【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及了病毒检测，尤其涉及一种用于市政污水中浓缩富集猴痘病毒dna的提取方法。
技术介绍
1、污水流行病学(wastewater-based epidemiology,wbe)在全球范围内已经成为重要的分析技术被广泛运用在药物滥用、疫病的监测之中。理论的假设基于所携带病毒的患者通过尿液和粪便将少量病毒或者核酸排出体外，进入市政污水系统，从而进入区域污水处理厂。通过采集该地区废水作为分析样本，根据检出病毒浓度、污水处理厂进水流量和服务人口数量等参数评估该病毒的影响程度以及该区域人类健康水平。污水流行病学作为多学科交叉所产生的科学技术，优势在于监测大规模人口社区、城市的同时，提供丰富的空间分布、病毒的扩散程度以及健康暴露水平等深层信息，有效实时疫病的监控和预警的作用。
2、猴痘是一种包膜双链dna病毒，属于人畜共患病，临床表现类似天花，但病情较轻。这种疾病由猴痘病毒造成。这种病毒可以通过直接密切接触由动物传染给人，也可以在人与人之间传播，其传染途径主要包括血液和体液。猴痘病毒共有中非和西非两个不同的遗传进化分支。相比于病死率约为3.6％的西非分支，中非分支被认为更具传染性，且病死率可达10.6％。继1980年消灭天花后，猴痘已成为公共卫生中最受关注的正痘病毒。因此，基于污水流行病学检测猴痘病毒能有效地摆脱空间、资源的限制，是实现实时监测和预警防控的一种新手段。
3、但由于生活用水的稀释作用，进入处理厂的污水病毒浓度被降低，常规的采样检测方式无法痕量检出可能存在的病毒，为此我们开发了一种用于市政污水中浓
技术实现思路
1、本专利技术的目的是为了克服现有技术的不足，提供一种用于市政污水中浓缩富集猴痘病毒dna的提取方法，能够对污水样品进行富集浓缩，能够降低对降低市政污水中猴痘病毒dna的检出极限，进而能够提高检测的敏感性和可靠性。
2、本专利技术涉及一种用于市政污水中浓缩富集猴痘病毒dna的提取方法，包括以下步骤：
3、灭活处理：对采集到的污水样本进行病毒灭活处理，获得灭活后的污水样本；
4、过滤处理：对灭活后的污水样本进行过滤，获得过滤后的污水样本；
5、缓冲液处理：称量10g氯化钠并将其置入100ml的无菌hdpe样品瓶中，并在无菌hdpe样品瓶中加入500μlte缓冲液，所述te缓冲液包括100mm edta，1m tris，ph为7.2；
6、浓缩处理：取45ml过滤后的污水样品，直接倒入无菌hdpe样品瓶中，待氯化钠溶解后，振荡混匀1h，振荡采用恒温气浴振荡器，处理温度为4℃，振荡速度为100r/min，取出样品瓶缓慢加入25ml无水乙醇，静置10min获得污水样品浓缩液。
7、进一步地，还包括在灭活之前，在-20℃的环境下，对污水样本进行保存和运输。
8、进一步地，还包括准备真空抽滤装置，将核酸硅胶吸附柱连接到抽真空装置上，并安装增量管，向增量管中倒入浓缩后的污水样本，使得浓缩后的污水样本在负压下通过核酸硅胶吸附柱。
9、进一步地，还包括取下硅胶核酸硅胶吸附柱，并将硅胶柱放入到核酸提取试剂盒收集管中，依次进行去蛋白漂洗和核酸硅胶吸附柱淋洗，最后用50μl洗脱液进行洗脱，得到用于后续pcr扩增的猴痘病毒dna。
10、进一步地，在过滤处理步骤中，包括采用1μm的膜过滤器对污水样本进行过滤处理。
11、进一步地，洗脱液放置在离心机中进行洗脱，离心机的转速为12000rpm，内腔时间为4℃，洗脱的离心时间为1min。
12、本专利技术的有益之处在于：通过对市镇污水进行灭活处理、过滤处理、缓冲液处理和浓缩处理，能够凸显出市政污水中的猴痘病毒的dna，对市政污水的检出限可达到10copy/ml，敏感度高，进而改善了常规浓缩富集法在大体积污水检测中的不足，为监测和防控猴痘病毒的出现与传播提供了可行的技术新手段和方法指导。
13、为让本专利技术的上述和其他目的、特征和优点能更明显易懂，下文特举较佳实施例，并配合所附图式，作详细说明如下。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种用于市政污水中浓缩富集猴痘病毒DNA的提取方法，其特征在于：包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的用于市政污水中浓缩富集猴痘病毒DNA的提取方法，其特征在于：还包括在灭活之前，在-20℃的环境下，对污水样本进行保存和运输。
3.根据权利要求1所述的用于市政污水中浓缩富集猴痘病毒DNA的提取方法，其特征在于：还包括准备真空抽滤装置，将核酸硅胶吸附柱连接到抽真空装置上，并安装增量管，向增量管中倒入浓缩后的污水样本，使得浓缩后的污水样本在负压下通过核酸硅胶吸附柱。
4.根据权利要求3所述的用于市政污水中浓缩富集猴痘病毒DNA的提取方法，其特征在于：还包括取下硅胶核酸硅胶吸附柱，并将硅胶柱放入到核酸提取试剂盒收集管中，依次进行去蛋白漂洗和核酸硅胶吸附柱淋洗，最后用50μL洗脱液进行洗脱，得到用于后续PCR扩增的猴痘病毒DNA。
5.根据权利要求1所述的用于市政污水中浓缩富集猴痘病毒DNA的提取方法，其特征在于：在过滤处理步骤中，包括采用1μm的膜过滤器对污水样本进行过滤处理。
6.根据权利要求4所述的用于市政污水中浓缩
...【技术特征摘要】
1.一种用于市政污水中浓缩富集猴痘病毒dna的提取方法，其特征在于：包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的用于市政污水中浓缩富集猴痘病毒dna的提取方法，其特征在于：还包括在灭活之前，在-20℃的环境下，对污水样本进行保存和运输。
3.根据权利要求1所述的用于市政污水中浓缩富集猴痘病毒dna的提取方法，其特征在于：还包括准备真空抽滤装置，将核酸硅胶吸附柱连接到抽真空装置上，并安装增量管，向增量管中倒入浓缩后的污水样本，使得浓缩后的污水样本在负压下通过核酸硅胶吸附柱。
4.根据权利要求3所述的用于市政污水中浓缩富集猴痘病毒dna...
【专利技术属性】
技术研发人员：周波，陈一波，宋明芳，胡志远，徐嘉逸，张巍，
申请(专利权)人：苏州先进分子诊断技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。