【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于细胞生物学，具体地，涉及一种干细胞存贮液的制备和使用方法。
技术介绍
1、近年来，随着干细胞治疗、免疫细胞治疗和基因编辑等技术手段和临床医疗研究的不断发展，细胞治疗作为药物研究成为重点发展的方向。
2、从细胞制备成可应用于临床的细胞制剂是细胞治疗的关键之一。其中，细胞作为细胞制剂的主要有效成分，如何维持细胞的有效性以及如何保证产品的临床安全性是目前细胞产品临床转化的主要难点。细胞制剂以细胞悬液为主要形式，除细胞外的佐剂溶液即细胞存贮液，承担起维持细胞活性、保障细胞的高活率、总细胞密度、活细胞密度、低结团率的任务。因此，探索出一种干细胞存贮液以解决上述问题是细胞治疗产业的重点研究内容。
3、由于人血白蛋白具有维持血液胶体渗透压和ph值、细胞内外物质转运、抗氧化、结合细胞表面fc受体、调节体外生理环境等功能，从而对细胞有保护作用。现有技术通常以含人血白蛋白的生理盐水作为细胞保护液，由于人血白蛋白的生物学性质，导致运输过程中细胞极易结团，静脉输注存在极大的安全隐患。细胞结团率表示的是细胞的凝集程度，是评价细胞治疗产品安全性的一个重要指标。当细胞结团率高时，注入动物体内，常引起肺栓塞、血管栓塞等致命性反应，因此需要对结团率进行严格把控。因此，减少白蛋白的使用，同时探索一系列组合物用以保护细胞的尝试是临床细胞制剂的重要需求。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种干细胞存贮液的制备和使用方法，减少了人血清白蛋白的用量，增加了复方氨基酸、丙谷二肽以
2、本专利技术要解决的技术问题：现有技术通常以含人血白蛋白的生理盐水作为干细胞保护液，由于人血白蛋白的生物学性质，导致运输过程中干细胞极易结团，静脉输注存在极大的安全隐患。
3、本专利技术的目的可以通过以下技术方案实现：
4、一种干细胞存贮液，每100份干细胞存贮液包括以下重量份数的组分：复方氨基酸注射液5-10份、丙谷二肽注射液0.05-0.075份、维生素c注射液0.05-0.075份、人血清白蛋白溶液5份、右旋糖酐40葡萄糖注射液1-2.5份、复方电解质注射液77-89份、碳酸氢钠注射液适量。
5、一种干细胞存贮液的制备方法，100ml干细胞存贮液的制备方法包括以下步骤：在无菌环境中，依次将人血白蛋白溶液5ml，丙谷二肽注射液0.05-0.075ml，右旋糖酐40葡萄糖注射液1-2.5ml，复方氨基酸注射液（14aa-v-sf）5-10ml，维生素c注射液0.05-0.075ml加入75ml复方电解质注射液中，碳酸氢钠注射液调ph至7.0-7.4，使用复方电解质注射液补足100ml；过滤后密封于无菌容器，2-8℃冷藏保存。
6、进一步地，干细胞存贮液的渗透压为278-343mosmol/kg。
7、进一步地，复方氨基酸注射液为不含亚硫酸盐类抗氧化剂的平衡型十四复方氨基酸注射液14aa-sf。
8、进一步地，不含亚硫酸盐类抗氧化剂的平衡型十四复方氨基酸注射液14aa-sf的浓度为4.2g/50ml。
9、本专利技术提供的复方氨基酸注射液不含亚硫酸盐类抗氧化剂，不易引起敏感体质患者发生不良反应，临床应用安全风险低，同时该复方氨基酸注射液可为干细胞提供多种必需和非必需氨基酸，参与干细胞物质合成和代谢，维持细胞功能。
10、进一步地，人血白蛋白溶液的原始浓度为10g/50ml，人血白蛋白是维持渗透压，保护干细胞活性的重要物质。
11、本专利技术提供的丙谷二肽注射液含有的l-丙氨酰-l-谷氨酰胺在水溶液中结构稳定，不会自发降解，但可以在活细胞存在的情况下，长时间缓慢释放谷氨酰胺，为干细胞合成核酸和蛋白质的提供重要原料，同时作为抗氧化剂保护干细胞。
12、复方电解质注射液是维持渗透压和离子平衡以及其它多项生物学功能的重要辅料。
13、一种干细胞存贮液的使用方法，包括以下步骤：
14、选择生长状态良好的p5代的间充质干细胞，待细胞融合度到80％以上时，使用重组人胰蛋白酶消化，消化结束加入等体积完全培养基终止，轻轻吹打成单细胞悬液，200g离心8分钟，用含1%人血白蛋白的生理盐水洗涤细胞沉淀2-3次，干细胞存贮液重悬细胞后测量细胞密度，用干细胞存贮液调整细胞密度为所需密度，灌装密封于细胞回输袋并低温保存。
15、进一步地，间充质干细胞密度为0.5-1.2e+06个/ml。
16、进一步地，低温的温度范围为2-8℃。
17、进一步地，完全培养基为含友康干细胞传代用完全培养基。
