【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种血液样本dna提取试剂盒和核酸提取方法。
技术介绍
1、dna是遗传信息的基本单位，它储存了个体的遗传信息，包括基因序列和其他遗传变异，是分子生物学研究的主要对象，进行基因相关研究的前提是获得高质量的dna，因此dna提取是基础且关键的技术。临床诊断中最常用的样本是血液样本，通过提取血液dna，可以获取个体的遗传信息，用于基因检测、疾病诊断和研究等领域。
2、目前的提取包括盐析法、吸附柱法、磁珠法等。现有的试剂盒基本使用吸附柱法、磁珠法，其中离心柱法提取纯度较好，但是该方法提取需要多次离心，不适合进行自动化操作，大量样本的提取耗时较长，而磁珠法提取dna具有操作简单、高产率、纯度较高的优点。它适用于大规模dna提取、高通量的自动化处理和临床诊断等领域。
3、血液dna提取试剂主要用于从血液样本中提取dna，广泛应用于基因组学研究、临床诊断等领域，该技术的主要包括以下几个方面：
4、裂解：裂解是血液dna提取的关键步骤之一。该步骤利用裂解溶液将细胞膜和细胞核膜破坏，使dna释放到溶液中。
5、蛋白酶处理：在血液dna提取过程中，需要添加蛋白酶以消化细胞膜上的蛋白质，如核蛋白和膜蛋白。这一步骤有助于提高dna的纯度和质量。
6、酒精沉淀：为了进一步纯化dna，通常会使用酒精(如乙醇或异丙醇)来沉淀dna。
7、洗涤：洗涤是为了去除沉淀物中的杂质和残留试剂。通常使用乙醇或异丙醇进行洗涤，以去除未溶解的盐和其他污染物。此外，还可以使用缓冲液进行一系
8、目前，血液dna提取试剂盒已经发展成为一种高效、快速、方便且可靠的技术。不同厂家生产的试剂盒可能使用不同的原理和改良方法，但是提取的dna质量仍有提升空间。
技术实现思路
1、本专利技术的血液样本dna提取试剂盒和核酸提取方法，主要通过改进裂解液获得更高纯度和高浓度的的dna，并且操作简单，适用于大规模样本处理。
2、为实现以上目的，本专利技术提供一种血液样本dna提取试剂盒，包括：核酸处理液、核酸漂洗液和洗脱缓冲液；其中，所述核酸处理液包括裂解液、蛋白酶k溶液和磁珠悬浮液，所述裂解液包括：胍类化合物、双(2-羟乙基)氨基(三羟甲基)甲烷、乙氧硬化醇、葡聚糖-70、氯化钠、聚乙烯吡咯烷酮和水。
3、作为一种优选，所述裂解液为：3-4m/l的胍类化合物、10-20mm/l的双(2-羟乙基)氨基(三羟甲基)甲烷、10-15wt％的乙氧硬化醇、0.1-0.3wt％的葡聚糖-70、1-3m/l的氯化钠、5-10wt％的聚乙烯吡咯烷酮和水。
4、作为一种优选，所述胍类化合物为异硫氰酸胍、盐酸胍、氨基磺酸胍和硫氰酸胍中的至少一种。
5、作为一种优选，所述蛋白酶k溶液为：10-30mm/ml的tris、0.005-0.02wt％的氯化钙、10-30mg/ml的蛋白酶k、40-60wt％的甘油和水。
6、作为一种优选，所述磁珠悬浮液为：1-2wt％羟基磁珠悬浮液。
7、作为一种优选，所述核酸漂洗液包括300-600体积单位第一漂洗液和700-1400体积单位第二漂洗液；
8、作为一种优选，所述第一漂洗液为：30-70mm/l的tris、500-1000mm/l的氯化钠、50-70wt％乙醇和水，ph为7-8；
9、作为一种优选，所述第二漂洗液为：30-70mm/l的tris、50-150mm/l的氯化钠、50-70wt％乙醇和水，ph为7-8。
10、作为一种优选，所述洗脱缓冲液为：5-15mm/l的tris、0.5-1.5mm/l的edta和水，ph为7.5-8.5。
11、作为一种优选地，所述血液样本为人源性血液样本、兔源性血液样本、兔源性血液样本、狗源性血液样本、猴源性血液样本、羊源性血液样本、牛源性血液样本、鱼源性血液样本、鸡源性血液样本、鸭源性血液样本或猪源性血液样本。
12、本专利技术还公开了一种血液dna提取方法，采用上述的血液样本dna提取试剂盒，包括下述步骤：
13、s1，向血液样本中加入裂解液、蛋白酶k溶液和磁珠悬浮液，振荡混匀；
14、s2，吸磁，弃废液；
15、s3，加入第一漂洗液，振荡混匀，吸磁，弃废液；
16、s4，加入第二漂洗液，振荡混匀，吸磁，弃废液；
17、s5，加入余下的第二漂洗液，振荡混匀，吸磁，弃废液；
18、s6，静置，晾干；加入洗脱缓冲液，吸磁，吸取上清液。
19、作为一种优选，所述血液样本为150-250体积单位。
20、作为一种优选，一种血液dna提取方法，包括下述步骤：
