一种GM-CSF自身抗体及其制备方法与应用技术

本发明专利技术提供了一种GM‑CSF自身抗体及其制备方法与应用，属于GM‑CSF自身抗体制备技术领域。本发明专利技术采用自身免疫性疾病肺泡蛋白沉积症(aPAP)患者全肺灌洗术后的肺泡灌洗液，成功制备获得了GM‑CSF自身抗体，采用本发明专利技术方法制备所得的GM‑CSF自身抗体用于GM‑CSF检测试剂盒的标准品，能够定量aPAP患者体液中的GM‑CSF含量，对于aPAP的诊断和治疗具有指导意义。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于gm-csf自身抗体制备，尤其涉及一种gm-csf自身抗体及其制备方法与应用。

技术介绍

1、自身抗体的产生是自身免疫系统疾病的表现之一，其出现会导致体内的细胞被自身抗体攻击或相关分子被抗体封闭，引起组织、器官或系统功能紊乱。粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(gm-csf)是对中性粒细胞和巨噬细胞产生重要影响的细胞因子，深刻的影响这两类髓系来源细胞的发育和功能维持。自身免疫性肺泡蛋白沉积症(apap)是成人肺泡蛋白沉积症(pap)中最常见的类型，其依赖于血清gm-csf自身抗体的定量检测(一般是5μg/ml)，尤其对于不能获得肺活检病理或肺泡灌洗液的病人而言，ct结合gm-csf自身抗体同样支持apap的诊断。因此，建立gm-csf自身抗体标准品对精确定量gm-csf抗体和诊断apap至关重要，但是目前国内尚无相关商品化可用于apap疑诊病人的gm-csf标准品和定量流程。

2、目前，对于gm-csf抗体的检测最可靠的定量方法是酶联免疫吸附法(elisa)，通过标准品定量标准曲线，去定量检测样品的数值。根据文献调研发现，apap病人体本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种制备GM-CSF自身抗体的方法，其特征在于，包括如下步骤：将aPAP患者肺泡灌洗液过ProteinA吸附柱，采用pH 2.2-2.5的甘氨酸溶液洗脱，收集洗脱液即为肺泡灌洗液总抗体；将肺泡灌洗液总抗体过GM-CSF蛋白偶联的NHS柱，采用pH 2.0-3.0的甘氨酸溶液洗脱，待可检出峰后收集洗脱液，此洗脱液即为纯化的GM-CSF自身抗体。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，GM-CSF蛋白偶联的NHS柱的制备方法包括如下步骤：将亲和蛋白凝胶NHS填料填充至亲和层析柱，活化液活化后用偶联液冲洗，将偶联液溶解的GM-CSF蛋白加入NHS柱进行偶联，封闭平衡后，即得...

【技术特征摘要】

1.一种制备gm-csf自身抗体的方法，其特征在于，包括如下步骤：将apap患者肺泡灌洗液过proteina吸附柱，采用ph 2.2-2.5的甘氨酸溶液洗脱，收集洗脱液即为肺泡灌洗液总抗体；将肺泡灌洗液总抗体过gm-csf蛋白偶联的nhs柱，采用ph 2.0-3.0的甘氨酸溶液洗脱，待可检出峰后收集洗脱液，此洗脱液即为纯化的gm-csf自身抗体。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，gm-csf蛋白偶联的nhs柱的制备方法包括如下步骤：将亲和蛋白凝胶nhs填料填充至亲和层析柱，活化液活化后用偶联液冲洗，将偶联液溶解的gm-csf蛋白加入nhs柱进行偶联，封闭平衡后，即得gm-csf蛋白偶联的nhs柱。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述活化液为ph值为3.0的1mm hcl；所述偶联液为0.2m nahco3和0.5m nacl的混合液，偶联液的ph值为8.3。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述封闭为先用封闭液进...

【专利技术属性】
技术研发人员：李时悦，宋新宇，朱易平，蔡嘉慧，张梦妮，许航，
申请(专利权)人：广州医科大学附属第一医院广州呼吸中心，
类型：发明
国别省市：