【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于医药，具体涉及一种ipsc诱导分化的间充质干细胞及其诱导方法和应用。
技术介绍
1、炎性肠病包括溃疡性结肠炎和克罗恩病，是炎症性肠病的两种主要形式。其中，溃疡性结肠炎是一类多病因引起、异常免疫导致的肠道慢性及复发性炎症，并且目前溃疡性结肠炎没有治愈的方法，常规治疗方法为使用消炎药、强效类固醇或免疫调节剂来控制发病症状，但是并没有获得持久的缓解，最终只能通过手术切除大部分甚至全部结肠。因此，亟需研制一种有效治疗溃疡性结肠炎的方法。
2、间充质干细胞(mesenchymal stem cells，msc)对多种疾病具有治疗作用，已经作为一类干细胞药物进入临床试验及应用阶段，但间充质干细胞是异质性非常大的一类细胞群体，其供体差别、分离培养条件及制备工艺均影响细胞的质量，即：间充质干细胞存在专一性较差、特性不均衡的缺陷，进而容易导致临床疗效不一致的问题，经统计临床有效率不足30％。
技术实现思路
1、本专利技术为解决现有技术中缺乏有效治疗溃疡性结肠炎的方法，以及间充质干细胞专一性较差、特性不均衡的技术问题，本专利技术提供一种ipsc诱导分化的间充质干细胞及其诱导方法和应用。
2、本专利技术的目的通过以下技术方案实现：
3、本专利技术的目的之一在于提供一种ipsc诱导分化间充质干细胞的方法，所述方法包括以下步骤：
4、s1：将ipsc置于mtesr1培养基中培养扩增至t75培养瓶的80％，获得扩增后的msc细胞；
5、
6、s3：将s2中诱导后的msc细胞经胰蛋白酶消化后，重新接种于0.1％明胶包被的细胞培养瓶中进行培养，培养至4代后获得ipsc诱导分化后的间充质干细胞。
7、进一步限定，s2中所述的诱导分化过程为在混合培养基中，隔天换一次液，诱导分化6d，再转入诱导培养基中，诱导分化5d。
8、进一步限定，s2中所述的混合培养基为mtesr1培养基和诱导培养基1:1混合。
9、更进一步限定，所述的诱导培养基以l-dmem作为基础培养基，再加入10％血清替代物，1％血小板裂解物，2mm l-谷氨酰胺，1％非必需氨基酸，2μg b-fgf，1μm的铁死亡抑制剂，10μm y-27632作为培养基的主要诱导成分。
10、进一步限定，s3所述的胰蛋白酶包括0.25％胰蛋白酶和1mm edta。
11、进一步限定，s3所述细胞培养瓶中的培养基包括a-mem、1％血小板裂解液、10％血清替代物、2μg b-fgf、1μm的铁死亡抑制剂和10μm y-27632。
12、本专利技术的目的之二在于提供一种按上述方法ipsc诱导分化的间充质干细胞。
13、本专利技术的目的之三在于提供一种上述ipsc诱导分化的间充质干细胞在治疗溃疡性结肠炎中的应用。
14、进一步限定，所述的应用是指在制备治疗溃疡性结肠炎药物中的应用。
15、进一步限定，所述的应用是指在治疗过程中，将上述ipsc诱导分化的间充质干细胞通过静脉注射的方式治疗溃疡性结肠炎。
16、本专利技术的目的之四在于提供一种含有上述ipsc诱导分化的间充质干细胞的药物，所述药物含有ipsc诱导分化的间充质干细胞作为活性成分和药学上可接受的载体。
17、本专利技术的有益效果：
18、(1)本专利技术提供的ipsc诱导分化间充质干细胞的方法，操作简便，避免使用拟胚体培养和流式分选技术，提高了诱导分化效率，降低了诱导分化成本。
19、(2)本专利技术提供的ipsc诱导分化的间充质干细胞形态更均一，细胞更小，解决了脐带msc形态不均一的技术问题，同时，降低了因输注细胞而引起的栓塞风险。ipsc诱导分化的间充质干细胞培养72h时的增殖能力约为脐带msc细胞的2倍，并且具备比脐带msc更强的成脂和成骨分化能力。
20、(3)本专利技术提供的ipsc诱导分化的间充质干细胞处理后的结肠缩短约0.8cm，经dss处理的模型组小鼠结肠缩短约2.5cm，表明ipsc诱导分化的间充质干细胞对于溃疡性结肠炎导致的结肠缩短具有改善功能，对于结肠组织的病变也具有一定的改善能力；并且能够将促炎相关细胞生长因子il-1β表达量降低约80％，il-6表达量降低约70.5％，tnf-α表达量降低约90％，证明其具有较强的抑制促炎相关细胞生长因子表达的功能；经ipsc诱导分化的间充质干细胞处理后的小鼠体重降低不显著，表明其副作用较小，安全性较高。
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1.一种iPSC诱导分化间充质干细胞的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，S2中所述的诱导分化过程为在混合培养基中，隔天换一次液，诱导分化6d，再转入诱导培养基中，诱导分化5d。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，S2中所述的混合培养基为mTESR1培养基和诱导培养基1:1混合；所述的诱导培养基以L-DMEM作为基础培养基，再加入10％血清替代物，1％血小板裂解物，2mM L-谷氨酰胺，1％非必需氨基酸，2μg b-FGF，1μM的铁死亡抑制剂，10μM Y-27632作为培养基的主要诱导成分。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，S3所述的胰蛋白酶包括0.25％胰蛋白酶和1mM EDTA。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，S3所述细胞培养瓶中的培养基为a-MEM、1％血小板裂解液、10％血清替代物、2μg bFGF、1μM的铁死亡抑制剂和10μM Y-27632。
6.一种权利要求1所述方法iPSC诱导分化的间充质干细胞。
7.权利要求
8.根据权7所述iPSC诱导分化的间充质干细胞应用，其特征在于，所述应用是指在制备治疗溃疡性结肠炎药物中的应用。
9.根据权7所述iPSC诱导分化的间充质干细胞应用，其特征在于，所述应用是指在治疗过程中，将权6所述iPSC诱导分化的间充质干细胞通过静脉注射的方式治疗溃疡性结肠炎。
10.一种用于治疗溃疡性结肠炎的药物，其特征在于，含有如权利要求6所述iPSC诱导分化的间充质干细胞作为活性成分和药学上可接受的载体。
...【技术特征摘要】
1.一种ipsc诱导分化间充质干细胞的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，s2中所述的诱导分化过程为在混合培养基中，隔天换一次液，诱导分化6d，再转入诱导培养基中，诱导分化5d。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，s2中所述的混合培养基为mtesr1培养基和诱导培养基1:1混合；所述的诱导培养基以l-dmem作为基础培养基，再加入10％血清替代物，1％血小板裂解物，2mm l-谷氨酰胺，1％非必需氨基酸，2μg b-fgf，1μm的铁死亡抑制剂，10μm y-27632作为培养基的主要诱导成分。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，s3所述的胰蛋白酶包括0.25％胰蛋白酶和1mm edta。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，s3...
【专利技术属性】
技术研发人员：郑芳，
申请(专利权)人：北京彩真细胞技术服务有限责任公司，
类型：发明
国别省市：
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