本发明专利技术属于微生物技术领域，涉及一种地衣芽孢杆菌活性代谢产物的制备方法，所述活性代谢产物用于调控和/或抑制醋酸乳杆菌属的所有菌、面包乳杆菌、耐酸乳杆菌中的任意一种或者多种菌的生长和/或代谢，所使用的发酵培养基是以小麦为主要原料配制得到；所述制备方法包括：在发酵培养开始后的第14‑20h中的任意时刻或/当所述发酵培养基中的残糖含量低于8‑11g/L时，进行补料。通过本发明专利技术所提供的方法制备得到的地衣芽孢杆菌发酵对金山醋酸乳杆菌具有显著较好的抑制力。且本发明专利技术还提供了一种干粉制剂的制备方法，基于所述方法对干粉制剂进行制备，解决了含糖发酵液带来的粘壁现象，也明显降低了地衣芽孢杆菌MX8干粉制剂干燥制备过程的抑制力损失。
1、金山醋酸乳杆菌(acetilactobacillusjinshanensis)属于乳杆菌科(lactobacillaceae)醋酸乳杆菌属(acetilactobacillus)，是首先从传统食醋发酵醋醅中分离获得的。由于乳杆菌属(lactobacillus)包含超过250个种且它们在表型、生态和基因型水平上呈现多样化，科研人员应用全基因组分析来分析每一个乳酸杆菌物种，将乳酸杆菌属拓展为包含23个新属的25个属，而醋酸乳杆菌属由于系统发育分析结果表明其与乳杆菌属微生物存在显著差异，形成了一个单独谱系而作为新属被划分，金山醋酸乳杆菌是其模式种与唯一种。[1-4]
2、由于金山醋酸乳杆菌的生长条件为20℃-40℃(最适35℃)，ph3.0-5.0(最适4.0)，0％-5％氯化钠浓度(最适0％)，有氧/厌氧/微需氧环境，与我国白酒传统酿造过程酸性厌氧的多菌种群体微生物发酵体系吻合，因此其广泛分布于我国传统白酒固态法酿造过程中并占有较高丰度。目前已知金山醋酸乳杆菌在芝麻香型白酒酿造过程中平均相对丰度占比超过10％；在浓香型白酒的30年窖池发酵70天的酒醅微生物中相对丰度占比达38％，为浓香型白酒发酵后期的主要属。根据需求调控多菌种群体微生物发酵体系中的关键微生物对发酵过程控制十分重要，在专利技术人所进行的前期工作中，发现常见的抑菌物质(如乳酸链球菌肽)对金山醋酸乳杆菌的调控能力不佳。
>1、本专利技术旨在提供一种大曲内源性地衣芽孢杆菌活性代谢产物的制备方法，具体是开发液态发酵与真空喷雾干燥技术制备该菌株的液体以及干粉抑菌剂的方法。通过本专利技术所提供的制备方法制备得到的地衣芽孢杆菌活性代谢产物可以特异性对金山醋酸乳杆菌的生长进行合理调控，且本专利技术通过优化发酵条件与干燥制粉工艺也进一步提高了该干粉调控剂的制备效率，使其方便大规模制备及保存。2、中国专利文献cn 105713929 a公开了一种利用nisin发酵废菌体抑制乙醇发酵过程中乳酸菌生长的方法，文献中利用nisin废菌体加入到玉米乙醇发酵中，减少乳酸菌杂菌污染。在所述技术方案中，抗菌物质为nisin(乳酸链球菌肽之一)，添加形式为乳酸链球菌废菌体，抑菌目标为乳酸杆菌(属)。但是本申请专利技术人经研究发现，nisin(乳酸链球菌肽)对醋酸乳杆菌属的金山醋酸乳杆菌的抑制效力仅约为16％，对其他乳酸杆菌属的如面包乳杆菌与耐酸乳杆菌的抑制效力则可达46％与60％。即，常见的对乳酸杆菌属的乳酸杆菌具有较好抑菌能力的抑菌物质(如乳酸链球菌肽)却对金山醋酸乳杆菌等的抑菌能力却不佳。
3、一方面，本专利技术提供了一种地衣芽孢杆菌活性代谢产物，所述地衣芽孢杆菌活性代谢产物用于调控和/或抑制醋酸乳杆菌属的所有菌、面包乳杆菌、耐酸乳杆菌中的任意一种或者多种菌的生长和/或代谢。
4、在一些实施方案中，所述地衣芽孢杆菌活性代谢产物用于调控和/或抑制醋酸乳杆菌属的任意一种或者多种菌的生长和/或代谢；优选地，所述地衣芽孢杆菌活性代谢产物用于调控和/或抑制金山醋酸乳杆菌的生长和/或代谢。
5、另一方面，本专利技术还提供了一种地衣芽孢杆菌活性代谢产物的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：
6、(1)配制发酵培养基；
7、(2)将地衣芽孢杆菌种子液接种至所述发酵培养基中，进行发酵培养，得到发酵培养液；
8、(3)将所述发酵培养液进行离心，取上清液过滤，得到上清液，即为所述代谢产物；
9、其中，所述发酵培养基是以小麦为主要原料配制得到；所述发酵培养基包括如下组分：80-120g/l小麦粉、5-15g/l淀粉酶、5-15g/l糖化酶，余量为去离子水；
10、所述发酵培养包括：在发酵培养开始后的第14-20h中的任意时刻或/当所述发酵培养基中的残糖含量低于8-11g/l时，向所述发酵培养基中进行补料；优选地，所述发酵培养包括：在发酵培养开始后的第14-20h中的任意时刻或/当所述发酵培养基中的残糖含量低于10g/l时，向所述发酵培养基中进行补料。
11、在一些实施方案中，所述发酵培养基的初始糖度为2°bx-6°bx；优选地，所述发酵培养基的初始糖度为3°bx-6°bx；优选地，所述发酵培养基的初始糖度为4°bx-6°bx。
12、在一些实施方案中，所述发酵培养基的ph为5-9；优选地，所述发酵培养基的ph为6-8。
13、在一些实施方案中，所述发酵培养基包括如下组分：90-110g/l小麦粉、8-12g/l淀粉酶、8-12g/l糖化酶，余量去离子水。
14、在一些实施方案中，所述发酵培养基通过如下步骤进行制备：
15、1)将所述小麦粉、淀粉酶按比例加入去离子水中，进行糊化；该步骤中，所述淀粉酶的添加量为淀粉酶总用量的1/3-3/5；
16、2)冷却后，向糊化后的培养基中加入剩余量的淀粉酶、以及糖化酶，进行液化和糖化；
17、3)对糖化后的培养基的糖度进行调节，灭菌后，进行ph调节，得到所述发酵培养基。
18、在一些实施方案中，所述糊化条件为：于100-110℃糊化0.8-1.2h。
