【技术实现步骤摘要】
本申请涉及生物医药及生产工艺，具体涉及一种一锅法合成3',3'位二聚亚磷酰胺的工艺。
技术介绍
1、针对不同种类核酸的功能和作用机制开展具有疾病治疗功能的核酸药物研究成为当前新药开发的热门领域。核酸药物具有治疗效率高、药物毒性小、特异性强和应用领域广等突出优点，有望成为继小分子化学药和抗体类药物后第三大类型药物，未来开发和应用前景广阔。
2、传统的小分子化药和抗体药物多是通过与靶点蛋白结合发挥作用，但是二者的研发受到靶点蛋白可成药性（druggable）的限制，据 nature报道，人类基因组编码的约20,000种蛋白质中，仅有3,000种是可成药的，且目前只有700种有相应的药物研发出来；而且抗体药物通常只能针对细胞膜和细胞外蛋白发挥作用；而核酸类药物是通过与蛋白质表达相关的基因进行调节，对细胞内外和细胞膜蛋白均可发挥调节作用，而且多数核酸类药物的作用基础是碱基互补配对原则，只需知道靶基因的碱基序列，核酸药物的序列设计就较为容易。
3、在序列合成过程中，除去常规的核酸序列以后，在5’末端会有相应的修饰和改变，5’磷酸双核苷就是一种主要的研究方向，该方案需要合成关键原料3'，3'位二聚亚磷酰胺，该物质存在合成难度大，收率低，纯化难度大的一系列问题。
4、相关技术中在合成3'，3'位二聚亚磷酰胺时，存在以下问题：
5、 （1）需要用对硝基苯砜作为活化剂，增加了反应步，同时需要纯化该中间体，增大了反应的放大难度；
6、 （2）最终产品需要层析柱进行纯化才能获得合格产品，无法
7、 （3）分离收率只有7%，收率过低。
8、因此，研发一种合成工艺简单、收率高、纯化难度低、能够快速有效的合成大量原料的3',3'位二聚亚磷酰胺的方案迫在眉睫。
技术实现思路
1、针对现有技术存在的不足，本申请提供了一种一锅法合成3',3'位二聚亚磷酰胺的工艺。
2、本申请提供一种一锅法合成3',3'位二聚亚磷酰胺的工艺，采用如下技术方案：
3、一种一锅法合成3',3'位二聚亚磷酰胺的工艺，合成步骤如下：
4、
5、其中，
6、b为天然的、非天然的或修饰的碱基；优选地，b为胞嘧啶、尿嘧啶、胸腺嘧啶、腺嘌呤、鸟嘌呤或次黄嘌呤；
7、y为乙酰基、苯甲酰基、异丁酰基、二甲基甲酰氨基或氢；
8、x为氢、羟基、氟、甲氧基、甲氧乙基、叠氮、炔丙氧基、叔丁基二甲基硅基保护的羟基或三异丙基甲硅烷氧基甲基保护的羟基；
9、r为n,n-二甲基氨基、n,n-二乙基氨基、n,n-二异丙基氨基、四氢吡咯基、甲氧基、乙氧基、甲硫基、乙硫基、2-氰基乙氧基或2-氰基乙硫基。
10、一种一锅法合成3',3'位二聚亚磷酰胺的工艺，合成步骤如下：将式1所示的化合物溶于反应溶剂中，加入磷源、碱进行反应，得到中间体；将亲核试剂溶于反应溶剂中，加入至中间体中进行反应后，萃取，得到式2所示的3',3'位二聚亚磷酰胺。
11、优选的，中间体的制备步骤如下：式1所示的化合物与碱进行反应后，在惰性气氛下，加入磷源进行反应，得到中间体。
12、优选的，加入磷源进行反应的步骤如下：在-20℃~0℃下，滴加磷源，滴加完毕后，在-20℃~0℃下进行反应10~30分钟，升温至20℃~25℃进行反应2~4小时。
13、优选的，磷源为三氯化磷。
14、优选的，碱为三乙胺、二异丙基乙胺、吡啶中至少一种。
15、优选的，加入亲核试剂进行反应的步骤如下：在-20℃~0℃下滴加亲核试剂，滴加完毕后，调节温度至0℃~25℃，并进行反应2~4小时。
16、优选的，亲核试剂为n,n-二甲基胺、n,n-二乙基胺、n,n-二异丙基胺、四氢吡咯、甲醇、乙醇、甲硫醇、乙硫醇、3-羟基丙腈或3-巯基丙腈中至少一种。
17、优选的，萃取所用的溶剂为正庚烷。
18、优选的，反应溶剂为乙腈、乙酸乙酯、二氯甲烷、丙酮、正庚烷、正己烷、n,n-二甲基甲酰胺、甲苯、四氢呋喃中至少一种。
19、优选的，式1所示的化合物、磷源、碱的摩尔比为1:（1~1.2）:（3~5）；式1所示的化合物与亲核试剂的摩尔比为1:（1~3）。
20、本申请公开了一种一锅法合成3',3'位二聚亚磷酰胺的工艺，通过两步连续的亲核取代反应和一步重结晶得到高纯度的二聚亚磷酰胺，本工艺对底物的适配性好，适用于合成各类二聚亚磷酰胺。
21、在一个具体的可实施方案中，一种一锅法合成3',3'位二聚亚磷酰胺的工艺，合成工艺步骤如下：
22、将核苷（式1所示的化合物）溶解于10倍体积的溶剂中，加入碱，在惰性气氛保护下将反应液温度（内温）降低到-20℃后，缓慢滴加磷源，期间控制温度不高于0℃，滴加完成后，在-20℃条件下反应10~30分钟后，升温至20℃~25℃进行反应2~4小时；反应完成后，降温至-20℃；将亲核试剂溶于溶剂中，并慢慢滴加至反应体系中，期间控制温度不高于0℃，滴加完成后调节温度至0℃~25℃后进行反应2~4小时。通过液相色谱判断反应完成后过滤除去白色的固体，加入10倍体积正庚烷萃取两次。浓缩除去溶剂。将固体用2倍体积的正庚烷重结晶，过滤获得产品3',3'位二聚亚磷酰胺（式2所示的化合物）。
