【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及植物生物技术和育种领域，具体涉及一种通过无菌萌发获得足量健壮一致蓝莓种子苗的培育方法。
技术介绍
1、蓝莓属杜鹃花科越桔属小浆果果树，其栽培起源于北美和欧洲，现已在全世界许多国家广泛栽培生产。蓝莓果实富含黄酮、花色苷、鞣酸、酚类物质等生物活性物质使得抗氧化能力极强，在预防心血管疾病、抗癌细胞增殖及抗氧化等方面具有功效，被国际粮农组织列为人类五大健康食品之一。
2、我国蓝莓商业化种植和育种工作起步较晚，生产上主栽品种大多为国外引入。目前很难引进国外优良新品种，加上以鲜果市场为目标的跨国企业种植面积和市场份额占比逐年增长，加强具有自主知识产权的鲜食蓝莓品种培育是突破蓝莓产业瓶颈的唯一途径。按树体特征、生态特性及果实特点,在栽培学上通常划分矮丛蓝莓、半高丛蓝莓、高丛蓝莓、兔眼蓝莓4个品种群。高丛蓝莓相比其他类型具有果实大、果肉多、果皮薄等适于鲜食特征，多半用于鲜食利用，因而培育具有优良鲜食性状的高丛品种成为重要育种目标。蓝莓多数高丛品种靠异花授粉获得优良果实，自交结实率低或不结实，不同品种需配制适合的授粉树获得果实。
3、蓝莓优良品种繁育多以无性繁殖为主，但杂交育种后代苗木获得仍以种子苗为主。目前研究发现蓝莓种子具有休眠性、体积小、在自然条件下萌发率低、萌发时间长等难题，研究者也从适于萌发的环境ph条件、不同品种类型种子形态特征和萌发特性、不同浓度赤霉素（ga3）溶液和处理时间等条件进行探索研究，发现偏酸条件利于萌发、萌发率受品种类型影响大、经不同浓度ga3处理均可萌发等一些颇有价值的信息。在自然
4、通过设置不同培养条件、专利技术一种通过蓝莓种子无菌萌发并快速大量成苗的技术成为一种可能，但目前尚未见通过基于种子分级和无菌萌发技术实现蓝莓种子到健壮幼苗的报道。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种高效获得大量整齐一致无菌健壮的蓝莓种子苗的方法，解决目前生产上和研究中常规自然条件下因蓝莓种子小管理条件难以操控、种子出苗率低或出苗不整齐等缺陷。
2、为了实现上述目的，本专利技术提供了可操作的基于分级的蓝莓无菌种子苗的组培育苗方法，具体包括如下步骤：
3、将消毒后的蓝莓3种不同粒径种子接种于萌发培养基中萌发培养，经过萌发得到萌发的种子苗；所述萌发培养基为1/2 ms+1.0 mg/l 6-ba+30 g/l蔗糖+5 g/l琼脂，ph值5.8；所述萌发成苗时间为60天；
4、将所述种子苗接种至生根培养基上生根培养，得到生根植株；所述生根培养基为1/2wpm+0.3 mg/l iba+30 g/l蔗糖+5 g/l琼脂，ph值5.8；所述生根时间为50天。
5、有益效果：
6、本专利技术建立了一种高效获得大量健壮蓝莓无菌种子苗的方法，解决了在常规条件抚育下存在的管理难度大、出苗率无法保证、出苗时间受外界环境条件影响大而导致后期苗木抚育进程不统一、成本增加等难题，为蓝莓杂交育种工作保证足量种子苗数目提供了技术措施，填补了简便获取大量一致蓝莓种子无菌苗的技术空白。其次，种子的萌发操作不受季节限制，在室内条件下至1~2月份时即可完成幼苗成苗，相比传统自然条件下6~7月份成苗周期可提前半年，因而明显有助于缩短育种周期。再次，快速获得的蓝莓壮苗也可进一步保种扩繁和用于育种性状的分子标记辅助早期鉴别，有利于加快育种进程。本专利技术的育苗方法对未来快速获得足量蓝莓杂交苗木和缩短育种进程具有重要意义。
