【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于食品检测领域，具体涉及一种乳制品及植物蛋白饮料中γ-氨基丁酸的测定方法。
技术介绍
1、γ-氨基丁酸是一种化合物，化学式是c4h9no2，别名4-氨基丁酸(γ-aminobutyricacid，简称gaba)，是一种氨基酸，在脊椎动物、植物和微生物中广泛存在。γ-氨基丁酸(gamma-aminobutyric acid,gaba)是一种重要的中枢神经系统抑制性神经递质，其拥有良好的水溶性与热稳定性。现已证实，作为小分子量非蛋白类氨基酸的gaba具备食用安全性，并可用于饮料等食品的生产。研究表明，摄入一定量的gaba具备改善机体睡眠质量、降血压等生理功效，使得各大食品生产厂商为了提高乳制品及植物蛋白饮料的销量，都会向其中添加γ-氨基丁酸。因此，如何准确检测乳制品及植物蛋白饮料中中γ-氨基丁酸的实际量成为了关键问题。
2、目前，针对乳制品及植物蛋白饮料中中γ-氨基丁酸含量的检测已经开发出了很多方法，比如高效液相色谱法(hplc)、高效液相色谱-串联质谱法(hplc-ms/ms)、电喷雾离子阱质谱法(esi-ms)、酶联免疫吸附法(elisa)。其中hplc具有较高的准确度，可以准确地测量γ-氨基丁酸的含量；同时hplc可以实现较宽的线性范围，对于样品的测量范围较广且重复性方面表现较好，可以保证实验结果的稳定性和一致性。另外，与hplc-ms/ms和esi-ms相比，hplc的操作相对简单，对实验人员的要求较低。除了检测方法的实用性外，与lc-ms/ms和esi-ms相比，hplc的仪器设备价格相对较低，更易
3、中国专利cn202110376268.5(公开日:2022年10月18日)公开了一种植物基食品、乳制品中γ-氨基丁酸的检测方法，该法使用甲醇做提取剂、硼酸做缓冲溶液。由于该专利方法使用甲醇提取，因而容易受基质蛋白或糖的干扰，影响最终的检测结果，同时该专利采用双流动相的梯度洗脱，容易出现因设备问题而导致流动相比例异常，影响洗脱的情况。
4、此外，吴蓉，周玮等人也对固体饮料中的γ氨基丁酸的检测展开了研究并发表了研究成果([1]吴蓉,周玮,何慧园.高效液相色谱法测定固体饮料中γ-氨基丁酸含量[j].食品工程,2016(04):59-63.)，该研究提供了一种采用高效液相色谱-二极管阵列法测量固体饮料中的γ-氨基丁酸。该法具有基线稳定、灵敏度高、线性范围广、回收率高及重现性好等优点，然而将该法用于测量乳制品及植物蛋白饮料中γ-氨基丁酸时还存在一些缺陷。比如该文献方法衍生时间2min，对于乳制品基质相对稳定的胶体溶液，衍生时间短会导致衍生不完全，影响检测结果准确性。同时文献方法衍生后直接上机，所以在上机过程还是持续衍生，因上机顺序不同导致不同的溶液衍生效果会有所不同，容易导致检测结果异常。该方法衍生反应在酸性条件下进行，但是依据丹磺酰氯衍生反应条件标记末端氨基应该为碱性条件，酸性条件下会导致整体响应值偏低。更为关键的是，上述两种检测γ-氨基丁酸的方法在前处理的步骤均没有沉淀样品中基质蛋白的操作，因而基质蛋白会影响γ-氨基丁酸的检测，同样会导致结果发生异常。因此，本领域亟需一种能够准确检测乳品及饮料中γ-氨基丁酸含量且操作简单的方法。
技术实现思路
1、鉴于上述现有技术的不足，本专利技术提供了一种乳制品及植物蛋白饮料中γ-氨基丁酸的测定方法，能够排除乳品基质中蛋白质的干扰，准确检测乳品及饮料中γ-氨基丁酸含量。
2、为达到此专利技术目的，本专利技术采用以下技术方案：
3、本专利技术提供一种乳制品及植物蛋白饮料中γ-氨基丁酸的测定方法，包括以下步骤:
4、将待测样品与水混合，得到待测样品溶液，调节所述待测样品溶液ph至4.5～4.8，沉淀样品中基质蛋白，分离得到待测样品提取液；
5、将所述待测样品提取液、碳酸钠溶液、丹磺酰氯溶液混合，得到混合液，将所述混合液避光衍生，待衍生结束后过滤得到滤液，使用hplc-fld测得待测样品中γ-氨基丁酸初始浓度；
6、绘制γ-氨基丁酸工作曲线，根据工作曲线得到待测样品中γ-氨基丁酸的实际浓度，最终得到待测样品中γ-氨基丁酸的实际含量。
7、可选地，所述待测样品与水的质量体积比为1g:(20～40)ml。
8、可选地，使用氢氧化钠溶液和乙酸调节所述待测样品溶液ph。
9、可选地，所述待测样品提取液、碳酸钠溶液、丹磺酰氯溶液的体积比为(0.8～1.2):(0.8～1.2):(0.8～1.2)。
10、可选地，所述避光衍生的时间为90～150min。
11、可选地，避光衍生时间达到后向衍生体系中加入盐酸甲胺溶液终止衍生。
12、可选地，所述过滤使用0.45μm滤膜过滤。
