【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及多肽和免疫学，尤其涉及特异性lp-pla2抗原表位肽、抗原、抗体、应用及试剂盒。
技术介绍
1、临床上检测lp-pla2(人体内的脂蛋白相关磷脂酶a2)含量的方法原理主要是免疫学测定和酶学生化法。酶学生化法主要是运用具有活性的脂蛋白相关磷脂酶a2催化外加的底物类似物，产生能够被检测的物质，通过检测该物质的变化量，计算脂蛋白相关磷脂酶a2的活性。此方法操作方便，受环境因素影响比较少但对底物的可溶性要求较高，试剂可保存时间短，受其样本中他物质干扰较大。免疫比浊法是通过lp-pla2抗体(或单抗)与乳胶颗粒偶联，采用乳胶增强比浊来测定样本中lp-pla2的含量，具有不需要处理样本，操作简单，重复性好，且可在全自动化蛋白分析仪、生化分析仪、分光光度计上测定。
2、目前lp-pla2免疫比浊法试剂盒中所用抗体几乎为重组抗原所产生的单(多)克隆抗体，lp-pla2在血液中绝大部分与脂蛋白相结合。然而，基于重组抗原产生的单(多)克隆抗体所识别的表位肽可能被覆盖，使这些单(多)克隆抗体无法准确识别血液中天然的lp-pla2蛋白，测试过程中受环境影响可能导致样本中酶失活，导致准确度不稳定。
3、因此，现有技术还有待于进一步的改进和提升。
技术实现思路
1、鉴于上述现有技术的不足，本专利技术提供了一种特异性lp-pla2抗原表位肽，用该抗原表位肽制备的lp-pla2特异性抗原和相应的单克隆抗体或多克隆抗体，其在制备lp-pla2体外诊断试剂盒上的用途，以及检测人血
2、具体来说，本专利技术提供了如下的技术方案：
3、第一方面，一种特异性lp-pla2抗原表位肽，其中，所述特异性lp-pla2抗原表位肽为：如seq id no：1～3任一氨基酸序列所示的多肽。
4、第二方面，一种特异性lp-pla2抗原表位肽，其中，所述特异性lp-pla2抗原表位肽为：如seq id no.1～3氨基酸序列所示的多肽中的任意两种组合。
5、本专利技术中，运用生物信息方法根据ncbi上blast软件分析人lp-pla2在人类、兔子及小鼠中的保守性。再通过kolaskar&tongaonkar预测算法工具、iedb antibody epitopeprediction、abcpred prediction server、bcepred prediction server、bepipred 1.0bserver、dnastar等软件对人lp-pla2抗原表位进行综合预测分析，并排除了lp-pla2的信号肽、糖基化位点、脂蛋白位点和多态性位点后，进行综合预测分析，并通过试验验证的具有高特异性的多肽段。示例性地，本专利技术中，所述筛选出的多肽段如下：
6、peptide 1：79-91(13aa)
7、序列为：79tflrlyypsqdnd 91
8、peptide 2：133-145(13aa)
9、序列为：133nwnsplrpgekyp 145
10、peptide 3：330-342(13aa)
11、序列为：330kmkkcyspdkerk 342。
12、第三方面，一种lp-pla2抗原，其中，所述lp-pla2抗原包含第一方面所述的特异性lp-pla2抗原表位肽。
13、第四方面，一种lp-pla2抗体，其中，所述lp-pla2抗体是由第三方面所述的lp-pla2抗原制备而成的单克隆抗体或多克隆抗体。
14、第五方面，所述的lp-pla2抗体，在制备lp-pla2体外诊断试剂盒中的用途。
15、第六方面，一种检测人血清中lp-pla2含量的试剂盒，其中，包含：样本稀释液、缓冲溶液、抗体乳胶试剂和校准品；所述抗体乳胶试剂中的抗体为第五方面所述的抗体。
16、根据本专利技术提供的lp-pla2免疫比浊法检测试剂盒的应用，尤其是采用该试剂盒，通过全自动特定蛋白分析仪或者生化分析仪进行lp-pla2检测的方法，操作简便、耗时短，避免人为操作的误差。
17、作为优选技术方案，所述的试剂盒，其中，所述样本稀释剂包含样本解离剂、防腐剂以及消泡剂；所述样本解离剂选自tris、edta、氯化钠中的一种或多种。
18、作为优选技术方案，所述的试剂盒，其中，所述的防腐剂选自苯甲酸钠、硝酸盐、亚硝酸盐、二氧化硫中的一种或多种；所述消泡剂选自有机硅类消泡剂、表面活性剂类消泡剂、矿物油类消泡剂中的一种或多种。
19、作为优选技术方案，所述的试剂盒，其中，所述缓冲溶液为ph为6.5-7.5的缓冲液主要包含：无机盐、加速剂、防腐剂、消泡剂，其中，所述无机盐可以是十二水合磷酸氢二钠、二水合磷酸二氢钠、氯化钠的一种或多种；所述加速剂包括曲拉通-x100、吐温-20的一种或多种；所属防腐剂包括山梨酸钠、苯甲酸钠、叠氮化钠、亚硝酸钠、proclin300的一种或多种；所述的消泡剂包括有机硅类消泡剂、表面活性剂类消泡剂、矿物油类消泡剂中的一种或多种。