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1.一种基于分级的蓝莓无菌种子苗培育方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）种子的采集与分级：采集的蓝莓种子来自于高丛品种绿宝石、天后和莱克西，于田间选取无病虫害且高成熟度的蓝莓果实，带回室内取出果肉置于质量分数2%的果胶酶水溶液中浸泡1小时，彻底清洗掉种子表面的果肉组织，洗净后置于室温下通风处自然晾干2周；将种子过筛后将粒径分为S1（0.3~0.45 mm）、S2（0.45~0.6 mm）和S3（0.6~0.9 mm）3种；后将种子密闭保存在5 mL离心管中置于4度冰箱低温冷藏放置3个月；（2）种子消毒处理：向步骤（1）3种粒径种子中加入100 mg/L赤霉素（GA3）溶液浸泡2 h，之后置于超净工作台上用75%酒精消毒30 s，无菌水清洗2次，再用2%次氯酸钠溶液处理5 min，无菌水清洗4~5次，置于灭菌滤纸上吸干水分备用；（3）种子接种与无菌萌发：将步骤（2）消毒后的种子接种于MS培养基上，在25±2℃、1500~2000LX光源、12h/d光培养室条件下培养，直至种子萌发稳定，接种后60天后统计种子长成具有完整根茎叶的正常健壮小苗数目；（4）幼苗生根培养：将步骤（3）所得
2.根据权利要求1所述的一种基于分级的蓝莓无菌种子苗培育方法，其特征在于，所述步骤（2）中的无菌萌发前处理的种子消毒条件为先用75%酒精消毒30 s，后用2%次氯酸钠溶液处理5 min。
3.根据权利要求1所述的一种基于分级的蓝莓无菌种子苗培育方法，其特征在于，所述步骤（3）中的种子萌发MS培养基为1/2 MS+1.0 mg/L6-BA+30 g/L蔗糖+5 g/L琼脂。
4.根据权利要求1所述的一种基于分级的蓝莓无菌种子苗培育方法的方法，其特征在于，所述步骤（4）中的种子苗生根壮苗培养基为1/2WPM+0.3 mg/L IBA+30 g/L蔗糖+5 g/L琼脂。
5.根据权利要求1所述的一种基于分级的蓝莓无菌种子苗培育方法的方法，其特征在于，所述步骤（3）和（4）中的种子萌发培养和生根成苗时间分别为60天和50天。
...【技术特征摘要】
1.一种基于分级的蓝莓无菌种子苗培育方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）种子的采集与分级：采集的蓝莓种子来自于高丛品种绿宝石、天后和莱克西，于田间选取无病虫害且高成熟度的蓝莓果实，带回室内取出果肉置于质量分数2%的果胶酶水溶液中浸泡1小时，彻底清洗掉种子表面的果肉组织，洗净后置于室温下通风处自然晾干2周；将种子过筛后将粒径分为s1（0.3~0.45 mm）、s2（0.45~0.6 mm）和s3（0.6~0.9 mm）3种；后将种子密闭保存在5 ml离心管中置于4度冰箱低温冷藏放置3个月；（2）种子消毒处理：向步骤（1）3种粒径种子中加入100 mg/l赤霉素（ga3）溶液浸泡2 h，之后置于超净工作台上用75%酒精消毒30 s，无菌水清洗2次，再用2%次氯酸钠溶液处理5 min，无菌水清洗4~5次，置于灭菌滤纸上吸干水分备用；（3）种子接种与无菌萌发：将步骤（2）消毒后的种子接种于ms培养基上，在25±2℃、1500~2000lx光源、12h/d光培养室条件下培养，直至种子萌发稳定，接种后60天后统计种子长成具有完整根茎叶的正常健...
【专利技术属性】
技术研发人员：张春红，李学铃，李维林，吴文龙，杨海燕，王小敏，闾连飞，
申请(专利权)人：江苏省中国科学院植物研究所，
类型：发明
国别省市：
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