23、优选的，反应溶剂为乙腈、乙酸乙酯、二氯甲烷、丙酮、正庚烷、正己烷、n,n-二甲基甲酰胺、甲苯、四氢呋喃中至少一种。
24、优选的，磷源为三氯化磷。
25、优选的，碱为三乙胺、二异丙基乙胺中一种或两种。
26、优选的，亲核试剂为n,n-二甲基胺、n,n-二乙基胺、n,n-二异丙基胺、四氢吡咯、甲醇、乙醇、甲硫醇、乙硫醇、3-羟基丙腈或3-巯基丙腈中至少一种。
27、优选的，式1所示的化合物、磷源、碱的摩尔比为1:（1~1.2）:（3~5）；式1所示的化合物与亲核试剂的摩尔比为1:（1~3）。
28、本申请选择用三氯化磷作为磷源，三乙胺作为碱，在-20℃~0℃条件下合成二聚中间体，在反应进行后加入亲核试剂做后续反应，反应后通过萃取的方式获得高纯度产品；避免了使用层析技术纯化，且能进行公斤级以上的放大生产。
29、综上所述，本申请具有以下有益效果：
30、本申请提供的一种一锅法合成3',3'位二聚亚磷酰胺的工艺，大大提高了收率，简化了反应的步骤和反应后处理过程，大大的降低了成本，缩短了反应时间和生产周期，能够实现规模化的放大生产。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种一锅法合成3',3'位二聚亚磷酰胺的工艺，其特征在于，合成步骤如下：
2.根据权利要求1所述的一种一锅法合成3',3'位二聚亚磷酰胺的工艺，其特征在于，合成步骤如下：将式1所示的化合物溶于反应溶剂中，加入磷源、碱进行反应，得到中间体；
3.根据权利要求2所述的一种一锅法合成3',3'位二聚亚磷酰胺的工艺，其特征在于，中间体的制备步骤如下：式1所示的化合物与碱进行反应后，在惰性气氛下，加入磷源进行反应，得到中间体。
4.根据权利要求3所述的一种一锅法合成3',3'位二聚亚磷酰胺的工艺，其特征在于，加入磷源进行反应的步骤如下：在-20℃~0℃下，滴加磷源，滴加完毕后，在-20℃~0℃下进行反应10~30分钟，升温至20℃~25℃进行反应2~4小时。
5.根据权利要求2或3或4所述的一种一锅法合成3',3'位二聚亚磷酰胺的工艺，其特征在于：磷源为三氯化磷。
6.根据权利要求2或3所述的一种一锅法合成3',3'位二聚亚磷酰胺的工艺，其特征在于：碱为三乙胺、二异丙基乙胺、吡啶中至少一种。
7.根据权利要求2所述
8.根据权利要求2或7所述的一种一锅法合成3',3'位二聚亚磷酰胺的工艺，其特征在于：亲核试剂为N,N-二甲基胺、N,N-二乙基胺、N,N-二异丙基胺、四氢吡咯、甲醇、乙醇、甲硫醇、乙硫醇、3-羟基丙腈或3-巯基丙腈中至少一种。
9.根据权利要求2所述的一种一锅法合成3',3'位二聚亚磷酰胺的工艺，其特征在于：式1所示的化合物、磷源、碱的摩尔比为1:（1~1.2）:（3~5）；式1所示的化合物与亲核试剂的摩尔比为1:（1~3）。
10.根据权利要求2所述的一种一锅法合成3',3'位二聚亚磷酰胺的工艺，其特征在于：反应溶剂为乙腈、乙酸乙酯、二氯甲烷、丙酮、正庚烷、正己烷、N,N-二甲基甲酰胺、甲苯、四氢呋喃中至少一种。
...【技术特征摘要】
1.一种一锅法合成3',3'位二聚亚磷酰胺的工艺，其特征在于，合成步骤如下：
2.根据权利要求1所述的一种一锅法合成3',3'位二聚亚磷酰胺的工艺，其特征在于，合成步骤如下：将式1所示的化合物溶于反应溶剂中，加入磷源、碱进行反应，得到中间体；
3.根据权利要求2所述的一种一锅法合成3',3'位二聚亚磷酰胺的工艺，其特征在于，中间体的制备步骤如下：式1所示的化合物与碱进行反应后，在惰性气氛下，加入磷源进行反应，得到中间体。
4.根据权利要求3所述的一种一锅法合成3',3'位二聚亚磷酰胺的工艺，其特征在于，加入磷源进行反应的步骤如下：在-20℃~0℃下，滴加磷源，滴加完毕后，在-20℃~0℃下进行反应10~30分钟，升温至20℃~25℃进行反应2~4小时。
5.根据权利要求2或3或4所述的一种一锅法合成3',3'位二聚亚磷酰胺的工艺，其特征在于：磷源为三氯化磷。
6.根据权利要求2或3所述的一种一锅法合成3',3'位二聚亚磷酰胺的工艺，其特征在于：碱为...
【专利技术属性】
技术研发人员：童坤，王宇琦，
申请(专利权)人：江苏申基生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。