【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及分子生物学，更具体地说，它涉及一种浆果果实基因组dna高质量提取方法。
技术介绍
1、浆果与减轻或预防疾病有关，占人类饮食中消耗的水果的很大一部分。浆果也广泛用于加工和衍生产品，包括干果和罐头水果，酸奶，饮料，果酱和果冻，以及新鲜和冷冻水果。已经充分证明，浆果含有抗氧化和抗炎多酚，如花青素和酚酸，它们在衰老以及预防和治疗心血管疾病和癌症中起着重要作用。因此，浆果作为一种重要果实，经常会进行分子生物学、生物医学相关的研究，也就有着相当多提取基因组dna的需要。提取dna的产量、质量和提取时间，对实验的准确性和可靠性有着较大的影响。完整、高分子量基因组dna提取技术对于许多分子生物学应用至关重要，包括长pcr、限制性酶切、southern印迹分析和基因组文库构建。
2、目前植物提取一般采用通用的提取方法例如ctab法和sds法等。但是由于不同植物的材料组分各异，而植物其自身所含的多糖、蛋白质和酚类物质也各有不同，相同的物质浓度也会出现偏差，就使这些模式植物的dna提取方法对不同植物dna的提取并没有达到预期效果。相同的提取方法并不适合所有的植物，不同的植物最适合的提取方法也不同。传统的这些方法没有针对特定的提取样品，所以导致对浆果果实的提取效率不高。
3、大多数浆果如葡萄、草莓、猕猴桃等富含许多植物化学物质、纤维、维生素和矿物质，浆果果实中富含大量的多糖类和酚类化合物，并且在成熟时会有大量的水分。多糖是dna提取过程中的主要干扰物，多糖常与dna共沉淀，使其具有粘性；以这种形式，它们还会干扰生物
4、为了解决浆果果实多糖多酚污染、水分含量多等问题，本专利技术提供了一种浆果果实基因组dna高质量提取方法。
技术实现思路
1、针对现有技术存在的不足，本专利技术的目的在于提供一种浆果果实基因组dna高质量提取方法。
2、为实现上述目的，本专利技术提供了如下技术方案：一种浆果果实基因组dna高质量提取方法，所述浆果果实基因组dna高质量提取方法包括以下步骤：
3、s1：将15g新鲜或冷冻浆果果实样品置于研钵内，加入提前准备的20mgpvp10并进行研磨，研磨时间2—3min，研磨结束后收集至50ml离心管中备用；
4、s2：向离心管中加入20ml分离液，先震荡混匀1min，再冰上放置10min，最后放入4℃冷冻离心机中，8000rpm离心5min；
5、s3：吸去离心管中的上清液体，并向底部沉淀中加入56℃预热的裂解液16ml，再振荡混匀1min，56℃水浴锅孵育30min，孵育期间手摇震荡几次；
6、s4：向离心管加入除杂液a，并置于多管涡旋混匀仪震荡15min，再1200rpm离心10min；
7、s5：转移上清液到新的50ml离心管中，向上清液中加入5ul rnase酶震荡混匀，静置5min，加入等体积的除杂液b抽提，震荡混匀后，1200rpm离心10min，抽提后的上清液转入新的50ml离心管中，重复此步骤一次；
8、s6：向转入新50ml离心管中的上清液内加入0.8倍体积提前预冷的异丙醇，放置于-20℃15min，让dna沉淀析出；
9、s7：移去上清液，用漂洗液漂洗两次，离心后干燥5min；
10、s8：加入60ul洗脱液溶解，56℃水浴10min；
11、s9：溶解的dna-20℃保存。
12、本申请再进一步的技术方案：所述分离液包括2％—4％pvp、0.1m—0.5mtris-hcl、5％—10％peg8000和0.5％—3％巯基乙醇，ph为7—8。
13、本申请再进一步的技术方案：所述裂解液包括0.1m—0.5mtris-hcl、10—100mmedta、0.3m—1m氯化钠、2％—3％ctab和0.5％—3％巯基乙醇，ph为6—7。
14、本申请再进一步的技术方案：所述除杂液a包括5m醋酸钾、异丙醇和氯仿。
15、本申请再进一步的技术方案：所述rnase酶的浓度为10mg/ml。
