【技术实现步骤摘要】
本申请涉及制药，涉及但不限于药物分析技术，具体涉及一种蛋白琥珀酸铁中丁二酸的检测方法。
技术介绍
1、蛋白琥珀酸铁(iron proteinsuccinylate)为酪蛋白经琥珀酸酐酰化后与三氯化铁络合制得的产物，其结构式如下：
2、
3、蛋白琥珀酸铁是一种纳米多肽类蛋白补铁药物，为酪蛋白经琥珀酸酐酰化后与三氯化铁络合制得的产物，是一种有机铁化合物，在溶液中其中的铁不游离，是络合状态，溶液在ph值小于4时呈沉淀状态，在ph值较高时(ph7.5～8.0)又重新变为可溶性物质。此外，该制剂不被胃蛋白酶消化，在中性ph值时可被胰蛋白酶水解。由于这些性质，蛋白琥珀酸铁所含的铁受蛋白膜的保护而不与胃液中胃酸和胃蛋白酶发生反应，因此其不会造成胃粘膜损伤。本品中铁在十二指肠开始释放，特别在空肠释放，因为ph值的升高使化合物重新变得可溶，同时蛋白膜被胰蛋白酶消化。其中的铁非常有利于机体的生理吸收，却又不会形成太高的吸收峰，呈现一种恒定的吸收趋势，在机体的各个部位逐渐达到吸收与贮存的最佳状态。因此，蛋白琥珀酸铁一般不会产生胃肠的耐受性问题。
4、在蛋白琥珀酸铁合成工艺过程中，丁二酸酐(别名琥珀酸酐)为起始物料之一，合成工艺过程可能引入杂质丁二酸，需在成品中进行研究和控制。
5、美国药典usp(40)方法检测琥珀酸亚铁片中丁二酸，空白/样品处理过程中容易引入杂质峰干扰丁二酸的检测，尤其在琥珀酸亚铁供试品图谱中干扰严重，杂质峰与丁二酸达不到基线分离。文献“hplc法测定九节菖蒲中琥珀酸含量”中有关于丁二
6、此外，现有的丁二酸检测方法为高效液相色谱法，使用色谱柱为c18柱，流动相为纯盐溶液，对色谱柱及设备损伤较大，生产检测成本较高，因此，急需一种蛋白琥珀酸铁中丁二酸的检测方法，降低对色谱柱及设备的损伤，降低生产检测成本。
技术实现思路
1、针对原料药蛋白琥珀酸铁性质的特殊性及现有技术的不足，本专利技术提供了一种蛋白琥珀酸铁中丁二酸的高效液相色谱检测方法。本专利技术检测方法操作简便，具有良好的专属性、灵敏度、精密度，极大地降低流动相对色谱柱及设备的损伤，降低生产检测成本。
2、本专利技术提供一种蛋白琥珀酸铁中丁二酸的检测方法，采用高效液相色谱法进行检测，所述的检测方法包括如下检测条件：
3、色谱柱为agilent zorbax sb-aq；
4、流动相为0.09％-0.11％(v/v)磷酸溶液。
5、优选地，所述磷酸溶液配制方法为：称取磷酸0.9-1.1ml，加水稀释至1000ml。
6、优选地，所述检测条件还包括如下一项或多项：
7、流速为0.75-0.85ml/min；
8、柱温为25℃～35℃；
9、检测波长为205～220nm；
10、进样量5-60μl。
11、优选地，所述检测方法包括如下检测条件：
12、色谱柱为agilent zorbax sb-aq；
13、流动相为0.1％(v/v)磷酸溶液；
14、流速为0.8ml/min；
15、柱温为30℃；
16、检测波长为210nm；
17、进样量5μl。
18、优选地，所述色谱柱规格为4.6mm×250mm。
19、本专利技术一种蛋白琥珀酸铁中丁二酸的检测方法，具体操作步骤如下：
20、(1)样品溶液的配制：
21、样品加水分散，搅拌，滴加碱溶液调节ph至6.5～8.0，完全溶解后，用水稀释，摇匀，作为蛋白琥珀酸铁贮备液，然后滴加酸溶液调ph值至2.0～3.0，使沉淀完全，加水，离心，上清液置，用水洗涤沉淀，同法离心，合并上清液，用水稀释，摇匀，用0.45μm滤膜滤过，取续滤液，得到样品溶液。
22、(2)丁二酸对照品溶液的配制：
23、取丁二酸对照品25mg，精密称定，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀。
24、(3)样品加入丁二酸试验：
25、取本品加水分散均匀，搅拌，滴加碱溶液调节ph至6.5～8.0，至完全溶解后，用水稀释，摇匀，作为蛋白琥珀酸铁贮备液，滴加酸溶液调ph值至2.0～3.0，使沉淀完全，加水，摇匀，离心，上清液置，用水洗涤沉淀，同法离心，合并上清液，加丁二酸对照品溶液，用水稀释，摇匀，用0.45μm滤膜滤过，取续滤液，得到加入对照品溶液的样品溶液。
26、按照外标法，以峰面积计算丁二酸的含量。
27、优选地，所述步骤(1)、(3)中碱溶液为1mol/l氢氧化钠溶液；所述步骤(1)、(3)中酸溶液为0.1mol/l盐酸溶液；所述步骤(1)、(3)中离心转速为2000rpm，离心时间为15分钟。
28、优选地，所述步骤(1)样品配制方法如下：取样品约2.5g，精密称定，置100ml烧杯中，加水50ml使分散均匀，在搅拌条件下，缓慢滴加1mol/l氢氧化钠溶液调节ph至6.5～8.0，至完全溶解后，转移至100ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为蛋白琥珀酸铁贮备液，精密量取10ml，滴加0.1mol/l盐酸溶液调ph值至2.0～3.0，使沉淀完全，加水10ml，摇匀，以2000rpm离心15分钟，上清液置50ml量瓶中，用15ml水洗涤沉淀，同法离心，合并上清液，用水稀释至刻度，摇匀，用0.45μm滤膜滤过，取续滤液，得到样品溶液。
