【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于植物基因工程，具体涉及一个加深种皮颜色和提高紫花苜蓿种子大小和重量的基因的应用。
技术介绍
1、本部分的陈述仅仅是提供了与本专利技术相关的
技术介绍
信息，不必然构成在先技术。
2、种业是草业‘芯片’，优异苜蓿品种培育成为制约我国苜蓿产业发展的瓶颈问题。目前苜蓿产业开发主要集中在栽培和种植等领域，而对于优质苜蓿品种的选育工作相对滞后。通过遗传转化的方法来改良植物获得转基因植物得到了日益的关注，转基因的暂时性表达可以增加作物产量，改善非生物胁迫耐受性。种子大小是农业生产中最重要的农艺性状之一，是决定产量的重要因素，然而，目前对于调控种子大小的报道却很少。
3、转录因子(transcription factor,tf)具有特殊的结构，通过特异结合调控区域的dna序列来调控基因的转录过程。转录因子通过激活或抑制基因表达参与调控植物的生长发育，在植物的应激反应中也起着关键作用。tify是植物中特有的一类转录因子，tify基因家族成员对植物生长发育中调控籽粒大小具有重要作用。但是，在苜蓿中对此转录因子的研究较少，其功能目前尚不清晰。
4、现在，常采用遗传转化的方式获得优秀的苜蓿品种。但是遗传转化往往针对不同的品种转化方法不具有普适性，相同的基因转化不同品种的苜蓿需要重新摸索体系，耗费人力物力。另外，现有的遗传转化方法转化周期长，容易发生愈伤组织褐化、玻璃化，转化效率低。
技术实现思路
1、为克服上述现有技术的不足，本专利技术的目的是提供了苜蓿ms
2、为实现上述目的，本专利技术的一个或多个实施例提供了如下技术方案：
3、第一方面，提供一种苜蓿mstify10a基因，其多核苷酸序列如seq id no.1所示；其编码的蛋白质氨基酸序列如seq id no.2所示。
4、第二方面，提供含有第一方面所述基因的生物材料，所述生物材料为重组dna、表达盒、转座子、质粒载体、病毒载体、工程菌或非可再生的植物部分。
5、第三方面，提供第一方面所述基因或第二方面所述生物材料在调控植物种皮颜色上的应用，具体的，所述调控表现为过表达mstify10a基因加深种皮颜色；所述植物优选为双子叶植物，所述双子叶植物包括苜蓿、大豆；优选的，所述苜蓿为蒺藜苜蓿或紫花苜蓿。
6、第四方面，提供第一方面所述基因或第二方面所述生物材料在调控植物种子大小或调控植物种子重量中的应用。
7、第五方面，提供一种调控植物种皮颜色的方法，包括：利用基因工程手段，在植物中过表达第一方面所述基因；
8、所述过表达的方式选自以下1)～5)，或任选的组合：
9、1)通过导入具有所述基因的质粒；
10、2)通过增加植物染色体上所述基因的拷贝数；
11、3)通过改变植物染色体上所述基因的启动子序列；
12、4)通过将强启动子与所述基因可操作地连接；
13、5)通过导入增强子；
14、所述植物优选为双子叶植物，所述双子叶植物包括苜蓿、大豆；优选的，所述苜蓿为蒺藜苜蓿或紫花苜蓿；
15、优选地，采用农杆菌介导法将外源基因基因mstify10a转入到蒺藜苜蓿和紫花苜蓿植株中，获得该基因过表达的转基因植株；
16、优选地，将mstify10a基因构建到植物表达载体pearleygate 100上，转化农杆菌，然后通过遗传转化方法获得载有mstify10a基因的蒺藜苜蓿和紫花苜蓿转化体，筛选转基因植株。
17、第六方面，提供一种提高植物种子大小和重量的方法，包括：利用基因工程手段，在植物中过表达第一方面所述基因；
18、所述过表达的方式选自以下1)～5)，或任选的组合：
19、1)通过导入具有所述基因的质粒；
20、2)通过增加植物染色体上所述基因的拷贝数；
21、3)通过改变植物染色体上所述基因的启动子序列；
22、4)通过将强启动子与所述基因可操作地连接；
23、5)通过导入增强子；
24、所述植物优选为双子叶植物，所述双子叶植物包括苜蓿、大豆；优选的，所述苜蓿为蒺藜苜蓿或紫花苜蓿；
25、优选地，采用农杆菌介导法将外源基因基因mstify10a转入到蒺藜苜蓿植株中，获得该基因过表达的转基因植株；
26、优选地，将mstify10a基因构建到植物表达载体pearleygate 100上，转化农杆菌，然后通过遗传转化方法获得载有mstify10a基因的蒺藜苜蓿和紫花苜蓿转化体，筛选转基因植株。
27、第七方面，本专利技术提供第五方面所述方法获得的转基因植物在植物育种中的应用。
28、在本专利技术的具体实施方式中，育种方法包括转基因、杂交、回交、自交或无性繁殖。
