【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于基因文库构建，尤其涉及一种构建牛t细胞受体tcr β cdr3文库的多重pcr引物组及其应用。
技术介绍
1、免疫学研究是探索生物体如何识别病原体、维护健康并应对疾病挑战的关键领域，为理解免疫系统功能、疾病机制及疫苗与治疗开发提供关键洞见。t细胞组库研究为免疫学提供了关键洞见，t细胞多样性和特异性与免疫应答、疾病治疗以及疫苗开发息息相关。了解动物的tcr β cdr3序列信息对于理解其免疫系统功能和特性至关重要。tcrβcdr3代表t细胞受体β链的互补决定区3，其中的多样性和特异性直接影响着t细胞的抗原识别和免疫反应。在过去几十年里，人和小鼠作为模型生物，在tcr β cdr3组库分析方面进行了广泛的研究，这些研究为免疫学、疾病诊断、免疫疗法以及疫苗研发提供了深刻的洞察。
2、随着高通量测序技术的不断发展和生物信息学分析工具的完善，tcr β cdr3组库分析变得更加全面和高效。这种技术的发展为研究人员提供了更准确、更全面的tcrβcdr3序列信息，这些信息对于免疫学基础研究、药物研发、疾病诊断和个性化医疗具有重要意义。目前本领域大多侧重于人类和小鼠tcr β cdr3组库分析方面，鲜有对于牛tcr β cdr3组库分析方法的有关研究。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种构建牛t细胞受体tcr β cdr3文库的多重pcr引物组及其在构建牛t细胞受体tcr β cdr3文库中的应用。本专利技术提供的牛的tcrβcdr3组库以及分析方法
2、为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供了以下技术方案：
3、本专利技术提供了一种构建牛t细胞受体tcr β cdr3文库的多重pcr引物组，所述多重pcr引物组包括核苷酸序列如seq id no.1-seq id no.47所示的引物序列。
4、本专利技术还提供了上述多重pcr引物组在构建牛t细胞受体tcr β cdr3文库中的应用。
5、本专利技术还提供了一种构建牛t细胞受体tcr β cdr3文库的方法，包括如下步骤：采用上述的多重pcr引物组对牛dna进行多重pcr扩增，对扩增产物进行凝胶电泳检测，在100-250bp之间存在清晰的目的条带，表明建库成功。
6、优选的，所述多重pcr扩增的反应条件为：94℃预变性3分钟；94℃变性1分钟、56℃退火1分钟、72℃延伸1分钟，总共进行40个循环；72℃延伸10分钟。
7、优选的，所述多重pcr扩增的反应体系以50μl计，包括25μl dream taq green pcrmaster mix、2.8μl上游引物、2.8μl下游引物、5μl模板dna和14.4μl dd h2o。
8、本专利技术还提供了上述方法构建所得的牛t细胞受体tcr β cdr3文库。
9、本专利技术还提供了上述方法或上述tcr β cdr3文库在免疫学研究、遗传育种或疾病诊断药物研发中的应用。
10、本专利技术还提供了上述方法或上述tcr β cdr3文库在制备牛免疫响应特性评估药物、疫苗或免疫相关疾病诊断药物中的应用。
11、优选的，在上述方法基础上，还包括如下步骤：将扩增产物进行高通量测序，对测序结果进行数据分析和解读，获得牛tcr β cdr3组库的信息。
12、优选的，所述数据分析和解读包括tcr β cdr3序列的比对、统计、功能注释、克隆频率和/或氨基酸插入剪切分析，以获得相关参数和特征。
13、本专利技术的有益效果：
14、本专利技术首次提供了构建牛t细胞受体tcr β cdr3文库的多重pcr引物组及其在构建牛t细胞受体tcr β cdr3文库中的应用，以及构建所得的牛t细胞受体tcr β cdr3文库，能够为牛免疫学研究、疾病诊断、疫苗研发以及免疫相关疾病治疗提供深入了解，并为牛免疫系统的特异性特征提供重要信息。本专利技术提供的牛的tcr β cdr3组库分析方法的开发将填补该领域的知识空白，并有望为兽医学、畜牧业以及相关领域的研究提供新的工具和视角，为牛免疫系统研究和相关应用提供重要支持。
15、本专利技术借助较少的多重pcr引物序列在同一个多重pcr反应体系中进行扩增，能够快速、高效地获得牛tcr β cdr3区的组库信息，为进一步的免疫相关研究和疾病诊断提供了有效的工具。本专利技术设计的多重pcr引物序列具有高特异性和灵敏度。根据本专利技术方法构建的组库，能够覆盖胚系基因中几乎所有的v基因和j基因，具有覆盖率高的优势。
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1.一种构建牛T细胞受体TCRβCDR3文库的多重PCR引物组，其特征在于，所述多重PCR引物组包括核苷酸序列如SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.47所示的引物序列。
2.权利要求1所述多重PCR引物组在构建牛T细胞受体TCRβCDR3文库中的应用。
3.一种构建牛T细胞受体TCRβCDR3文库的方法，其特征在于，包括如下步骤：采用权利要求1所述的多重PCR引物组对牛DNA进行多重PCR扩增，对扩增产物进行凝胶电泳检测，在100-250bp之间存在清晰的目的条带，表明建库成功。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述多重PCR扩增的反应条件为：94℃预变性3分钟；94℃变性1分钟、56℃退火1分钟、72℃延伸1分钟，总共进行40个循环；72℃延伸10分钟。
5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述多重PCR扩增的反应体系以50μl计，包括25μl Dream Taq Green PCR Master Mix、2.8μl上游引物、2.8μl下游引物、5μl模板DNA和14.4μl dd H2O。
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7.权利要求3-5任意一项所述方法或权利要求6所述的TCRβCDR3文库在免疫学研究、遗传育种或疾病诊断药物研发中的应用。
8.权利要求3-5任意一项所述方法或权利要求6所述的TCRβCDR3文库在制备牛免疫响应特性评估药物、疫苗或免疫相关疾病诊断药物中的应用。
9.根据权利要求7或8所述的应用，其特征在于，在权利要求3-5任意一项所述方法基础上，还包括如下步骤：将扩增产物进行高通量测序，对测序结果进行数据分析和解读，获得牛TCRβCDR3组库的信息。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述数据分析和解读包括TCRβCDR3序列的比对、统计、功能注释、克隆频率和/或氨基酸插入剪切分析，以获得相关参数和特征。
...【技术特征摘要】
1.一种构建牛t细胞受体tcrβcdr3文库的多重pcr引物组，其特征在于，所述多重pcr引物组包括核苷酸序列如seq id no.1-seq id no.47所示的引物序列。
2.权利要求1所述多重pcr引物组在构建牛t细胞受体tcrβcdr3文库中的应用。
3.一种构建牛t细胞受体tcrβcdr3文库的方法，其特征在于，包括如下步骤：采用权利要求1所述的多重pcr引物组对牛dna进行多重pcr扩增，对扩增产物进行凝胶电泳检测，在100-250bp之间存在清晰的目的条带，表明建库成功。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述多重pcr扩增的反应条件为：94℃预变性3分钟；94℃变性1分钟、56℃退火1分钟、72℃延伸1分钟，总共进行40个循环；72℃延伸10分钟。
5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述多重pcr扩增的反应体系以50μl计，包括25μl dream taq green pcr m...
【专利技术属性】
技术研发人员：李俊，姚新生，吴凤丽，惠林虎，马龙，李洋洋，
申请(专利权)人：遵义医科大学，
类型：发明
国别省市：
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