【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药，涉及一种卵黄抗体igy的提取方法。
技术介绍
1、卵黄免疫球蛋白，又称为卵黄抗体，是禽类血清和蛋黄中的主要免疫球蛋白，具有抗体单一、产量高、免疫诊断亲和力高的优点，在抗菌和抗病毒方面具有特殊优势，不会与哺乳动物抗原发生交叉反应或激活哺乳动物补体系统，能够为人或动物提供有效的被动免疫。
2、鸡蛋作为抗体的有效来源已得到广泛的认可，每毫升卵黄液中igy的含量可达8-20 mg，然而，卵黄中约含有30%的脂类，并以脂蛋白的形式存在，而igy为水溶性蛋白，因此卵黄抗体提纯需要除去大量脂类。现有技术对卵黄抗体中脂类的去除方法主要包括聚乙二醇沉淀法、氯仿抽提法、水稀释法和冻融法，去除脂类的粗提液可通过超滤法、无机物沉淀、层析等方法进一步提纯，然而，目前的提取方法中需要大量使用对环境造成污染的试剂（如硫酸铵、氯仿、酸类），因此急需探索工艺简单、时间成本短且环境优好的卵黄抗体提纯方法。
技术实现思路
1、本专利技术要解决的技术问题是针对现有卵黄抗体igy提纯方法的不足，提供一种工艺简单、提取率高、稳定性好且适于大规模制备生产的卵黄抗体提取方法。
2、本专利技术在现有的水稀释法联合超滤法的卵黄抗体提纯技术进行改进，提高了卵黄抗体的回收率，以期降低生产成本，提高生产效率。
3、本专利技术提供了一种卵黄抗体igy的提取方法，所述的方法包括以下步骤：
4、（1）获取分离的蛋黄；
5、（2）准备禽蛋质量8-10倍的去离子水、
6、（3）将步骤（2）准备的去离子水、无水乙酸钠、冰醋酸和步骤（1）获取的蛋黄加入容器，调节混合物的ph至5.0-5.5，密封室温静置过夜；
7、（4）配置壳聚糖溶液、海藻酸钠溶液、氯化钙溶液、多聚磷酸钠溶液，加入步骤（3）获得的静置液，静置；
8、（5）弃沉淀，过滤浓缩上清液，调节ph为7.0-7.2。
9、上述步骤不必然按照数字依次发生，例如步骤（1）和步骤（2）的顺序可以交换，步骤（4）中，配置壳聚糖溶液、海藻酸钠溶液、氯化钙溶液、多聚磷酸钠溶液的部分，可以先于步骤（1）完成。
10、优选地，步骤（1）中，所述的蛋是禽蛋，获取蛋黄过程中去除蛋清。
11、优选地，步骤（2）中，去离子水是禽蛋质量的8-9倍；无水乙酸钠是水和禽蛋总质量的0.57-0.59%；冰醋酸是水和禽蛋总质量的0.24-0.32%。
12、优选地，步骤（3）中，去离子水、无水乙酸钠、冰醋酸和步骤（1）获取的蛋黄依次加入容器；混合物的ph是5.2-5.3；过夜是指12-30h。
13、优选地，壳聚糖溶液质量浓度为1-3%，添加比例为1.5-6%。
14、优选地，海藻酸钠溶液的质量浓度为1-3%，添加比例为0.5-4%。
15、优选地，氯化钙溶液的质量浓度为7-10%，添加比例为0.1-0.4%。
16、优选地，多聚磷酸钠溶液的质量浓度为10-15%，添加比例为0.2-0.8%。
17、优选地，步骤（4）中，将壳聚糖溶液、海藻酸钠溶液，氯化钙溶液，多聚磷酸钠溶液依次缓慢加入静置液
18、优选地，步骤（5）中，使用膜超滤设备过滤浓缩上清液；使用质量浓度2-4%氢氧化钠溶液调节ph。
19、本专利技术的方法具体为：
20、用40℃-50℃ 的自来水浸泡鸡蛋5分钟，清洗蛋壳外表面至无肉眼可见的杂物。用75% 酒精浸泡鸡蛋消毒5分钟后，将鸡蛋转移至消毒过的托盘内。用不锈钢敲蛋器将消毒后的鸡蛋在蛋体1/3处敲开，分离蛋清和蛋黄，将蛋黄放至消毒后的不锈钢桶内，记录收集到的蛋黄重量。先取9倍鸡蛋质量的去离子水，后加无水乙酸钠至水与鸡蛋的总质量的0.574%，再加冰醋酸至总质量0.243%， 后加入蛋黄，最后用冰醋酸调节ph至5.2左右后，密封室温静置24h。
21、配置质量浓度2%壳聚糖溶液、2%海藻酸钠溶液，10%氯化钙溶液，10%多聚磷酸钠溶液，以一定添加比例将上述絮凝剂按顺序缓慢添加至上一步骤的静置液中，密闭沉淀12-48h。