18、本专利技术提供的干细胞存贮液中，减少了人血清白蛋白的用量，增加了复方氨基酸、丙谷二肽以及维生素c成分，改善了干细胞的体外生存环境，优化了干细胞存贮液的保存效能并提升了其稳定性和抗氧化能力。右旋糖酐40葡萄糖注射液的加入可增加溶液粘度从而降低干细胞聚团，还可为干细胞提供能量，减少生糖氨基酸的消耗，使复方氨基酸的作用持续时间延长。本专利技术还优化了干细胞存贮液的ph调节方式，使用碳酸氢钠注射液代替固体氢氧化钠药用辅料，避免了氢氧化钠配制及灭菌过程。使用本专利技术所述干细胞存贮液的干细胞制剂可直接应用于临床输注，可以为干细胞研发企业的药物申报注册提供关键的制剂配方。
19、本专利技术的有益效果：
20、（1）本专利技术技术方案中，减少了人血清白蛋白的用量，增加了复方氨基酸、丙谷二肽以及维生素c成分，改善了干细胞的体外生存环境，优化了干细胞存贮液的保存效能并提升了其稳定性和抗氧化能力，优化配方的干细胞存贮液可在长达168h时间内维持干细胞活率不低于85％，间充质干细胞在本专利技术的干细胞存贮液中保存168h后表型特征正常，无分化现象。本专利技术提供的技术方案显著延长了干细胞制剂的保存时间，能实现极大范围内临床应用。
21、（2）本专利技术技术方案中，应用的所有组分都为临床注射药品，可直接按比例配制，明显减少了操作步骤，降低了操作风险，临床应用安全可靠。
22、（3）本专利技术技术方案中，本专利技术所设计的干细胞存贮液稳定性不低于180天，可制备成货架产品，具有优良的商品化潜力。
23、（4）本专利技术技术方案中，本专利技术的干细胞存贮液可以长时间有效维持活细胞密度，168h后检测活细胞数仍维持原始密度的90%以上，可2-8℃条件下保存，经短暂复温即可直接静脉输注，避免了干细胞复苏等再处理过程中的细胞损伤，减少了潜在的安全风险，提高了安全性及细胞利用率。
24、（5）本专利技术技术方案中，加入了右旋糖酐40葡萄糖注射液增加溶液的黏度，使该配方有良好的抗聚团本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种干细胞存贮液的制备方法，其特征在于：100mL干细胞存贮液的制备方法包括以下步骤：在无菌环境中，依次将人血白蛋白溶液5mL，丙谷二肽注射液0.05-0.075mL，右旋糖酐40葡萄糖注射液1-2.5mL，复方氨基酸注射液5-10mL，维生素C注射液0.05-0.075mL加入75mL复方电解质注射液中，碳酸氢钠注射液调pH至7.0-7.4，使用复方电解质注射液补足100mL；过滤后密封于无菌容器，2-8℃冷藏保存。
2.根据权利要求1所述的一种干细胞存贮液的制备方法，其特征在于：所述干细胞存贮液的渗透压为278-343mOsmol/kg。
3.根据权利要求1所述的一种干细胞存贮液的制备方法，其特征在于：所述复方氨基酸注射液为不含亚硫酸盐类抗氧化剂的平衡型十四复方氨基酸注射液14AA-SF。
4.根据权利要求3所述的一种干细胞存贮液的制备方法，其特征在于：所述不含亚硫酸盐类抗氧化剂的平衡型十四复方氨基酸注射液14AA-SF的浓度为4.2g/50mL。
5.根据权利要求1所述的一种干细胞存贮液的制备方法，其特征在于：所述人血白蛋
6.一种根据权利要求1-5任一项所述的制备方法制得的干细胞存贮液的使用方法，其特征在于：包括以下步骤：
7.根据权利要求6所述的一种干细胞存贮液的使用方法，其特征在于：所述间充质干细胞密度为0.5-1.2E+06个/mL。
8.根据权利要求6所述的一种干细胞存贮液的使用方法，其特征在于：所述低温的温度范围为2-8℃。
9.根据权利要求6所述的一种干细胞存贮液的使用方法，其特征在于：所述完全培养基为含友康干细胞传代用完全培养基。
...【技术特征摘要】
1.一种干细胞存贮液的制备方法，其特征在于：100ml干细胞存贮液的制备方法包括以下步骤：在无菌环境中，依次将人血白蛋白溶液5ml，丙谷二肽注射液0.05-0.075ml，右旋糖酐40葡萄糖注射液1-2.5ml，复方氨基酸注射液5-10ml，维生素c注射液0.05-0.075ml加入75ml复方电解质注射液中，碳酸氢钠注射液调ph至7.0-7.4，使用复方电解质注射液补足100ml；过滤后密封于无菌容器，2-8℃冷藏保存。
2.根据权利要求1所述的一种干细胞存贮液的制备方法，其特征在于：所述干细胞存贮液的渗透压为278-343mosmol/kg。
3.根据权利要求1所述的一种干细胞存贮液的制备方法，其特征在于：所述复方氨基酸注射液为不含亚硫酸盐类抗氧化剂的平衡型十四复方氨基酸注射液14aa-sf。
4.根据权利...
【专利技术属性】
技术研发人员：赵振峰，于峰祥，李守真，贾博慧，
申请(专利权)人：山东翰康医学科技集团有限公司，
类型：发明
国别省市：
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