【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及药物分析，具体是一种检测2-氯-3-吡啶胺及其有关物质的高效液相色谱法。
技术介绍
1、2-氯-3-吡啶胺是合成其他多个产品的重要化工和医药中间体的重要原料，比如：以烟酰胺为起始原料的合成2-氯-3-吡啶胺，再合成2，3-二氯吡啶，再经过多步合成反应最终可合成新型杀虫剂氯虫苯甲酰胺。该杀虫剂具有高效、低毒的特性，且对鳞翅目害虫有特效，原理是通过过度释放细胞内的钙离子，导致昆虫瘫痪死亡，杀虫效果好，且存续期长，对农产品的残留影响效果小，安全性高，应用市场广泛。作为多年来向氯虫苯甲酰胺原研厂家供应该产品关键中间体原料的全球最主要生产工厂，南通雅本化学有限公司采用了经过2-氯-3-吡啶胺的合成路线，对2-氯-3-吡啶胺在生产、储存等过程的质量控制进行了不少研究。
2、2-氯-3-吡啶胺分子式为c5h5cln2，结构式如下：
3、
4、合成关键中间体2-氯-3-吡啶胺的工艺步骤繁多，过程检测控制繁琐，涉及到多种仪器设备的应用，检测分析成本高。尤其是在合成2-氯-3-吡啶胺前后的连续多步反应中，涉及到化学结构很类似的多个有关物质(其中包括原料残留杂质、中间体残留杂质、副反应杂质、降解产物杂质等，如表1：2-氯-3-吡啶胺有关物质列表)，质量控制难度大。若该中间体产品的含量和有关物质检测不准确，会导致后续制成工艺收率受到影响，进而会导致后续多步骤原料(单耗)的严重影响。
5、表1：2-氯-3-吡啶胺有关物质列表
6、
7、目前未见有关于2-氯-3-吡啶胺及
8、专利申请文献cn105974036a所述正相色谱法只在于分离2-3种氨基吡啶异构体，与本专利技术所述反相色谱法及目的都相去甚远。cn114354801b所述气质联用方法也是用于分离几种氨基吡啶异构体，所采用昂贵气质联用仪器不便于普遍应用，图谱显示方法运行总共不到10分钟，很难解决本专利技术方法所要洗脱分离除氨基吡啶异构体外的更多有关物质的复杂问题，更关键问题在于，2-氯-3-吡啶胺的相关合成生产基本都是在水相体系中完成的，气相色谱分离的方法不适合水相样品检测，更不适合用于解决本专利技术方法所要洗脱分离除氨基吡啶异构体外的更多有关物质的复杂问题。专利cn115184486b所述检测磷酸二氨基吡啶有关物质的方法，提供一种运行长达60分钟的普通c18填充柱色谱法，单纯甲醇水用a、b相混合洗脱，只分离磷酸二氨基吡啶有关的少数几个有关物质问题不大，却不太能将本专利技术如此众多的氯代吡啶胺相关物质完全分离。专利cn106053570b所提供普通c18柱运行30分钟的方法，分离4-氰基吡啶中3-氰基吡啶和4-甲基吡啶的两种杂质，此法很难优化用于解决本专利技术所涉及结构类似的多个有关物质的分离问题。专利cn107907607b所述c18柱运行40分钟的简单等比例洗脱方法，其主要针对两个氯羟吡啶结构的物质分离，与本专利技术方法所要解决的问题相去更远。
技术实现思路
1、为了解决上述问题，本专利技术公开了一种检测2-氯-3-吡啶胺及其有关物质的高效液相色谱法，采用极性较强的梯度混合流动相进行反相洗脱分离，采用具有较大空间位阻效应的侧链基团覆盖的硅氧烷填料作为固定相，以及采用本专利技术所公开的配套色谱分离体系参数，可以一次性解决2-氯-3-吡啶胺的制备过程中的杂质和含量分析，运行时间短，效率优势明显，经济实用，尤其适合于工业化连续反应生产过程中的快速质量控制和信息即时反馈。
2、本专利技术的技术方案为：一种检测2-氯-3-吡啶胺及其有关物质的高效液相色谱法，包括下列步骤：
3、步骤1：配制空白溶液，用吸管吸取1ml稀释剂溶液，装到液相进样小瓶中，密封，待用；
4、步骤2：配制对照品溶液，分别精密称取12种有关物质a-l对照品50.0mg，置于洁净的50ml容量瓶中，然后用稀释剂稀释定容至刻线，即溶液浓度为1mg/ml，将准确量取上述溶液1ml置于容量瓶中，用稀释剂定容至刻线，即得到储备液；
5、步骤3：配制供试品溶液，精密称取待测样品150.0mg，置于100ml容量瓶中，用稀释剂溶解并定容至刻线，振荡摇匀，即可；
6、步骤4：样品检测，将步骤1-步骤3得到的溶液在液相条件进行检测，并记录色谱图，液相条件流动相由a相和b相组成，并在其中加入缓冲盐体系。
7、优选地，步骤2中杂质对照品的浓度为1ug/ml、10ug/ml、50ug/ml，所述a-l对照品杂质如下：
8、
9、优选地，稀释剂为800-950:200-50的有机溶剂和水的混合溶剂，其中有机溶剂为乙腈或甲醇。
10、优选地，步骤4中的液相色谱条件为：色谱柱类型为反相亲水色谱柱，流动相由a相和b相组成，其中a相为ph2.5-4.5的5-50mmol/l的缓冲盐磷酸水溶液，b相是的三氟酸水溶液和乙腈的混合溶液，流动相为等度洗脱或梯度洗脱的任一种。
