【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，具体涉及一种高灵敏度抗痤疮杆菌抗体及其制备方法和应用。
技术介绍
1、痤疮杆菌是一种革兰氏阳性菌，来自放线菌门，与葡萄球菌、棒状杆菌、链球菌和假单胞菌等一起，构成人类皮肤的主要定植菌。1946 年以来一直被划分为丙酸杆菌属，近年来归为表皮细菌属，但仍然存在争议。痤疮是皮肤科常见的慢性毛囊皮脂腺炎症性疾病，其发病主要与痤疮杆菌的过度增殖、促进皮脂腺过度分泌、刺激角质细胞过度角化，加重炎症， 导致粉刺、丘疹及脓疱的形成。
2、痤疮好发于青少年，常反复发作，难以治愈。由于主要发生于面部，对患者造成极大 的心理负担，痤疮后瘢痕也会导致终生的自尊问题，痤疮杆菌是与痤疮关系最密切的致病菌。
3、免疫层析技术起源于20 世纪后期，是将免疫技术和色谱层析技术相结合建立的一种快速检测体系。该快速检测体系相比于传统的高精度仪器检测，具有检测成本低、周期短、对设备和检测人员不具特殊要求等优点。针对不同的检测靶标，其检测模式主要分为基于大分子检测物的夹心检测模式以及基于小分子检测物的竞争检测模式两大类。其组成主要包括以下几个部分：硝酸纤维素（nc）膜、样品垫、结合垫和吸收垫。其核心流程主要包括纳米粒子标记物的制备、抗体-纳米粒子标记复合物的制备、免疫层析试纸条的制备及其性能优化。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是为了解决以上现有技术的不足，提供一种高灵敏度抗痤疮杆菌单克隆抗体，特异性好，亲和力高，能够用于胶体金层析检测。
2、为了实现上述专利技术
3、所述抗痤疮杆菌抗体的重链cdr1的基因序列如seq id no:1所示；
4、所述抗痤疮杆菌抗体的重链cdr2的基因序列如seq id no:2所示；
5、所述抗痤疮杆菌抗体的重链cdr3的基因序列如seq id no:3所示；
6、所述抗痤疮杆菌抗体的轻链cdr1的基因序列如seq id no:4所示;
7、所述抗痤疮杆菌抗体的轻链cdr2的基因序列如seq id no:5所示;
8、所述抗痤疮杆菌抗体的轻链cdr3的基因序列如seq id no:6所示；
9、根据权利要求1所述的一种高灵敏度抗痤疮杆菌抗体，所述抗痤疮杆菌抗体重链可变区的基因序列如seq id no:7所示，轻链可变区的基因序列如seq id no:8所示。
10、本专利技术还提供一种制备上述高灵敏度抗痤疮杆菌抗体的制备方法，包括以下步骤：
11、1）表达载体构建：将合成的如seq id no:11的抗体重链基因序列、如seq id no:12的抗体轻链基因序列和载体ptt5进行酶切回收，采用t4链接酶将载体进行链接，构建重组抗体重链、轻链质粒。
12、2）表达载体转化感受态大肠杆菌：采用热激法将重组抗体重链、轻链质粒转化至dh5α感受态大肠杆菌，经培养，提取得到包含抗体重链、轻链基因的质粒。
13、3）采用 pei 转染法，将步骤3）得到的包含抗体重、轻链基因的质粒共转染hek293细胞，其中，包含抗体基因重链基因的质粒和包含抗体基因轻链基因质粒使用比列为2：1。
14、4）分离纯化获得所述的抗痤疮杆菌抗体。
15、优选的，所述抗体重链、轻链基因序列的合成包括：将编码如seq id no:9所示抗痤疮杆菌抗体重链基因序列和如seq id no:10所示抗痤疮杆菌抗体轻链基因序列的氨基酸端添加信号肽，羧基端添加终止子tga，序列两端氨基酸和羧基端分别引入酶切位点hindiii和bamhi。
16、本专利技术还提供上述的高灵敏度抗痤疮杆菌抗体在制备用于免疫层析检测痤疮杆菌的试剂盒的应用。
17、有益效果：本专利技术提供的高灵敏度抗痤疮杆菌单克隆抗体，特异性好，亲和力高，能够用于胶体金层析检测，对痤疮杆菌做出快速、准确的检测。现在市面上没有痤疮杆菌相关的试剂盒，该抗体在制备用于免疫层析检测痤疮杆菌的试剂盒的应用填补了一个市场应用空白。
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1.一种高灵敏度痤疮杆菌单克隆抗体，其特征在于，所述抗痤疮杆菌抗体包括重链CDR1、重链CDR2、重链CDR3，轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3；
2.根据权利要求1所述的一种高灵敏度痤疮杆菌单克隆抗体，其特征在于，所述抗痤疮杆菌抗体重链可变区的基因序列如SEQ ID NO:7所示，轻链可变区的基因序列如SEQ IDNO:8所示。
3.一种制备权利要求1或2权利要求所述高灵敏度痤疮杆菌单克隆抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
4.根据权利要求3所述的抗痤疮杆菌抗体的制备方法，其特征在于，抗体重链、轻链基因序列的合成包括：将编码如SEQ ID NO:9所示抗痤疮杆菌抗体重链基因序列和如SEQ IDNO:10所示抗痤疮杆菌抗体轻链基因序列的氨基酸端添加信号肽，羧基端添加终止子TGA，序列两端氨基酸和羧基端分别引入酶切位点HindIII和BamHI。
5.如权利要求1所述的高灵敏度抗痤疮杆菌抗体在制备用于免疫层析检测痤疮杆菌的试剂盒的应用。
【技术特征摘要】
1.一种高灵敏度痤疮杆菌单克隆抗体，其特征在于，所述抗痤疮杆菌抗体包括重链cdr1、重链cdr2、重链cdr3，轻链cdr1、轻链cdr2和轻链cdr3；
2.根据权利要求1所述的一种高灵敏度痤疮杆菌单克隆抗体，其特征在于，所述抗痤疮杆菌抗体重链可变区的基因序列如seq id no:7所示，轻链可变区的基因序列如seq idno:8所示。
3.一种制备权利要求1或2权利要求所述高灵敏度痤疮杆菌单克隆抗体的制备方法，其特征在于，包...
【专利技术属性】
技术研发人员：贾凤芹，
申请(专利权)人：南京拂晓生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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