20、作为优选技术方案，所述的试剂盒，其中，抗体乳胶试剂包括：耐脂蛋白抗人lp-pla2单(多)克隆抗体乳胶颗粒、稳定剂(无关蛋白、无机盐、表面活性剂、助悬剂、抗氧化剂)、防腐剂(山梨酸钠、苯甲酸钠、叠氮化钠、亚硝酸钠)、消泡剂有机硅类消泡剂、表面活性剂类消泡剂、矿物油类消泡剂中的一种或多种。
21、作为优选技术方案，所述的试剂盒，其中，所述抗体乳胶试剂的制备方法包括：
22、将羧基微球加入到hepes溶液中，得到乳胶溶液；
23、将lp-pla2抗体分散至所述乳胶溶液中，震荡反应，得到前驱液；
24、将碳二亚胺盐酸盐溶液分散至所述前驱液中，震荡反应，得到反应产物；
25、对所述反应产物进行纯化、重悬处理，得到所述抗体乳胶试剂。
26、作为优选技术方案，所述的试剂盒，其中，所述震荡反应的反应温度为35-40℃，反应时间为30-60min。
27、有益效果：与现有技术相比，本专利技术提供的特异性lp-pla2抗原表位肽具有良好的抗原性，用其制备的抗原(免疫原)免疫动物能够产生高度特异性的单克隆抗体和多克隆抗体。该抗体制备的抗体乳胶试剂与血液中的其它蛋白没有交叉反应，且对脂蛋白结合状态和非脂蛋白结合状态的lp-pla2蛋白具有相同的亲和力，提高检测特异性、准确度；稳定性好。采用本专利技术所提供的试剂盒，通过全自动特定蛋白分析仪或者生化分析仪进行lp-pla2检测的方法，操作简便、耗时短，避免人为操作的误差。
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1.一种特异性LP-PLA2抗原表位肽，其特征在于，所述特异性LP-PLA2抗原表位肽为：如SEQ ID NO：1～3任一氨基酸序列所示的多肽。
2.一种特异性LP-PLA2抗原表位肽，其特征在于，所述特异性LP-PLA2抗原表位肽为：如SEQ ID NO.1～3氨基酸序列所示的多肽中的任意两种组合。
3.一种LP-PLA2抗原，其特征在于，所述LP-PLA2抗原包含权利要求1所述的特异性LP-PLA2抗原表位肽。
4.一种LP-PLA2抗体，其特征在于，所述LP-PLA2抗体是由权利要求3所述的LP-PLA2抗原制备而成的单克隆抗体或多克隆抗体。
5.如权利要求4所述的LP-PLA2抗体，在制备Lp-PLA2体外诊断试剂盒中的用途。
6.一种检测人血清中LP-PLA2含量的试剂盒，其特征在于，包含：样本稀释液、缓冲溶液、抗体乳胶试剂和校准品；所述抗体乳胶试剂中的抗体为权利要求4所述的抗体。
7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述样本稀释剂包含样本解离剂、防腐剂以及消泡剂；所述样本解离剂选自Tris
8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述的防腐剂选自苯甲酸钠、硝酸盐、亚硝酸盐和二氧化硫中的一种或多种；所述消泡剂选自有机硅类消泡剂、表面活性剂类消泡剂和矿物油类消泡剂中的一种或多种。
9.据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述抗体乳胶试剂的制备方法包括：
10.据权利要求9所述的试剂盒，其特征在于，所述震荡反应的反应温度为35-40℃，反应时间为30-60min。
...【技术特征摘要】
1.一种特异性lp-pla2抗原表位肽，其特征在于，所述特异性lp-pla2抗原表位肽为：如seq id no：1～3任一氨基酸序列所示的多肽。
2.一种特异性lp-pla2抗原表位肽，其特征在于，所述特异性lp-pla2抗原表位肽为：如seq id no.1～3氨基酸序列所示的多肽中的任意两种组合。
3.一种lp-pla2抗原，其特征在于，所述lp-pla2抗原包含权利要求1所述的特异性lp-pla2抗原表位肽。
4.一种lp-pla2抗体，其特征在于，所述lp-pla2抗体是由权利要求3所述的lp-pla2抗原制备而成的单克隆抗体或多克隆抗体。
5.如权利要求4所述的lp-pla2抗体，在制备lp-pla2体外诊断试剂盒中的用途。
6.一种检测人血清中...
【专利技术属性】
技术研发人员：安瑞，朱漩，曲文蕊，
申请(专利权)人：深圳市锦瑞生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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