【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，具体的是涉及一种类黄酮多羟基位点的糖基化方法。
技术介绍
1、类黄酮是一类广泛存在于自然界中的活性天然化合物，根据其基本骨架中的c3环结构差异，类黄酮被分为黄酮、黄酮醇、黄烷酮、异黄酮等多种类型。现代药理学结果表明类黄酮具有抗氧化、抗炎、抗病毒等诸多药理活性，是寻找新药开发先导化合物的来源宝库。但天然存在的类黄酮化合物往往具有水溶性差、稳定性低、选择性较差等缺点，极大限制了适应性新药的寻找和开发。糖基化是次生代谢产物结构修饰的重要形式，是导致类黄酮化合物结构多样性的主要因素之一，在临床上，多数黄酮苷相较于苷元具有更小的毒副作用及更高的稳定性和生物利用度。因此对一些黄酮进行糖基化修饰将有助于其在临床上开拓更好的应用方向。
2、近年来，糖基化修饰的化学和生物合成法研究取得了较大进展；但化学糖基化反应存在副产物和中间体多、区域选择性和立体选择性较差、收率低、保护脱保护步骤繁琐、污染大等缺点，此外，低原子效能和部分催化剂的昂贵价格也使得化学合成法在大规模生产糖苷中存在很多短板。相比而言，利用酶催化的生物合成法不仅具有立体和区域选择性，而且操作步骤相对简单，对环境污染也更小，符合绿色化学理念，因此，利用工具酶催化合成产物的生物合成逐步成为该领域的研究焦点。类黄酮-3,7,4′-二-o-葡萄糖基转移酶，是一种以尿苷二磷酸(uridine diphosphate，udp)活化的糖分子作为糖基供体的糖基转移酶(udp-glycosyltransferase，ugt)，它能专一性的催化类黄酮a环的3位和7位，以及b
技术实现思路
1、本专利技术主要针对上述技术问题，提供一种催化生成类黄酮-3,7,4′-三-o-葡萄糖苷的糖基转移酶基因，以及生物合成类黄酮-3,7,4′-三-o-葡萄糖苷的方法，以解决现存化学合成类黄酮-3,7,4′-三-o-葡萄糖苷系列化合物的不足。
2、具体地，本专利技术提供如下技术方案：
3、一方面，本专利技术提供一种糖基转移酶基因，其序列为编码包含如seq id no.4所示氨基酸序列的核苷酸序列，或与编码包含如seq id no.4所示氨基酸序列的核苷酸序列全互补配对的序列。
4、在一个优选的实施例中，上述糖基转移酶基因序列为编码包含如seq id no.3所示氨基酸序列的核苷酸序列，或与编码包含如seq id no.3所示氨基酸序列的核苷酸序列全互补配对的序列。
5、在一个优选的实施例中，上述糖基转移酶基因序列为编码包含如seq id no.2所示氨基酸序列的核苷酸序列，或与编码包含如seq id no.2所示氨基酸序列的核苷酸序列全互补配对的序列。
6、在一个优选的实施例中，上述糖基转移酶基因序列为编码如seq id no.2所示氨基酸序列的核苷酸序列，或与编码如seq id no.2所示氨基酸序列的核苷酸序列全互补配对的序列。
7、在一个优选的实施例中，上述糖基转移酶基因的核苷酸序列如seq id no:1所示，或与seq id no.1所示序列完全互补配对的核苷酸序列。
8、另一方面，本专利技术提供一种糖基转移酶，其氨基酸序列包含如seq id no.4所示序列。
9、在一个优选的实施例中，上述糖基转移酶的氨基酸序列包含如seq id no.3所示序列。
10、在一个优选的实施例中，上述糖基转移酶的氨基酸序列为包含如seq id no.2的序列。
11、在一个优选的实施例中，上述糖基转移酶的氨基酸序列为如seq id no.2所示序列。
12、另一方面，本专利技术提供一种糖基转移酶基因在合成类黄酮-3,7,4′-三-o-葡萄糖苷系列糖苷类化合物中的应用，所述糖基转移酶基因的核酸序列为编码包含如seq idno.4所示氨基酸序列的核苷酸序列，或与编码包含如seq id no.4所示氨基酸序列的核苷酸序列全互补配对的序列。
13、在一个优选的实施例中，上述糖基转移酶基因序列为编码包含如seq id no.3所示氨基酸序列的核苷酸序列，或与编码包含如seq id no.3所示氨基酸序列的核苷酸序列全互补配对的序列。
14、在一个优选的实施例中，上述糖基转移酶基因序列为编码包含如seq id no.2所示氨基酸序列的核苷酸序列，或与编码包含如seq id no.2所示氨基酸序列的核苷酸序列全互补配对的序列。
15、在一个优选的实施例中，上述糖基转移酶基因序列为编码如seq id no.2所示氨基酸序列的核苷酸序列，或与编码如seq id no.2所示氨基酸序列的核苷酸序列全互补配对的序列。
16、在一个优选的实施例中，上述糖基转移酶基因的核苷酸序列如seq id no:1所示，或与seq id no.1所示序列完全互补配对的核苷酸序列。