29、优选地，所述步骤(3)样品加入丁二酸试验方法如下：取本品约2.5g，精密称定，置100ml烧杯中，加水50ml使分散均匀，在搅拌条件下，缓慢滴加1mol/l氢氧化钠溶液调节ph至6.5～8.0，至完全溶解后，转移至100ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为蛋白琥珀酸铁贮备液，精密量取10ml，滴加0.1mol/l盐酸溶液调ph值至2.0～3.0，使沉淀完全，加水10ml，摇匀，以2000rpm离心15分钟，上清液置50ml量瓶中，用15ml水洗涤沉淀，同法离心，合并上清液，加丁二酸对照品溶液5ml，用水稀释至刻度，摇匀，用0.45μm滤膜滤过，取续滤液，得到加入对照品溶液的样品溶液。
30、本专利技术方案采用高效液相色谱法检测蛋白琥珀酸铁中丁二酸的含量，体系中流动相组成简单，操作简便，方法专属性强，准确度高，可满足检测要求。
31、本专利技术液相色谱检测方法中使用水作为溶剂，可使丁二酸与其他杂质达到分离效果，并可准确测定丁二酸的含量。
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1.一种蛋白琥珀酸铁中丁二酸的检测方法，其特征在于，采用高效液相色谱法进行检测，所述的检测方法包括如下检测条件：
2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述磷酸溶液配制方法为：称取磷酸0.9-1.1ml，加水稀释至1000ml。
3.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述检测条件还包括如下一项或多项：
4.如权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括如下检测条件：
5.如权利要求1-4所述的检测方法，其特征在于，色谱柱规格为4.6mm×250mm。
6.如权利要求1-4所述的检测方法，其特征在于，具体操作步骤如下：
7.如权利要求6所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(1)、(3)中碱溶液为1mol/L氢氧化钠溶液；所述步骤(1)、(3)中酸溶液为0.1mol/L盐酸溶液；所述步骤(1)、(3)中离心转速为2000rpm，离心时间为15分钟。
8.如权利要求6所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(1)样品配制方法如下：取样品约2.5g，精密称定，置100ml烧杯中，加水50
9.如权利要求6所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(3)样品加入丁二酸试验方法如下：取本品约2.5g，精密称定，置100ml烧杯中，加水50ml使分散均匀，在搅拌条件下，缓慢滴加1mol/L氢氧化钠溶液调节pH至6.5～8.0，至完全溶解后，转移至100ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为蛋白琥珀酸铁贮备液，精密量取10ml，滴加0.1mol/L盐酸溶液调pH值至2.0～3.0，使沉淀完全，加水10ml，摇匀，以2000rpm离心15分钟，上清液置50ml量瓶中，用15ml水洗涤沉淀，同法离心，合并上清液，加丁二酸对照品溶液5ml，用水稀释至刻度，摇匀，用0.45μm滤膜滤过，取续滤液，得到加入对照品溶液的样品溶液。
...【技术特征摘要】
1.一种蛋白琥珀酸铁中丁二酸的检测方法，其特征在于，采用高效液相色谱法进行检测，所述的检测方法包括如下检测条件：
2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述磷酸溶液配制方法为：称取磷酸0.9-1.1ml，加水稀释至1000ml。
3.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述检测条件还包括如下一项或多项：
4.如权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括如下检测条件：
5.如权利要求1-4所述的检测方法，其特征在于，色谱柱规格为4.6mm×250mm。
6.如权利要求1-4所述的检测方法，其特征在于，具体操作步骤如下：
7.如权利要求6所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(1)、(3)中碱溶液为1mol/l氢氧化钠溶液；所述步骤(1)、(3)中酸溶液为0.1mol/l盐酸溶液；所述步骤(1)、(3)中离心转速为2000rpm，离心时间为15分钟。
8.如权利要求6所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(1)样品配制方法如下：取样品约2.5g，精密称定，置100ml烧杯中，加水50ml使分散均匀，在搅拌条件下，缓慢滴加1mol...
【专利技术属性】
技术研发人员：邓艾平，李思宇，王恩霞，王乐会，李艳，
申请(专利权)人：圣嘉滨海生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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