21、s1，向含有150-250体积单位血液样本的离心管中加入裂解液、蛋白酶k溶液和磁珠悬浮液，振荡混匀，50-70℃加热5-15min；
22、s2，将离心管放置于磁力架上吸磁，弃废液；
23、s3，将离心管从磁力架上取下，加入第一漂洗液，振荡混匀，将离心管放置于磁力架上吸磁，弃废液；
24、s4，将离心管从磁力架上取下，加入40-60wt％的第二漂洗液，振荡混匀，将离心管放置于磁力架上吸磁，弃废液；
25、s5，将离心管从磁力架上取下，加入余下的第二漂洗液，振荡混匀，将离心管放置于磁力架上吸磁，弃废液；
26、s6，将离心管从磁力架上取下，室温下开盖静置，晾干；加入洗脱缓冲液，70-90℃加热2-8min，将离心管置于磁力架上吸磁，吸取上清液至新的离心管中，-15至-25℃保存。
27、上述技术方案中所使用的试剂如异硫氰酸胍、双(2-羟乙基)氨基(三羟甲基)甲烷、乙氧硬化醇、葡聚糖-70、氯化钠、聚乙烯吡咯烷酮、tris、氯化钙、蛋白酶k、甘油、edta、磁珠可以根据需要和产品性能选用各种型号。
28、本专利技术的试剂盒可以手动操作，也可以使用本领域公知的技术制备成自动操作的形式以进一步提高效率。
29、本专利技术的血液样本dna提取试剂盒经过精心设计和优化，展现出显著的优点，尤其是能够实现高纯度和高浓度的dna提取。通过优化的裂解液配方和高度适配的设计，该试剂盒不仅提取效率出众，操作简便，并且具有较强的通用性和灵活性，可广泛适用于不同的实验条件和设备，满足多样化的实验需求，为后续的分子生物学研究提供了极具价值的支持。
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1.一种血液样本DNA提取试剂盒，包括：核酸处理液、核酸漂洗液和洗脱缓冲液；其中，所述核酸处理液包括裂解液、蛋白酶K溶液和磁珠悬浮液，其特征在于：
2.如权利要求1所述的血液样本DNA提取试剂盒，其特征在于，所述裂解液为：3-4M/L的胍类化合物、10-20mM/L的双(2-羟乙基)氨基(三羟甲基)甲烷、10-15wt％的乙氧硬化醇、0.1-0.3wt％的葡聚糖-70、1-3M/L的氯化钠、5-10wt％的聚乙烯吡咯烷酮和水。
3.如权利要求2所述的血液样本DNA提取试剂盒，其特征在于，所述胍类化合物为异硫氰酸胍、盐酸胍、氨基磺酸胍和硫氰酸胍中的至少一种。
4.如权利要求1-3任一项所述的血液样本DNA提取试剂盒，其特征在于，所述蛋白酶K溶液为：10-30mM/mL的Tris、0.005-0.02wt％的氯化钙、10-30mg/mL的蛋白酶K、40-60wt％的甘油和水。
5.如权利要求1-3任一项所述的血液样本DNA提取试剂盒，其特征在于，所述磁珠悬浮液为：1-2wt％羟基磁珠悬浮液。
6.如权利要求1-3任一项所述的
7.如权利要求1-3任一项所述的血液样本DNA提取试剂盒，其特征在于，所述洗脱缓冲液为：5-15mM/L的Tris、0.5-1.5mM/L的EDTA和水，PH为7.5-8.5。
8.一种血液DNA提取方法，其特征在于，采用权利要求1-7任一项所述的血液样本DNA提取试剂盒，包括下述步骤：
9.如权利要求8所述的血液DNA提取方法，其特征在于，所述血液样本为150-250体积单位。
10.如权利要求8或9所述的血液DNA提取方法，其特征在于，包括下述步骤：
...【技术特征摘要】
1.一种血液样本dna提取试剂盒，包括：核酸处理液、核酸漂洗液和洗脱缓冲液；其中，所述核酸处理液包括裂解液、蛋白酶k溶液和磁珠悬浮液，其特征在于：
2.如权利要求1所述的血液样本dna提取试剂盒，其特征在于，所述裂解液为：3-4m/l的胍类化合物、10-20mm/l的双(2-羟乙基)氨基(三羟甲基)甲烷、10-15wt％的乙氧硬化醇、0.1-0.3wt％的葡聚糖-70、1-3m/l的氯化钠、5-10wt％的聚乙烯吡咯烷酮和水。
3.如权利要求2所述的血液样本dna提取试剂盒，其特征在于，所述胍类化合物为异硫氰酸胍、盐酸胍、氨基磺酸胍和硫氰酸胍中的至少一种。
4.如权利要求1-3任一项所述的血液样本dna提取试剂盒，其特征在于，所述蛋白酶k溶液为：10-30mm/ml的tris、0.005-0.02wt％的氯化钙、10-30mg/ml的蛋白酶k、40-60wt％的甘油和...
【专利技术属性】
技术研发人员：翟振谦，叶长钦，
申请(专利权)人：广东明志医学检验实验室有限公司，
类型：发明
国别省市：
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