22、其中，所述2%壳聚糖溶液的添加比例为1.5-6%。
23、其中，所述2%海藻酸钠溶液的添加比例为0.5-4%。
24、其中，所述10%氯化钙溶液的添加比例为0.1-0.4%。
25、其中，所述10%多聚磷酸钠溶液的添加比例为0.2-0.8%。弃去沉淀，使用膜超滤设备过滤浓缩上清液，至重量为收集到的上清液的十分之一左右。使用4%氢氧化钠溶液调节卵黄抗体提取液ph至7.00-7.20，用消毒容器分装后置-20℃储藏。
26、本专利技术的提取方法，能够对现有水稀释法联合超滤法的卵黄抗体igy提纯技术进行改进，降低了生成成本，提高了生产率。在水稀释法的基础上，加入了絮凝沉降步骤，改善了现有水稀释法短时间内依靠重力自然沉淀卵黄微细回收抗体上清液的抗体回收时间长、纯度低的缺点。
27、相应的，本专利技术提供了一种卵黄抗体igy，所述的卵黄抗体igy使用上述的提取方法制备。
28、本专利技术的优点在于：
29、（1）本专利技术在水稀释法的基础上，加入了絮凝沉降步骤，改善了现有水稀释法短时间内依靠重力自然沉淀卵黄微细回收抗体上清液的抗体回收时间长、纯度低的缺点。
30、（2）本专利技术从实际生产出发，对现有水稀释法联合超滤法的卵黄抗体igy提纯技术进行改进，降低了生成成本，提高了生产率。
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1.一种卵黄抗体IgY的提取方法，其特征在于，所述的方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述卵黄抗体IgY的提取方法，其特征在于，步骤（1）中，所述的蛋是禽蛋，获取蛋黄过程中去除蛋清。
3.根据权利要求1所述卵黄抗体IgY的提取方法，其特征在于，步骤（2）中，去离子水是禽蛋质量的8-9倍；
4.根据权利要求1所述卵黄抗体IgY的提取方法，其特征在于，步骤（3）中，去离子水、无水乙酸钠、冰醋酸和步骤（1）获取的蛋黄依次加入容器；
5.根据权利要求1所述卵黄抗体IgY的提取方法，其特征在于，步骤（4）中，壳聚糖溶液质量浓度为1-3%，添加比例为1.5-6%；
6.根据权利要求5所述卵黄抗体IgY的提取方法，其特征在于，步骤（4）中，将壳聚糖溶液、海藻酸钠溶液，氯化钙溶液，多聚磷酸钠溶液依次缓慢加入静置液。
7.根据权利要求1所述卵黄抗体IgY的提取方法，其特征在于，步骤（5）中，使用膜超滤设备过滤浓缩上清液；
8.权利要求1-7中任意一项所述的卵黄抗体IgY的提取方法的应用，其特征在于，联合水稀释法
9.根据权利要求8所述的卵黄抗体IgY的提取方法的应用，其特征在于，在水稀释法的基础上，加入了絮凝沉降步骤，缩短了抗体回收时间，提高了抗体的纯度。
10.一种卵黄抗体IgY，其特征在于，所述的卵黄抗体IgY使用权利要求1-7中任意一项的提取方法制备。
...【技术特征摘要】
1.一种卵黄抗体igy的提取方法，其特征在于，所述的方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述卵黄抗体igy的提取方法，其特征在于，步骤（1）中，所述的蛋是禽蛋，获取蛋黄过程中去除蛋清。
3.根据权利要求1所述卵黄抗体igy的提取方法，其特征在于，步骤（2）中，去离子水是禽蛋质量的8-9倍；
4.根据权利要求1所述卵黄抗体igy的提取方法，其特征在于，步骤（3）中，去离子水、无水乙酸钠、冰醋酸和步骤（1）获取的蛋黄依次加入容器；
5.根据权利要求1所述卵黄抗体igy的提取方法，其特征在于，步骤（4）中，壳聚糖溶液质量浓度为1-3%，添加比例为1.5-6%；
6.根据权利要求5所述卵黄...
【专利技术属性】
技术研发人员：王琴，施裔磊，陆彬，徐艳，仲禺俊，
申请(专利权)人：上海美加净日化有限公司，
类型：发明
国别省市：
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