基于CRISPR-RfxCas13d系统提高马铃薯PSTVd抗性的方法及其产品和应用技术方案

本发明专利技术公开了一种基于CRISPR‑RfxCas13d系统提高马铃薯PSTVd抗性的方法及其产品和应用，属于植物生物技术领域，本发明专利技术设计了靶向SEQ ID No.2或SEQ ID No.5或同时靶向SEQ ID No.6～9所示的PSTVd序列的crRNA序列，然后构建CRISPR‑RfxCas13d编辑系统载体，CRISPR‑RfxCas13d编辑系统在crRNA介导下可以定向剪切马铃薯纺锤块茎类病毒PSTVd的RNA，降低了马铃薯内PSTVd成熟体和vd‑sRNA的积累量，从而降低了PSTVd的致病力，减轻了马铃薯由于PSTVd产生的病征，提高了马铃薯PSTVd抗性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及植物生物，具体涉及一种基于crispr-rfxcas13d系统提高马铃薯pstvd抗性的方法及其产品和应用。

技术介绍

1、马铃薯为茄科双子叶植物，是我国继水稻、小麦、玉米之后的第四大粮食作物。马铃薯产业也是少、边、山地区脱贫致富的优势产业，在保障我国粮食安全、促进农业农民增效增收方面发挥关键作用。马铃薯纺锤块茎类病毒(potato spindle tuber viroid,pstvd)是马铃薯的重要病害之一，严重影响其生长发育，造成大幅减产和品质下降。据报道，pstvd强株系引起的减产高达60％，而弱株系也可造成约20％～35％的减产，造成严重的经济损失。

2、由于pstvd无法通过茎尖脱毒和组织培养汰除以及缺乏抗病品种，目前无法有效防治pstvd病害的发生。当前基因编辑技术高速发展，广泛应用于基因编辑、诊断和表达调控等方面。植物基因编辑技术的开发大幅缩短了育种年限，加速了育种进程，目前利用基因编辑技术已创制多种农作物的抗病毒种质资源。但该技术在马铃薯中应用较少，因此，本专利技术拟通过基因编辑技术，设计靶向pstvd的crrna本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种基于CRISPR-RfxCas13d系统提高马铃薯PSTVd抗性的方法，其特征在于，包含如下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1中，马铃薯纺锤块茎类病毒PSTVd的核苷酸序列为SEQ ID No.1所示。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2中，所述CRISPR-RfxCas13d载体包含RfxCas13d基因表达盒和gRNA表达盒，所述RfxCas13d基因表达盒由依次连接的CaMV35S启动子、RfxCas13d基因、SV40 NLS、Nos-T元件组成，所述gRNA表达盒由依次连接的AtU6启动子、DR序列和靶向PST...

【技术特征摘要】

1.一种基于crispr-rfxcas13d系统提高马铃薯pstvd抗性的方法，其特征在于，包含如下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1中，马铃薯纺锤块茎类病毒pstvd的核苷酸序列为seq id no.1所示。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2中，所述crispr-rfxcas13d载体包含rfxcas13d基因表达盒和grna表达盒，所述rfxcas13d基因表达盒由依次连接的camv35s启动子、rfxcas13d基因、sv40 nls、nos-t元件组成，所述grna表达盒由依次连接的atu6启动子、dr序列和靶向pstvd的单靶点或多靶点crrna序列组成。

4.根据权利要求1所...

【专利技术属性】
技术研发人员：吕典秋，琚熙三，张瀚月，周永洪，
申请(专利权)人：西部重庆科学城种质创制大科学中心，
类型：发明
国别省市：