【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药，具体涉及一种用于检测bcr-abl融合基因分型的引物探针组、试剂盒。
技术介绍
1、慢性粒细胞白血病(chronic myelocytic leukemia,cml)是一种影响血液及骨髓的恶性肿瘤，它的特点是产生大量不成熟的白细胞，这些白细胞在骨髓内聚集，抑制骨髓的正常造血。其细胞遗传学特征是具有费城染色体(ph)，即9号染色体长臂(9q34)上的原癌基因abl易位至22号染色体长臂(22q11)上的bcr基因后重新组合成的融合基因。在abl基因中，a2外显子上游是常见的位置断点。在bcr基因中，共有三个常见的断裂位点，即外显子e13或e14、e1和e19下游的断裂点，导致e13a2或e14a2、e1a2和e19a2融合转录本，分别编码p210、p190和p230癌蛋白。在cml患者中，最常见的bcr-abl亚型是e13a2或e14a2融合基因。p210蛋白出现于90％以上的cml患者体内。此外，p190蛋白多出现在all(急性淋巴细胞白血病)患者体内，而p230蛋白也可以提示某些白血病，如cml的发生。因此融合基因bcr-abl可作为白血病分型诊断、疗效评价、用药指导、以及治疗监测的可靠指标。
2、此前的荧光pcr法检测大多每次检测某一个位点，需要的样品量比较多，检测成本比较高；实验操作数量比较复杂，检测程序耗时比较长。
3、现有中国专利cn201710493398.0中公开了一种癌症相关突变基因的高灵敏度检测方法和试剂盒。该方法需要先针对目的基因设计一组带标记的引物，然后进行两
技术实现思路
1、有鉴于此，面对现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种用于检测bcr-abl融合基因分型的引物探针组、试剂盒。
2、为实现上述目的，本专利技术具体采用如下技术方案。
3、本专利技术的第一方面保护一种用于检测bcr-abl融合基因分型的引物探针组，引物探针组包含第一引物探针组、第二引物探针组和第三引物探针组；其中，
4、所述第一引物探针组包含第一引物对和第一探针，所述第一引物对包含如seq idno.2和seq id no.1所示序列的引物，所述第一探针包含如seq id no.3所示序列的探针；
5、所述第二引物探针组包含第二引物对和第二探针，所述第二引物对包含如seq idno.4和seq id no.1所示序列的引物，所述第二探针包含如seq id no.5所示序列的探针；
6、所述第三引物探针组包含第三引物对和第三探针，所述第三引物对包含如seq idno.6和seq id no.1所示序列的引物，所述第三探针包含如seq id no.7所示序列的探针。
7、本专利技术的第二方面保护如前述所述的引物探针组在非疾病诊断目的检测bcr-abl融合基因分型或制备检测bcr-abl融合基因分型的产品中的用途。
8、本专利技术的第三方面保护一种检测bcr-abl融合基因分型的产品，所述产品包含如前述所述的引物探针组。
9、本专利技术的第四方面保护一种非疾病诊断目的检测bcr-abl融合基因分型的方法，包括以下步骤：
10、1)提供待测样本的rna样本；
11、2)采用如前述所述的引物探针组或如前述所述的产品进行pcr扩增，得到pcr产物；
12、3)对所述pcr产物的荧光信号进行收集并进行结果分析。
13、本专利技术的第五方面保护如前述所述的引物探针组或如前述所述的产品或如前述所述的方法在如下至少一项中的用途，
14、1)非疾病诊断目的检测bcr-abl融合基因分型；
15、2)筛选与bcr-abl融合基因相关的疾病的药物。
16、与现有技术相比，本申请的有益效果为：
17、1)本专利技术的引物探针组、检测产品能同时对最常见的3种bcr-abl融合基因进行检测，覆盖大多数该融合导致的白血病检测；能对这3种融合型进行分型，指导选择分子靶向药，利用数字pcr可以进行绝对定量，有利于医生判断病情的不同阶段，并预测病情的走势，在微小残留病灶(mrd)检测方向有着明显的优势。
18、2)本专利技术的引物探针组、检测产品采用数字pcr的方法，可以做到绝对定量，采用一步法的扩增方法，操作相对简单，检测时间更短。
19、3)本专利技术的引物探针组、检测产品的灵敏度可达到0.06copies/μl，最低可正常检出is值为0.0023％(样本中融合基因拷贝数与abl基因拷贝数的比值)，低于nccn中提到的有检测价值的最低is值—0.0032％，能完全满足临床的低拷贝模板、快速检测、精确度和准确度高的要求，同时成本较低。
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1.一种用于检测BCR-ABL融合基因分型的引物探针组，其特征在于，引物探针组包含第一引物探针组、第二引物探针组和第三引物探针组；其中，
2.如权利要求1所述的引物探针组，其特征在于，还包含针对内参基因ABL的第四引物探针组，所述第四引物探针组包含第四引物对和第四探针，所述第四引物对包含如SEQIDNO.8和SEQ ID NO.9所示序列的引物，所述第四探针包含如SEQ ID NO.10所示序列的探针。
3.如权利要求2所述的引物探针组，其特征在于，所述第一探针、所述第二探针、所述第三探针和第四探针的两端均分别标记荧光基团和淬灭基团；优选的，所述第一探针、所述第二探针、所述第三探针和第四探针上标记的荧光基团各不相同，且所述第一探针、所述第二探针、所述第三探针和第四探针上标记的淬灭基团相同。
4.如权利要求3所述的引物探针组，其特征在于，所述荧光基团选自FAM、HEX、ROX和CY5中的一种；
5.如权利要求1-4任一项所述的引物探针组在非疾病诊断目的检测BCR-ABL融合基因分型或制备检测BCR-ABL融合基因分型的产品中的用途。<...
【技术特征摘要】
1.一种用于检测bcr-abl融合基因分型的引物探针组，其特征在于，引物探针组包含第一引物探针组、第二引物探针组和第三引物探针组；其中，
2.如权利要求1所述的引物探针组，其特征在于，还包含针对内参基因abl的第四引物探针组，所述第四引物探针组包含第四引物对和第四探针，所述第四引物对包含如seqidno.8和seq id no.9所示序列的引物，所述第四探针包含如seq id no.10所示序列的探针。
3.如权利要求2所述的引物探针组，其特征在于，所述第一探针、所述第二探针、所述第三探针和第四探针的两端均分别标记荧光基团和淬灭基团；优选的，所述第一探针、所述第二探针、所述第三探针和第四探针上标记的荧光基团各不相同，且所述第一探针、所述第二探针、所述第三探针和第四探针上标记的淬灭基团相同。
4.如权利要求3所述的引物探针组，其特征在于，所述荧光基团选自fam、hex、rox和cy5中的一种；
5.如权利要求1-4任...
【专利技术属性】
技术研发人员：吴培洋，
申请(专利权)人：臻准生物科技上海有限公司，
类型：发明
国别省市：
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