29、第八方面，本专利技术提供一种高效的苜蓿遗传转化方法，所述方法包括如下步骤：
30、1)将含有第一方面所述基因或第二方面所述生物材料的农杆菌侵染液与带转化的外植体混合，倒入青贮袋中，采用抽真空、超声再抽真空的方式获得侵染后外植体；
31、2)将侵染后的外植体转移到共培养固体培养基上，培养至外植体变硬，边缘微微翘起；
32、3)将步骤2)中培养后的外植体转移至筛选培养基中后继代到愈伤培养基中培养，得愈伤组织；
33、4)将愈伤组织放置于分化培养基中培养；
34、5)将步骤4)所得愈伤组织放在含有筛选剂得生芽培养基中诱导培养，得到具有丛生芽外植体；
35、6)将步骤5)中丛生芽外植体放在生根培养基中生根培养，得到再生紫花苜蓿植株，实现紫花苜蓿遗传转化。
36、在本专利技术的具体实施方式中，所述外植体为紫花苜蓿三出复叶；所述外植体表面轻划伤口；真空的条件为：抽气75s，温度为中温；超声条件为：40khz，5min；
37、优选地，所述愈伤培养基的配方为：称取4.43g ms粉粉末，添加30g蔗糖，7.5g琼脂，2ml2,4-d，0.1ml6-bap，调节ph至5.8，加水定容至1l。
38、以上一个或多个技术方案存在以下有益效果：
39、本专利技术首次揭示了苜蓿tify10a基因的生物学功能，通过构建tify10a基因表达载体，结合农杆菌介导的遗传转化法，转化蒺藜苜蓿和紫花苜蓿，考察tify10a对转基因苜蓿种子性能的影响，并同时检测tify10a对蒺藜苜蓿种皮颜色、种子大小和重量，为紫花苜蓿转基因研究提供有力工具，为紫花苜蓿分子育种提供有价值的候选基因。
40、本专利技术附加方面的优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本专利技术的实践了解到。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种苜蓿MsTIFY10a基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；其编码的蛋白质氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
2.含有权利要求1所述基因的生物材料，所述生物材料为重组DNA、表达盒、转座子、质粒载体、病毒载体、工程菌或非可再生的植物部分。
3.权利要求1所述基因或权利要求2所述生物材料在调控植物种皮颜色上的应用，具体的，所述调控表现为过表达MsTIFY10a基因加深种皮颜色；所述植物优选为双子叶植物，所述双子叶植物包括苜蓿、大豆；优选的，所述苜蓿为蒺藜苜蓿或紫花苜蓿。
4.权利要求1所述基因或权利要求2所述生物材料在调控植物种子大小或调控植物种子重量中的应用。
5.一种调控植物种皮颜色的方法，其特征在于，包括：利用基因工程手段，在植物中过表达权利要求1所述基因；
6.一种提高植物种子大小和重量的方法，其特征在于，包括：利用基因工程手段，在植物中过表达权利要求1或2所述基因；
7.根据权利要求6所述方法获得的转基因植株在植物育种中的应用。
8.根据权利要求9所述的
9.一种高效的苜蓿遗传转化方法，所述方法包括如下步骤：
10.根据权利要求9所述的遗传转化方法，其特征在于，所述外植体为紫花苜蓿三出复叶；所述外植体表面轻划伤口；真空的条件为：抽气75s；超声条件为：40kHz，5min；
...【技术特征摘要】
1.一种苜蓿mstify10a基因，其特征在于，其核苷酸序列如seq id no.1所示；其编码的蛋白质氨基酸序列如seq id no.2所示。
2.含有权利要求1所述基因的生物材料，所述生物材料为重组dna、表达盒、转座子、质粒载体、病毒载体、工程菌或非可再生的植物部分。
3.权利要求1所述基因或权利要求2所述生物材料在调控植物种皮颜色上的应用，具体的，所述调控表现为过表达mstify10a基因加深种皮颜色；所述植物优选为双子叶植物，所述双子叶植物包括苜蓿、大豆；优选的，所述苜蓿为蒺藜苜蓿或紫花苜蓿。
4.权利要求1所述基因或权利要求2所述生物材料在调控植物种子大小或调控植物种子重量中的应用。
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【专利技术属性】
技术研发人员：张志强，陈崎，石凤翎，代蕊，爽爽，霍晓伟，栗振义，张岩，
申请(专利权)人：内蒙古农业大学，
类型：发明
国别省市：
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