13、可选地，所述上机测试使用高效液相色谱-荧光检测器，即hplc-fld。
14、可选地，所述hplc-fld的参数如下：
15、色谱柱：c18色谱柱，5μm，2.1×200mm；
16、柱温：30℃
17、流动相：乙腈的乙酸钠溶液，ph为4.3；
18、流速：0.7ml/min；
19、进样量：20μl；
20、检测波长：激发波长330nm，发射波长530nm。
21、可选地，绘制工作曲线的步骤包括：
22、分别吸取0.02mg/ml的γ-氨基丁酸溶液10μl、20μl、50μl、100μl、200μl、500μl，再向其中分别加入990μl、980μl、950μl、900μl、800μl、500μl水，配制成标准系列曲线浓度，加入1ml碳酸钠溶液、1ml丹磺酰氯溶液，充分混匀，室温避光衍生2h，加入0.1ml盐酸甲胺溶液充分混匀终止衍生，0.45μm滤膜过滤后使用hplc-fld进行测试，得到各浓度坐标点，根据坐标点绘制工作曲线。
23、可选地，所述待测样品中γ-氨基丁酸的实际含量计算方法包括：
24、以γ-氨基丁酸标准峰面积为纵坐标，以标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线，得到标准曲线回归方程，计算公式为：
25、
26、式中：
27、x—待测样品中γ-氨基丁酸含量(mg/100g)；
28、c—被测液中γ-氨基丁酸浓度(mg/l)；
29、m—取样量(g)；
30、v—定容体积(ml)；
31、f-稀释倍率。
32、有益效果：
33、本专利技术主要提供一种乳制品及植物蛋白饮料中γ-氨基丁酸的测定方法。该检测方法对比分析前处理的各个步骤，提供一种能排除基质干扰、再现性好的方法，对样品中γ-氨基丁酸的提取效果好、衍生反应更完全、响应值高、衍生结束的上机样品性质稳定、排除紫外检测的基质干扰，结果更接近理论值，操作方便，试剂和仪器廉价易得，方便推广本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种乳制品及植物蛋白饮料中γ-氨基丁酸的测定方法，其特征在于，包括以下步骤:
2.根据权利要求1所述的乳制品及植物蛋白饮料中γ-氨基丁酸的测定方法，其特征在于，所述待测样品与水的质量体积比为1g:(20～40)mL。
3.根据权利要求1所述的乳制品及植物蛋白饮料中γ-氨基丁酸的测定方法，其特征在于，使用氢氧化钠溶液和乙酸调节所述待测样品溶液pH。
4.根据权利要求1所述的乳制品及植物蛋白饮料中γ-氨基丁酸的测定方法，其特征在于，所述待测样品提取液、碳酸钠溶液、丹磺酰氯溶液的体积比为(0.8～1.2):(0.8～1.2):(0.8～1.2)。
5.根据权利要求1所述的乳制品及植物蛋白饮料中γ-氨基丁酸的测定方法，其特征在于，所述避光衍生的时间为90～150min。
6.根据权利要求5所述的乳制品及植物蛋白饮料中γ-氨基丁酸的测定方法，其特征在于，避光衍生时间达到后向衍生体系中加入盐酸甲胺溶液终止衍生。
7.根据权利要求1所述的乳制品及植物蛋白饮料中γ-氨基丁酸的测定方法，其特征在于，所述过滤使用0.45μm
8.根据权利要求1所述的乳制品及植物蛋白饮料中γ-氨基丁酸的测定方法，其特征在于，所述HPLC-FLD的参数如下：
9.根据权利要求1所述的乳制品及植物蛋白饮料中γ-氨基丁酸的测定方法，其特征在于，绘制工作曲线的步骤包括：
10.根据权利要求1所述的乳制品及植物蛋白饮料中γ-氨基丁酸的测定方法，其特征在于，所述待测样品中γ-氨基丁酸的实际含量计算方法包括：
...【技术特征摘要】
1.一种乳制品及植物蛋白饮料中γ-氨基丁酸的测定方法，其特征在于，包括以下步骤:
2.根据权利要求1所述的乳制品及植物蛋白饮料中γ-氨基丁酸的测定方法，其特征在于，所述待测样品与水的质量体积比为1g:(20～40)ml。
3.根据权利要求1所述的乳制品及植物蛋白饮料中γ-氨基丁酸的测定方法，其特征在于，使用氢氧化钠溶液和乙酸调节所述待测样品溶液ph。
4.根据权利要求1所述的乳制品及植物蛋白饮料中γ-氨基丁酸的测定方法，其特征在于，所述待测样品提取液、碳酸钠溶液、丹磺酰氯溶液的体积比为(0.8～1.2):(0.8～1.2):(0.8～1.2)。
5.根据权利要求1所述的乳制品及植物蛋白饮料中γ-氨基丁酸的测定方法，其特征在于，所述避光衍生的时间...
【专利技术属性】
技术研发人员：张雪，张影，王树奇，张婵，吉利利，张莉，郑丽宏，
申请(专利权)人：天津华测检测认证有限公司，
类型：发明
国别省市：
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