【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及外泌体，具体涉及一种外泌体脂质体及其制备方法和应用。
技术介绍
1、近年来，随着我国社会经济的发展，人们对美的追求已不止于衣着、妆容和体型，头发护理日益受到重视。一头健康秀发，可以充分彰显个人魅力与性格，业已成为爱美人士的头等大事。而头皮是头发赖以生存的“土壤”，健康的头皮才能生长和培养秀发。
2、头皮属于皮肤，头部皮肤与身体上其他部位的皮肤具有相同的生理结构，但与面部皮肤相比又有着许多特点。其一：头部皮肤的皮脂腺、汗腺、毛囊数量要比面部皮肤多得多， 且较面部皮肤代谢周期时间短，有着油脂分泌速度更快、环境更潮湿，并且由于发丝的阻碍更难清洁的特点。因此头皮潮湿、油脂丰富的环境更容易滋生微生物，引起头皮肩等头皮问题。其二：头部皮肤的厚度要比面部皮肤更薄（仅次于眼部皮肤），因此较敏感，其衰老速度更快。也就是说对于外界刺激，头皮可能比面部更加敏感，更容易出现瘙痒等 皮 肤问题。此外头皮的衰老严重影响毛囊及毛发的生长。其三：头皮皮肤皮下组织中富含血 管神经，头皮状态更容易受到情绪、压力等影响 ，容易受内分泌影响产生脱发、白发等问题。
3、据不完全统计，进入青春期后，一半以上的人群被头皮问题所困扰。目前对于头皮问题的具体发病机制及其生化改变尚不完全清楚，但多数研究表明，微生物学因素及局部免疫反应在头皮问题的发病过程中起到了主要作用。目前普遍认为以马拉色菌和葡萄球菌为主的微生物的过度增殖、头皮油脂分泌和个体易感性是最重要的3个因素。
4、目前市售的头皮护理产品以化妆品为主，主要通过添加各种抗真
5、随着人们生活水平的提高，化妆品的功效、安全、品质越来越受关注。因此，研发一种纯天然、安全性高、疗效显著的头皮护理产品成为医药领域技术人员亟待解决的问题。
6、近年来随着有关再生医学研究的逐步深入，人们发现无论在动物实验还是临床研究中，外泌体在组织再生和损伤修复方面具有与其来源细胞相同的功效。因此合理利用外泌体是现代科学的一个重要方向。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是针对现有技术中的不足，提供一种生物相容性好、安全性高的外泌体，当将本专利技术的外泌体脂质体应用于头皮修复护理产品，可有效解决传统活性物质易于失效且难以透皮吸收的问题。
2、本专利技术的目的通过下述技术方案实现：
3、一种外泌体脂质体，它由宫内膜干细胞外泌体、单螺旋交联透明质酸钠、麦角硫因、卵磷脂和胆固醇组成。
4、一种如权利要求1所述的外泌体脂质体的制备方法，它包括以下制备步骤：
5、步骤a:在50-60ml ph 7.4 磷酸缓冲液中加入4.5-6.5g单螺旋交联透明质酸钠、4-5g麦角硫因，搅拌至完全溶解，再加入9-10g宫内膜干细胞外泌体，搅拌5-10min后，转移到冷冻干燥机中冷冻干燥，得到冻干外泌体；
6、步骤b:将9-10g卵磷脂和26-29g胆固醇溶于10-15ml无水乙醇中，将2-3g冻干外泌体溶于5-10ml ph 7.4 磷酸缓冲液中，室温下将上述两种溶液在功率为60-65w超声下混合15-20 min；然后将混合液旋蒸至凝胶状，加20-25ml ph 7.4 磷酸盐缓冲液水化20-25min，再使用超声细胞破碎仪进行超声破碎，最后用0.22μm滤膜过滤，即得到外泌体脂质体。
7、优选的，步骤a中，冷冻干燥的具体步骤为：
8、以降温速度为0.3-0.5℃/min的速率将冷冻干燥机的搁板温度降至-40至-55℃，当制品温度降至-45℃以下时，保持2-3小时；开始抽真空，当真空度达到21±2pa时，开始升温；将搁板温度以升温速率为0.1-0.3℃/min，升至不高于-33℃，待视镜处样品水线消失后，结束一次干燥；
9、将搁板温度以升温速率为0.5-3℃/分钟，升至10℃，真空设定为0.01pa，保温3-5小时；将搁板温度升至18℃，真空不变，保温2-5小时;将搁板温度升至27℃，真空不变，保温2-3小时，结束后即得冻干后的外泌体。
10、优选的，所述单向螺旋交联透明质酸钠的制备方法为：
