有至少90％同一性的氨基酸序列。
6.如权利要求1所述的ctuberin，其中所述ctuberin还缺乏seq id no:1的氨基酸残基933至1109。
7.如权利要求6所述的ctuberin，其中c端结构域包含与seq id no:8具有至少90％同一性的氨基酸序列。
8.如权利要求1至7中任一项所述的ctuberin，其中n端结构域包含与seq id no:5具有至少90％同一性的氨基酸序列。
9.一种凝聚的马铃薯球蛋白(ctuberin)，其包含(i)能够结合错构瘤蛋白的n端区域，和(ii)c端gtp酶活化蛋白(gap)区域，其中所述c端区域包含与seq id no:7具有至少90％同一性的氨基酸序列，并且其中所述ctuberin缺乏seq id no:1的氨基酸残基451至932。
10.如权利要求9所述的ctuberin，其中所述ctuberin缺乏seq id no:1的氨基酸残基419至932。
11.如权利要求9或10所述的ctuberin，其中所述c端区域包含与seq id no:8具有至少90％同一性的氨基酸序列。
12.如权利要求9或10所述的ctuberin，其中所述c端区域包含与seq id no:9具有至少90％同一性的氨基酸序列。
13.如权利要求9所述的ctuberin，其中所述n端区域包含与seq id no:4具有至少90％同一性的氨基酸序列。
14.如权利要求9至12中任一项所述的ctuberin，其中所述n端区域包含与seq id no:5具有至少90％同一性的氨基酸序列。
15.如权利要求9所述的ctuberin，其中所述ctuberin包含与seq id no:14具有至少90％同一性的氨基酸序列。
16.如权利要求9所述的ctuberin，其中所述ctuberin包含与seq id no:15具有至少90％同一性的氨基酸序列。
17.如权利要求9所述的ctuberin，其中所述ctuberin包含与seq id no:16具有至少90％同一性的氨基酸序列。
18.一种凝聚的马铃薯球蛋白(ctuberin)，其包含(i)能够结合错构瘤蛋白的n端区域，和(ii)c端gtp酶活化蛋白(gap)区域，其中所述c端区域包含与seq id no:10-12中的一个具有至少90％同一性的氨基酸序列，并且其中所述ctuberin缺乏seq id no:1的氨基酸残基451至932。
19.如权利要求18所述的ctuberin，其中所述ctuberin缺乏seq id no:1的氨基酸残基419-932。
20.如权利要求18或19所述的ctuberin，其中所述c端区域包含与seq id no:10具有至少90％同一性的氨基酸序列。
21.如权利要求18或19所述的ctuberin，其中所述c端区域包含与seq id no:11具有至少90％同一性的氨基酸序列。
22.如权利要求18或19所述的ctuberin，其中所述c端区域包含与seq id no:12具有至少90％同一性的氨基酸序列。
23.如权利要求18所述的ctuberin，其中所述ctuberin包含与seq id no:17具有至少90％同一性的氨基酸序列。
24.如权利要求18所述的ctuberin，其中所述ctuberin包含与seq id no:18具有至少90％同一性的氨基酸序列。
25.如权利要求18所述的ctuberin，其中所述ctuberin包含与seq id no:19具有至少90％同一性的氨基酸序列。
26.如权利要求18至25中任一项所述的ctuberin，其中所述n端区域包含与seq id no:5具有至少90％同一性的氨基酸序列。
27.如权利要求1至26中任一项所述的ctuberin，其中所述ctuberin在所述n端区域与所述c端区域之间包含间隔序列。
28.如权利要求27所述的ctuberin，其中所述间隔序列包含seq id no:2的序列。
29.如权利要求28所述的ctuberin，其中所述间隔序列包含seq id no:3的序列。
30.一种核酸分子，其编码如权利要求1至29中任一项所述的ctuberin。
31.如权利要求30所述的核酸分子，其中所述核酸分子经密码子优化以在人靶细胞中表达。
32.如权利要求31所述的核酸分子，其中所述人靶细胞是脑细胞、心脏细胞、肾细胞、皮肤细胞或肺细胞。
33.如权利要求30至32中任一项所述的核酸分子，其中所述核酸分子与调节控制序列可操作地连接。
34.如权利要求33所述的核酸分子，其中所述调节控制序列包含人巨细胞病毒(cmv)启动子、鸡β-肌动蛋白(cba)启动子、劳斯肉瘤病毒(rsv)ltr启动子/增强子、sv40启动子、二氢叶酸还原酶启动子、磷酸甘油激酶启动子、cmv立即/早期基因增强子/cba启动子、突触蛋白启动子或神经胶质纤维酸性蛋白(gfap)启动子。
35.如权利要求33所述的核酸分子，其中所述调节控制序列包含人巨细胞病毒(cmv)立即/早期基因增强子/鸡β-肌动蛋白(cba)启动子和土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件(wpre)。
36.如权利要求33所述的核酸分子，其中所述调节控制序列包含β-葡萄糖醛酸酶(gusb)启动子。
37.如权利要求30至36中任一项所述的核酸分子，其中所述核酸分子与seq id no.21-26中的任一个具有至少90％序列同一性。
38.一种编码ctuberin的核酸分子，所述ctuberin包...
【专利技术属性】
技术研发人员：D·W·斯科特，
申请(专利权)人：桥生物基因疗法研究有限责任公司，
类型：发明
国别省市：
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