11、通过采用上述技术方案，采用极性较强的梯度混合流动相进行反相洗脱分离，三氟乙酸水溶液和乙腈进行缓冲，由于三氟酸是具有较高强度的离子酸，一定程度增强了整个体系的离子强度，抑制了过程的解离，同时该三氟乙酸水溶液和乙腈缓冲体系可以辅助系统溶解a相中盐，减少有机相的比例，防止盐的析出对色谱柱的寿命带来影响和堵塞整个液相系统，带来不必要的损失，两相缓冲溶液根据程序梯度即时混合，能增强系统的稳定性，使分析的相关物质创造良好的环境，同时降低了系统盐析的分析，增强了系统抑制解离的能力，进而巧妙地达到分析效果的准确，避免了提前将两相预制固定比例混合的缓冲体系，其缺陷基线不稳定，并且多种有关物质的分离度变差，分离效果不佳，使得该方法梯度洗脱之后的基线尽量平稳，在不同的洗脱梯度时，能巧妙适应相应的出峰组分特性，增强有关物质色谱峰的响应、较佳的分离效果，避免各组分出峰前置或拖尾，使得有关物质结果计算的不准确性。
12、优选地，a相和b相的体积比为80-30：20-70，紫外检测器的检测波长为220nm-280nm，流动相的流速为0.8ml/min-1.3ml/min，色谱柱的柱温为20℃-40℃，进样体积为1ul-20ul。
13、优选地，a相为15.0mmol/l磷酸二氢钠，然后用85％磷酸即色谱级调节ph3.1；b相的为三氟酸水溶液的浓度为0.01％，所述0.01％三氟酸水溶液：乙腈＝100:900。
14、通过采用上述技术方案，三氟乙酸水溶液和乙腈进行缓冲，由于三氟酸是具有较高强度的离子酸，一定程度增强了整个体系的离子强度，抑制了过程的解离，同时该三氟乙酸水溶液和乙腈缓冲体系可以辅助系统溶解a相中盐，减少有机相的比例，防止盐的析出对色谱柱的寿命带来影响和堵塞整个液相系统，带来不必要的损失，两相缓冲溶液根据程序梯度即时混合，能增强系统本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种检测2-氯-3-吡啶胺及其有关物质的高效液相色谱法，其特征在于，包括下列步骤：
2.根据权利要求1所述的一种检测2-氯-3-吡啶胺及其有关物质的高效液相色谱法，其特征在于：所述步骤2中杂质对照品的浓度为1ug/ml、10ug/ml、50ug/ml，所述a-l对照品杂质如下：
3.根据权利要求1所述的一种检测2-氯-3-吡啶胺及其有关物质的高效液相色谱法，其特征在于：所述稀释剂为800-950:200-50的有机溶剂和水的混合溶剂，其中有机溶剂为乙腈或甲醇。
4.根据权利要求1所述的一种检测2-氯-3-吡啶胺及其有关物质的高效液相色谱法，其特征在于：所述步骤4中的液相色谱条件为：色谱柱类型为反相亲水色谱柱，流动相由A相和B相组成，其中A相为PH2.5-4.5的5-50mmol/L的缓冲盐磷酸水溶液，B相是的三氟酸水溶液和乙腈的混合溶液，流动相为等度洗脱或梯度洗脱的任一种。
5.根据权利要求4所述的一种检测2-氯-3-吡啶胺及其有关物质的高效液相色谱法，其特征在于：所述A相和B相的体积比为80-30：20-70，紫外检测器的检测
6.根据权利要求4所述的一种检测2-氯-3-吡啶胺及其有关物质的高效液相色谱法，其特征在于：所述A相为15.0mmoL/L磷酸二氢钠，然后用85％磷酸即色谱级调节PH3.1；所述B相的为三氟酸水溶液的浓度为0.01％，所述0.01％三氟酸水溶液：乙腈＝100:900。
7.根据权利要求4所述的一种检测2-氯-3-吡啶胺及其有关物质的高效液相色谱法，其特征在于：所述步骤4中的色谱条件：柱温：25.0℃；流速：0.9ml/min；进样体积：5ul；检测波长：260nm；A相和B相的梯度洗脱程序如下：
8.根据权利要求1所述的一种检测2-氯-3-吡啶胺及其有关物质的高效液相色谱法，其特征在于：所述色谱柱为ZORBAX SB-Aq，4.6*150mm*3.5μm。
...【技术特征摘要】
1.一种检测2-氯-3-吡啶胺及其有关物质的高效液相色谱法，其特征在于，包括下列步骤：
2.根据权利要求1所述的一种检测2-氯-3-吡啶胺及其有关物质的高效液相色谱法，其特征在于：所述步骤2中杂质对照品的浓度为1ug/ml、10ug/ml、50ug/ml，所述a-l对照品杂质如下：
3.根据权利要求1所述的一种检测2-氯-3-吡啶胺及其有关物质的高效液相色谱法，其特征在于：所述稀释剂为800-950:200-50的有机溶剂和水的混合溶剂，其中有机溶剂为乙腈或甲醇。
4.根据权利要求1所述的一种检测2-氯-3-吡啶胺及其有关物质的高效液相色谱法，其特征在于：所述步骤4中的液相色谱条件为：色谱柱类型为反相亲水色谱柱，流动相由a相和b相组成，其中a相为ph2.5-4.5的5-50mmol/l的缓冲盐磷酸水溶液，b相是的三氟酸水溶液和乙腈的混合溶液，流动相为等度洗脱或梯度洗脱的任一种。
5.根据权利要求4所述的一种检测2-氯-3-吡啶胺及其有关物质的高效液相色谱法，其...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈军，佘浩，杨旭，陈海华，黄冬梅，王寅雨，李海霞，王凡非，陈小飞，隋龙，
申请(专利权)人：南通雅本化学有限公司，
类型：发明
国别省市：
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