19、在一些实施方案中，所述冷却为：冷却至35-45℃。
20、在一些实施方案中，所述液化和糖化的条件为：于35-40℃进行液化和糖化10-15h。
21、在一些实施方案中，所述对糖化后的培养基的糖度进行调节包括：向所述培养基中加水进行稀释调节。
22、在一些实施方案中，所述对灭菌后的培养基进行ph调节包括：利用碳酸钠对所述培养基的ph进行调节。
23、在一些实施方案中，所述灭菌包括：100-120℃高压下蒸汽灭菌15-25min。
24、在一些实施方案中，所述发酵培养基通过如下步骤进行制备：将所述小麦粉与淀粉酶、糖化酶，溶解于去离子水中，于35-40℃条件下，静置3-5h，110-120℃高压下蒸汽灭菌15-30min；优选地，所述发酵培养基通过如下步骤进行制备：将所述小麦粉与淀粉酶、糖化酶，溶解于去离子水中，于36-39℃条件下，静置3-5h，113-118℃高压下蒸汽灭菌18-22min。
25、在一些实施方案中，所述淀粉酶的酶活力为45,000-55000u/g；所述糖化酶的酶活力为45,000-55000u/g；优选地，所述淀粉酶的酶活力为48,000-51000u/g；所述糖化酶的酶活力为48,000-51000u/g。
26、在一些实施方案中，所述步骤(3)中，所述离心条件为：8000-12000r/min，离心5-15min。
27、在一些实施方案中，所述过滤为：通过0.22μm微孔滤膜进行过滤。
28、在一些实施方案中，所述种子液的接种量为1-4％；优选地，所述种子液的接种量为2.5-3.5％。
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【技术保护点】
1.一种地衣芽孢杆菌活性代谢产物的制备方法，其特征在于，所述地衣芽孢杆菌活性代谢产物用于调控和/或抑制醋酸乳杆菌属的所有菌、面包乳杆菌、耐酸乳杆菌中的任意一种或者多种菌的生长和/或代谢，所述制备方法包括如下步骤：
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述发酵培养基的初始糖度为2°Bx-6°Bx；优选地，所述发酵培养基的pH为5-9；
3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中，所述离心条件为：8000-12000r/min，离心5-15min；优选地，所述过滤为：通过0.22μm微孔滤膜进行过滤；
4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述补料的方式包括：向所述发酵培养基中，流加未稀释的所述发酵培养基，将发酵体系的糖度调整为1.5-3°Bx或/向所述发酵培养基中，流加未稀释的所述发酵培养基，将发酵体系的糖含量调整为18-25g/L；
5.一种干粉制剂的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：
6.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述菌株发酵液为：将所述菌株进行发酵培养得到的发酵培养液经离心处理后的上清液；
7.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述发酵液为通过如权利要求1-6任一所述的制备方法制备得到的活性代谢产物。
8.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述步骤二中，所述真空喷雾干燥的条件为：进风温度为65-75℃，出风温度为55-65℃，蠕动泵速度为10-20mL/min，真空度为-0.01--0.05MPa；
9.一种通过如权利要求1-4任一所述的制备方法制备得到的地衣芽孢杆菌活性代谢产物和/或一种通过如权利要求5-8任一所述的制备方法制备得到的干粉制剂。
10.一种如权利要求9所述的地衣芽孢杆菌活性代谢产物和/或所述的干粉制剂在酿酒领域的应用。
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【技术特征摘要】
1.一种地衣芽孢杆菌活性代谢产物的制备方法，其特征在于，所述地衣芽孢杆菌活性代谢产物用于调控和/或抑制醋酸乳杆菌属的所有菌、面包乳杆菌、耐酸乳杆菌中的任意一种或者多种菌的生长和/或代谢，所述制备方法包括如下步骤：
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述发酵培养基的初始糖度为2°bx-6°bx；优选地，所述发酵培养基的ph为5-9；
3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中，所述离心条件为：8000-12000r/min，离心5-15min；优选地，所述过滤为：通过0.22μm微孔滤膜进行过滤；
4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述补料的方式包括：向所述发酵培养基中，流加未稀释的所述发酵培养基，将发酵体系的糖度调整为1.5-3°bx或/向所述发酵培养基中，流加未稀释的所述发酵培养基，将发酵体系的糖含量调整为18-25g/l；
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【专利技术属性】
技术研发人员：杨帆，周冠宇，杨冲，陈良强，卢建军，吕锡斌，佘梦林，艾梅，胡阳，杜海，
申请(专利权)人：贵州茅台酒股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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