11、将质量比为（5-8）：（3-5）:1的透明质酸钠与交联剂1,4-丁二醇二环氧甘油醚、注射用水混合均匀，制得透明质酸钠交联反应体系；
12、将透明质酸钠交联反应体系置于离心管17000r/min离心40-50min；高速离心完成后转入3100r/min低速离心140-160min，同时将透明质酸钠交联反应体系升到51℃后保持该温度不变50-60min，65-75℃烘干，得到单向螺旋交联透明质酸钠。
13、优选的，宫内膜干细胞外泌体的制备方法如下：
14、将第4-5代脐带间充质干细胞培养至60％-70％融合时，更换为无血清培养基，继续培养48-72 h后，收集细胞培养基上清液；
15、在4℃，300g的条件下离心上清液10min，去除间充质干细胞，得到细胞上清液；将细胞上清液在4℃，2000g下离心20min进一步去除死细胞和杂质，收集上清液；在4℃，10000g下离心30min去除细胞碎片，收集上清液；
16、最后将上清液使用0.22μm的滤膜过滤，使用100kd超滤管进行超滤浓缩，再使用3kd超滤管进一步浓缩，得到宫内膜干细胞外泌体。
17、将该外泌体脂质体用于头皮护理，外泌体是经血来源干细胞发挥旁分泌作用的主要物质，属于胞外囊泡的一种，直径大小为 30-150 nm，其中含有脂质、核糖核酸和蛋白质。虽然外泌体并不具备经血来源干细胞的分化再生能力，但也降低了经血来源干细胞治疗发生免疫排斥、栓塞或肿瘤形成的风险。本专利技术运用现代技术对宫内膜干细胞外泌体进行有效处理，制备了一种外泌体脂质体，为开发安全性高的头皮修复护理产品提供基础依据。
18、本专利技术步骤a中，经冻干后的外泌体不仅保留了原有的生物活性，其稳定性对保存介质、温度和时间不再敏感。未经冻干的外泌体是具有双层脂膜的囊泡结构,提取后的外泌体的完整性和生物活性受到保存介质、保存温度和时间等因素的影响。目前, 最常用的储存方法为冷冻保存, 但是冷冻保存可能会导致外泌体形状与物理性质的改变, 同时导致多层囊泡的形成和聚集, 反复冻融还会导致外泌体表面分子的生物特性、含量和标志物组成发生变化。外泌体虽然建议保存于−80℃环境下, 但在储存、运输和使用过程中是很难维持这种低温条件，限制了其应用。冻干后的外泌体可以提供更好的保质期，方便储藏和运输。
19、但是在冻干过程中存在许多应力，包括低温应力、冻结应力(枝状冰晶的形成、离子强度的增加、ph值的改变、相分离等)、干燥应力(失去蛋白质表面水分子)等，这些应力常常直接或间接导致外泌体失去天然本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种外泌体脂质体，其特征在于：它由宫内膜干细胞外泌体、单螺旋交联透明质酸钠、麦角硫因、卵磷脂和胆固醇组成。
2.一种如权利要求1所述的外泌体脂质体的制备方法，其特征在于：它包括以下制备步骤：
3.根据权利要求2所述的一种外泌体脂质体的制备方法，其特征在于：步骤A中，冷冻干燥的具体步骤为：
4.根据权利要求2所述的一种外泌体脂质体的制备方法，其特征在于：步骤A中，所述单向螺旋交联透明质酸钠的制备方法为：
5.根据权利要求2所述的一种外泌体脂质体的制备方法，其特征在于：步骤A中，宫内膜干细胞外泌体的制备方法如下：
6.一种如权利要求1或2所述的外泌体脂质体的用途，其特征在于：将该外泌体脂质体用于头皮护理。
【技术特征摘要】
1.一种外泌体脂质体，其特征在于：它由宫内膜干细胞外泌体、单螺旋交联透明质酸钠、麦角硫因、卵磷脂和胆固醇组成。
2.一种如权利要求1所述的外泌体脂质体的制备方法，其特征在于：它包括以下制备步骤：
3.根据权利要求2所述的一种外泌体脂质体的制备方法，其特征在于：步骤a中，冷冻干燥的具体步骤为：
4.根...
【专利技术属性】
技术研发人员：雷艳，梁奕福，梁文棋，
申请(专利权)人：广西信业生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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