16、本申请再进一步的技术方案：所述除杂液b包括24：1氯仿-异戊醇。
17、本申请再进一步的技术方案：所述漂洗液包括80％乙醇。
18、本申请再进一步的技术方案：所述洗脱液为无酶水和te缓冲液中的一种或多种。
19、与现有技术相比，本专利技术具备以下有益效果：
20、1、本专利技术通过冷冻葡萄果实，液氮结合pvp10研磨解决了葡萄等浆果在提取过程中的氧化问题，并通过测试发现pvp10优于pvp40，后者有可能与核酸一起沉淀，从而成为污染物；
21、2、本专利技术操作简单，能够有效处理富含多糖多酚、含水量高的葡萄等浆果果实；
22、3、本专利技术的dna提取方法重复性高、实验结果稳定、琼脂糖电泳条带清晰，为下游pcr等酶促反应奠定基础；
23、4、本专利技术对分离液、裂解液和漂洗液的组分进行了优化，分离液中加入pvp这种强还原剂可以避免dna链与多酚结合，去除酚类化合物，通过后续抽提获得高质量、高纯度dna；裂解液中测试ctab最佳浓度，除杂液测试了醋酸钾和乙酸钠等试剂，筛选醋酸钾、乙酸钠和氯仿最佳配比，结合酚氯仿抽提从而最大程度降低蛋白质污染、减少多糖和色素杂质，提高提取核酸总量、纯度。
24、上述说明仅是本专利技术技术方案的概述，为了能够更清楚了解本专利技术的技术手段，并可依照说明书的内容予以实施，以下以本专利技术的较佳实施例并配合附图详细说明如后。本专利技术的具体实施方式由以下实施例及其附图详细给出。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种浆果果实基因组DNA高质量提取方法，其特征在于，所述浆果果实基因组DNA高质量提取方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种浆果果实基因组DNA高质量提取方法，其特征在于：所述分离液包括2％—4％PVP、0.1M—0.5MTris-HCl、5％—10％PEG8000和0.5％—3％巯基乙醇，pH为7—8。
3.根据权利要求1所述的一种浆果果实基因组DNA高质量提取方法，其特征在于：所述裂解液包括0.1M—0.5MTris-HCl、10—100mMEDTA、0.3M—1M氯化钠、2％—3％CTAB和0.5％—3％巯基乙醇，pH为6—7。
4.根据权利要求1所述的一种浆果果实基因组DNA高质量提取方法，其特征在于：所述除杂液A包括5M醋酸钾、异丙醇和氯仿。
5.根据权利要求1所述的一种浆果果实基因组DNA高质量提取方法，其特征在于：所述Rnase酶的浓度为10mg/ml。
6.根据权利要求1所述的一种浆果果实基因组DNA高质量提取方法，其特征在于：所述除杂液B包括24：1氯仿-异戊醇。
7.根据权利
8.根据权利要求1所述的一种浆果果实基因组DNA高质量提取方法，其特征在于：所述洗脱液为无酶水和TE缓冲液中的一种或多种。
...【技术特征摘要】
1.一种浆果果实基因组dna高质量提取方法，其特征在于，所述浆果果实基因组dna高质量提取方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种浆果果实基因组dna高质量提取方法，其特征在于：所述分离液包括2％—4％pvp、0.1m—0.5mtris-hcl、5％—10％peg8000和0.5％—3％巯基乙醇，ph为7—8。
3.根据权利要求1所述的一种浆果果实基因组dna高质量提取方法，其特征在于：所述裂解液包括0.1m—0.5mtris-hcl、10—100mmedta、0.3m—1m氯化钠、2％—3％ctab和0.5％—3％巯基乙醇，ph为6—7。
4.根据权利要求1...
【专利技术属性】
技术研发人员：张晴晴，刘浩，孙子奎，
申请(专利权)人：南京派森诺基因科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。