17、另一方面，本专利技术提供一种糖基转移酶在合成类黄酮-3,7,4′-三-o-葡萄糖苷系列糖苷类化合物中的应用，所述糖基转移酶的氨基酸序列包含如seq id no.4所示序列。
18、在一个优选的实施例中，上述糖基转移酶的氨基酸序列包含如seq id no.3所示序列。
19、在一个优选的实施例中，上述糖基转移酶的氨基酸序列包含如seq id no.2所示序列。
20、在一个优选的实施例中，上述糖基转移酶的氨基酸序列为如seq id no.3所示序列。
21、另一方面，本专利技术提供一种合成类黄酮-3,7,4′-三-o-葡萄糖苷系列糖苷类化合物方法，所述方法包含如下步骤：
22、1)获得包含如seq id no.4所示氨基酸序列的糖基转移酶；
23、2)利用步骤1)中的糖基转移酶在酶活反应体系中催化合成类黄酮-3,7,4′-三-o-葡萄糖苷系列糖苷类化合物。
24、在一个优选的实施例中，通过原核表达获得上述糖基转移酶。
25、在一个优选的实施例中，通过化学合成获得上述糖基转移酶。
26、在一个优选的实施例中，酶活反应体系中含有上述糖基转移酶、udp-glc以及类黄酮化合物。
27、在一个优选实施例中，酶活反应体系中还含有二价阳离子。
28、在一个优选实施例中，酶活反应体系的反应温度为4-60℃。
29、在一个优选实施例中，酶活反应体系的ph为8.0-10.0。
30、在一个优选实施例中，酶活反应体系具体为10μg纯化糖基转移酶、5mm mg2+、14mmβ-巯基乙醇、5mm udp-glc、0.5mm类黄酮化合物，用50mm，ph＝9.0的tris-hcl缓冲液补充至200μl，于37℃反应至少3h。
31、在一个优选实施例中，酶活反应体系为上述反应体系的各组分含量的等比例扩大或缩小，本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种糖基转移酶基因，其序列为编码包含如SEQ ID NO.4所示氨基酸序列的核苷酸序列，或与编码包含如SEQ ID NO.4所示氨基酸序列的核苷酸序列全互补配对的序列。
2.一种糖基转移酶，其氨基酸序列包含如SEQ ID NO.4所示序列。
3.一种糖基转移酶基因在合成类黄酮-3,7,4′-三-O-葡萄糖苷系列糖苷类化合物中的应用，所述糖基转移酶基因的序列为编码包含如SEQ ID NO.4所示氨基酸序列的核苷酸序列，或与编码包含如SEQ ID NO.4所示氨基酸序列的核苷酸序列全互补配对的序列。
4.一种糖基转移酶在合成类黄酮-3,7,4′-三-O-葡萄糖苷系列糖苷类化合物中的应用，所述糖基转移酶序列包含如SEQ ID NO.4所示序列。
5.一种合成类黄酮-3,7,4′-三-O-系列糖苷类化合物方法，所述方法包含如下步骤：
6.如权利要求5所述的一种合成类黄酮-3,7,4′-三-O-葡萄糖苷系列糖苷类化合物方法，其特征在于，步骤1)中通过原核表达获得糖基转移酶或通过化学合成获得糖基转移酶。
7.如权利要
8.如权利要求5所述的一种合成类黄酮-3,7,4′-三-O-糖苷系列糖苷类化合物方法，其特征在于，步骤2)中酶活反应体系中还含有二价阳离子。
9.如权利要求5所述的一种合成类黄酮-3,7,4′-三-O-糖苷系列糖苷类化合物方法，其特征在于，步骤2)中酶活反应体系的反应温度为4-60℃。
10.如权利要求5所述的一种合成类黄酮-3,7,4′-三-O-糖苷系列糖苷类化合物方法，其特征在于，步骤2)中酶活反应体系的PH为8.0-10.0。
...【技术特征摘要】
1.一种糖基转移酶基因，其序列为编码包含如seq id no.4所示氨基酸序列的核苷酸序列，或与编码包含如seq id no.4所示氨基酸序列的核苷酸序列全互补配对的序列。
2.一种糖基转移酶，其氨基酸序列包含如seq id no.4所示序列。
3.一种糖基转移酶基因在合成类黄酮-3,7,4′-三-o-葡萄糖苷系列糖苷类化合物中的应用，所述糖基转移酶基因的序列为编码包含如seq id no.4所示氨基酸序列的核苷酸序列，或与编码包含如seq id no.4所示氨基酸序列的核苷酸序列全互补配对的序列。
4.一种糖基转移酶在合成类黄酮-3,7,4′-三-o-葡萄糖苷系列糖苷类化合物中的应用，所述糖基转移酶序列包含如seq id no.4所示序列。
5.一种合成类黄酮-3,7,4′-三-o-系列糖苷类化合物方法，所述方法包含如下步骤：
6.如权利要求5所...
【专利技术属性】
技术研发人员：易善勇，王威，李国四，徐涛，韩邦兴，姜雪萍，陆海波，
申请(专利权)人：皖西学院，
类型：发明
国别省市：
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